GeneTex超强WB发光底物
免疫印迹试验(Western blot)是利用抗体与抗原间的专一性结合来侦测特定蛋白质的表现,为现代生物化学、细胞生物学、免疫遗传学中常见的实验方法,也被广泛应用于蛋白表达水平的研究、抗体活性检测和早期疾病诊断等多个方面。
免疫印迹试验的技术是结合蛋白质胶体电泳 (gel electrophoresis)的高度解析力、抗体的专一性以及酵素的敏感性,使得科学家们得以在复合物中大海捞针般的寻找蛋白质的存在。一开始以电泳将蛋白质进行大小排列与分离,再利用电场将蛋白质转印到膜上,接着,拥有抗原表位的蛋白质分子就可被抗体(一抗)特异性识别并与之结合。在此基础上,酶或荧光标记的二抗再进一步识别并结合一抗,通过与底物反应显色来观察目标蛋白的表现。
Western blot若利用酵素反应呈色,由于受质的不同,显色的方法可区分为:
一、化学冷光法: Chemiluminescent-based signal detection。
二、直接呈色法:Colormetirc/Chromogen-based signal detection。
三、荧光呈色法:Fluorescent substrate-based signal detection。
发表文献上,又以化学冷光法为最常使用及最方便的呈色方法
化学冷光法(Chemiluminescent-based signal detection)的原理是利用二抗接上辣根过氧化物酶(HRP),在H2O2存在时,HRP会氧化化学发光物质鲁米诺(lumino,氨基苯二酰一肼)而发出冷光,加上化学增强剂的作用,冷光强度可以增大1,000倍以上。化学冷光法操作简便,只需将两种显色底物等体积混合,再将转印后的膜覆盖在上进行呈色反应,后续讯号侦测可藉由底片感光、显影、定影等冲洗步骤,或是自动化光学检测仪器来得到实验结果。
图一: 化学发光底物作用示意图
GeneTex 开发的Trident HRP substrate (化学发光底物)系列产品,原本仅供公司内实验室使用,因客户询问度高,且经过上万笔实验测试,2016年正式将其产品化,提供给客户使用。
GeneTex Trident HRP substrate系列产品优势:
1.灵敏度高:
优于市面产品(见图), 最高可检测到飞克 (femtogram ;10-15 g)级的蛋白
2.稳定性强:
A、B试剂单独存放28℃, 避光条件下可保存12个月
3.节约时间:
不需做条件优化, 入门新生立即可轻松上手
4.节省样品:
对于样品珍贵或是表达量少的蛋白, 仅需少量蛋白即可侦测
5. 背景值低:杂讯少, 讯号强
产品名
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Trident plus Western HRP Substrate
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Trident pico Western HRP Substrate
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Trident femto Western HRP Substrate
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货号
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GTX400006
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GTX17435
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GTX14698
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应用与特色
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一般日常操作
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长时间或多次曝光
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微量蛋白
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灵敏度
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皮克picogram
(10-10~10-12)
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皮克
picogram (10-12)
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飞克
femtogram (10-15)
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包装大小
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500 ml
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100 ml
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500 ml
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100 m
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200 ml
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人民币售价
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2,499
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999
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2,999
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1,899
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3,299
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图二:化学发光底物飞克级蛋白测试
图三:化学发光底物皮克级蛋白测试
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