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VE-821

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VE-821

货号：
IV0680

品牌：
Jinpan

VE-821

暂无详情
产品简介
别名 3-氨基-6-[4-(甲基磺酰基)苯基]-N-苯基-2-吡嗪甲酰胺
CAS 1232410-49-9
分子式 C18H16N4O3S
分子量 368.41
储存条件 -20℃
纯度 Purity≥98%
单位 瓶
生物活性 VE-821 是一种有效的 ATP 竞争性的 ATR 抑制剂，Ki/IC50 为 13 nM/26 nM。 VE-821也抑制ATM和DNA-PK，IC50分别>8μM和4.4μM。[1-4]
In Vitro VE-821对ATR具有出色的选择性，与相关的PIKKs ATM，DNA-PK，mTOR和PI3Kγ（分别为16μM，2.2μM，>1μM和3.9μM的Kis）的交叉反应性最小，并且对大量的不相关的蛋白激酶[1]。在正常氧和缺氧条件下，VE-821显著增强PSN-1，MiaPaCa-2和原发性PancM胰腺癌细胞对辐射和吉西他滨的敏感性。 VE-821的ATR抑制导致癌细胞中辐射诱导的G2/M停滞的抑制。在PSN-1和MiaPaCa-2细胞中，1μMVE-821在照射后2小时用吉西他滨（100nM），放射线（6Gy）或两者处理后抑制Chk1（Ser345）的磷酸化[3]。 。
激酶实验 使用辐射 – 磷酸盐掺入测定法测试化合物（例如，VE-821）抑制ATR，ATM或DNAPK激酶活性的能力。制备由适当的缓冲液，激酶和靶肽组成的储备溶液。向其中加入不同浓度的目标化合物在DMSO中至最终DMSO浓度为7％。通过加入适当的[g-33P] ATP溶液开始测定，并在25℃温育。在所需的时间过程后，通过分别加入磷酸和ATP至终浓度100mM和0.66μM，停止测定。将肽捕获在磷酸纤维素膜上，制备，并用200μL100mM磷酸洗涤六次，然后加入100μL闪烁混合物并在1450 Microbeta液体闪烁计数器上进行闪烁计数。使用GraphPad Prism软件分析剂量 – 反应数据[2]。
SMILES O=C(NC1=CC=CC=C1)C2=NC(C3=CC=C(C=C3)S(=O)(C)=O)=CN=C2N
靶点 ATM/ATR
细胞实验 将MiaPaCa-2，PSN-1和Panc1细胞（5×104）接种在96孔板中，4小时后用1μL浓度的增加浓度的VE-821处理，然后用4Gy单剂量照射。在照射后72小时更换培养基，此时使用Alamar Blue测定法测量活力。允许细胞增殖，并且在第10天再次分析细胞活力以用于不同的治疗条件。将细胞活力和存活分数标准化为未处理（对照）组[3]。
数据来源文献 [1]. Reaper PM, et al. Selective killing of ATM- or p53-deficient cancer cells through inhibition of ATR. Nat Chem Biol. 2011 Apr 13;7(7):428-30.
[2]. Charrier JD, et al. Discovery of potent and selective inhibitors of ataxia telangiectasia mutated and Rad3 related (ATR) protein kinase as potential anticancer agents. J Med Chem. 2011 Apr 14;54(7):2320-30.
[3]. Prevo R, et al. The novel ATR inhibitor VE-821 increases sensitivity of pancreatic cancer cells to radiation and chemotherapy. Cancer Biol Ther. 2012 Sep;13(11):1072-81.
[4]. Muralidharan SV, et al. BET bromodomain inhibitors synergize with ATR inhibitors to induce DNA damage, apoptosis, senescence-associated secretory pathway and ER stress in Myc-induced lymphoma cells. Oncogene. 2016 Sep 8;35(36):4689-97
规格 5mg 10mg

VE-821是一种有效的，选择性的，ATP竞争性ATR抑制剂。

ProMap® naïve CFSE T 细胞增殖检测

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ProMap® naïve CFSE T 细胞增殖检测

ProImmune 的 ProMap® T 细胞增殖检测可用于鉴定引发辅助 T 细胞增殖并因此可能引起辅助 T 细胞免疫反应的表位序列。

与基于放射性胸苷掺入的传统测定不同，该测定利用强大的流式细胞术方法，能够准确测定增殖细胞的百分比和 T 细胞反应的详细表型，所有这些都显着提高了整体灵敏度。

为什么选择 ProMap® CFSE 增殖检测？

1.CFSE 染料稀释是一种久经考验的方法，已被数以千计的出版物引用

2.比放射性分析灵敏得多

3.流式细胞仪读数可解析要分析的正确细胞群，例如活 CD4+ T 细胞

4.可以轻松添加进一步的子集表型，并且可以同时读出子集的增殖

5.积分测定测量增殖时间范围内的所有增殖，而不是孵育时间结束时的时间窗口

主要出版物：

使用英国国防部下属的 [dstl] 发布的 ProMap® T 细胞检测验证抗体人源化

ProMap® naïve CFSE T 细胞增殖检测

Figure 1：比较小鼠和抗体人源化 V 区中重叠的肽 T 细胞反应

O’Brien LM, Goodchild SA, Phillpotts RJ, Perkins SD. Virology (2012) 426(2):100-5.[PMID:22341308]

英国政府国防科技实验室 [dstl] 的科学家使用 ProImmune 的 T 细胞增殖检测来验证他们对抗委内瑞拉马脑炎病毒 (VEEV) 抗体的人源化。序列人源化是一种将抗体中的动物蛋白序列替换为人蛋白序列的合理设计方法。然而，这种方法并不能保证所得到的生物制剂具有低免疫原性。通过在体外 T 细胞分析中使用序列扫描，可以生成抗原性数据以显示嵌合序列和人源化序列之间的差异。在此处阅读完整的案例研究

ProMap® T 细胞检测和肽/蛋白质疗法

这个 ProMap® T 细胞增殖检测已开发用于鉴定潜在 T 细胞表位的存在与否，可用于新肽或蛋白质的临床前发现。这些检测可以解决结构相似分子之间的“相对免疫原性”问题；例如，它们可以帮助区分不同的候选物，或者可以指示蛋白质工程策略在潜在免疫治疗剂的去免疫化方面是否成功。

作为 ProImmune’s REVEAL® 免疫原性系统的一部分，ProMap® T 细胞增殖检测的结果可以与 50 多个 II 类 HLA 等位基因的无细胞 HLA 肽结合测定的结果一起分析。这为客户提供了辅助 T 细胞对一种或多种药物先导物的免疫反应的详细资料。

ProMap® naïve CFSE T 细胞增殖检测

Figure 2: ProMap® T 细胞增殖测定原理。

  • 20-50 个 HLA 型供体的 PBMC 选自 ProImmune 生物库

  • 根据项目要求合成肽库

  • 供体 PBMC 用 CFSE 染料标记

  • 每个肽都与来自每个供体的 PBMC 共培养

  • 响应肽的 CD4+ T 细胞增殖导致 CFSE 标记稀释

  • CFSE 的流式细胞术分析结合 CD4 染色，用于定量细胞分裂，并提供抗原性的测量


ProMap® T 细胞增殖检测的详细信息

细胞用荧光染料 5,6-carboxyflurescein diacetate succinimidyl ester (CFSE) 标记。那些响应抗原而增殖的细胞显示出 CFSE 荧光强度的降低，这是通过流式细胞术直接测量的。由于这是一种流式细胞分析，它可以准确地确定增殖 CD4+ 细胞的百分比，能够对 T 细胞反应进行详细的表型分析，并且比基于放射性胸苷掺入的传统分析更灵敏。

ProImmune 提供两种类型的 T 细胞增殖检测：

  • 用于肽表位作图的 ProMap® naïve T 细胞增殖检测（见下文）

  • 用于全蛋白筛选的 ProScern® DC-T 细胞增殖检测


用于肽表位作图的 ProMap® T 细胞检测

该测定用于鉴定可引发辅助性 CD4+ T 细胞增殖并因此可能引起辅助性 T 细胞免疫反应的肽表位序列，从而可能导致抗药抗体 (ADA) 反应或其他不需要的免疫原性。该测定还可用于评估蛋白质序列的有益免疫原性，例如用于免疫治疗的表位发现。

在该检测旨在关注 CD4+ 辅助 T 细胞反应的情况下，CD8+ T 细胞耗尽和 CFSE 标记的供体 PBMC 与 5uM 的每种目标肽在六个重复孔中培养 7 天。每个测定板包括一组未处理的对照孔。该检测还包括参考抗原对照，包括已知 MHC II 类抗原的合成肽和两种有效的全蛋白抗原。

ProMap® naïve CFSE T 细胞增殖检测

Figure 3. 来自 naïve T 细胞测定的示例染色数据，(1) CFSE 标记的 T 细胞单独在培养基中培养（未刺激），(2) CFSE 标记的 T 细胞与来自目标抗原的肽一起培养，(3) CFSE 标记的 T 细胞用对照蛋白（结核菌素 PPD）培养。

细胞增殖通过流式细胞术分析确定。对于 ProMap® T 细胞检测，通过与未刺激样品的结果进行比较，确定每个刺激样品的高于背景的刺激百分比。每个样本中 CD4+ CFSE 暗淡群体的计数表示为总 CD4+ 群体的比例。六个重复值用于计算高于背景的刺激百分比（有抗原刺激的 CD4+ CFSE 暗淡细胞的比例，减去没有抗原刺激的 CD4+ CFSE 暗淡细胞的比例）。

平均值和平均值的标准误差是从六份值计算出来的。如果高于背景的百分比刺激大于 0.5% 并且高于背景的 2 倍标准误差，则结果被认为是“阳性”，尽管数据也提供了不太严格的阈值以允许考虑小响应。

为了比较肽，计算响应指数。该指数基于每种肽的反应幅度（高于背景的刺激百分比）乘以每种肽的反应供体数量（抗原性百分比）。

报告中提供的数据是：

  • 抗原性百分比（供体群体对测试肽有反应的比例）

  • 反应指数

  • 响应的显着性，通过阈值为 p ≤ 0.05 的单向方差分析

ProMap® naïve CFSE T 细胞增殖检测

Figure 4. 使用 ProMap® T 细胞增殖检测测量的抗原性百分比：一组 43 名供体用于测试来自两种治疗性单克隆抗体 Remicade 和 Humira 重链区域的肽的潜在免疫原性。每个供体用不同的颜色表示。引起 2 个或更多供体反应的肽被认为值得进一步研究。

Figure 5. ProMap® T 细胞增殖检测的反应指数：来自与图 3 相同检测的数据 – 反应指数表明对测试肽的反应的幅度和数量。请注意，PPD 的响应不在此图的范围内。