另售热敏感版本：热敏 USER^® II 酶 (NEB #M5508)

我们很高兴地宣布，所有反应缓冲液中均已不含 BSA（牛血清白蛋白）。从 2021 年 4 月开始，NEB 将含有 BSA 的反应缓冲液转换为含有重组白蛋白（rAlbumin）的缓冲液，用于限制性内切酶和部分 DNA 修饰酶。如需了解更多信息，请访问 www.neb.cn/BSA-free。

热稳定 USER III 酶（尿嘧啶–特异性切除试剂）在尿嘧啶位置产生一个单核苷酸缺口。该酶在 50-75℃ 具有活性（65℃ 时活性最佳）

图 1：热稳定 USER III 酶

Afu 尿嘧啶-DNA 糖基化酶（UDG）催化尿嘧啶碱基的切割，形成一个脱碱基（脱嘧啶）位点，但保持磷酸二酯骨架结构完整。核酸内切酶 IV 的裂解酶活性使脱碱基位点 3´ 和 5´ 端的磷酸二酯键断裂，释放无碱基的脱氧核糖。

热稳定 USER III 酶（尿嘧啶–特异性切除试剂）作用在尿嘧啶位置产生一个单核苷酸缺口。热稳定 USER III 酶是由以下两种酶混合而成：Afu 尿嘧啶-DNA 糖基化酶（UDG）和 具有 DNA 糖基化酶–裂解酶活性的核酸内切酶 IV。Afu UDG 催化尿嘧啶碱基的切割，形成一个脱碱基（脱嘧啶）位点，但保持磷酸二酯骨架结构完整。核酸内切酶 IV 的裂解酶活性使脱碱基位点 3´ 和 5´ 端的磷酸二酯键断裂，释放无碱基的脱氧核糖，切割末端形成 5′-脱氧核糖磷酸基（dRP）和 3′-羟基。热稳定 USER III 酶还具备 3′-二酯酶活性，可去除 3′ 磷酸、3′-α、β-不饱和醛、磷酸糖醛和其他 3′ 保护基团。热稳定 USER III 酶在 50-75℃ 具有活性（65℃ 时活性最佳）

图 2：USER 酶 (NEB #M5505)、热敏 USER II 酶 (NEB #M5508) 和热稳定 USER III 酶切割DNA后，产生不同的功能末端

不同的 USER 酶最佳反应温度不同（USER 酶和热敏 USER II 酶为 37℃，热稳定 USER III 酶为 65℃），热失活能力不同（仅热敏 USER II 酶能热失活），切割后产生 3′ 和 5′ 末端也不同。USER 酶 (NEB #M5505) 含核酸内切酶 VIII，切割末端为 3′ 和 5′ 磷酸基。 热敏 USER II 酶 (NEB #M5508) 含核酸内切酶 III，切割末端为 3′-磷酸-α、β-不饱和醛和 5′ 磷酸基。热稳定 USER III 酶 (NEB #M5509) 含核酸内切酶 IV，切割末端为 3′-羟基和 5′-脱氧核糖磷酸基。