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Capturem膜技术 Capturem™ Trypsin
品牌	Code No.	产品名称	包装量	价格（元）	说明书	数量
Clontech	635722	Capturem Trypsin	20 rxns	￥3,060

■ 产品简介

蛋白质质谱分析前的样品消化步骤，通常需要4个小时甚至过夜，如果使用Capturem™ Trypsin 或 Capturem™ Pepsin，可在室温下快速，高效和完全的消化蛋白质，从而使蛋白质组学分析流程更加连贯。这两款产品是一次性小型离心柱的形式，应用新型膜技术，膜上固定有胰蛋白酶（Trypsin）或胃蛋白酶（Pepsin），在短短几分钟内即可高效、完全地酶解蛋白质样品，与传统的溶液法过夜处理相比，时间更短、效率更高、重复性更好、胰蛋白酶自溶片段更少，避免发生过度消化。

■ 快速、简单的操作流程

Capturem™ Trypsin 和 Capturem™ Pepsin包含小型离心柱和活化buffer，操作流程简单、快速，只需要加入200 μl活化buffer离心1 min，然后加入蛋白质样品再离心1 min，即可洗脱获得可用于下游分析的肽段。

■ 产品特点

·操作快速，2 min-3 min内即可酶解蛋白质样品，无需过夜处理 ·比溶液法效率更高，酶解更彻底 ·样品中自溶片段更少，蛋白质非特异性修饰几率更低 ·可以使整个蛋白质组学分析流程更加连贯，实现更有效的肽和蛋白质的质谱鉴定

■ 应用

·蛋白质鉴定 ·蛋白质组学分析 ·质谱样品制备 ·抗体鉴定

■ 实验例

使用Capturem™ Trypsin对BT474全细胞裂解液进行酶解消化并做蛋白质组学分析。通过RP-HPLC将裂解液分成19个独立的组分（图A），然后再使用Capturem Trypsin对每个组分单独酶解，并使用LC/MS-MS分析，每个组分中带有2个或以上的特异性肽段的蛋白质总数被鉴定并绘制出，如B图所示。

使用Capturem™ Trypsin可以实现快速完全的Apomyoglobin（Apo）酶解。上图为使用RP-HPLC分析Capturem Trypsin和常规溶液法酶解蛋白质的结果，图A为未酶解的完整蛋白质，图B为溶液法室温酶解16 h的蛋白质，图C为使用Capturem Trypsin酶解1 min的蛋白质，结果显示使用Capturem Trypsin酶解的非常彻底。

使用Capturem™ Trypsin可以酶解紧密折叠的蛋白质Myoglobin (Myo)。使用RP-HPLC对Capturem Trypsin和常规溶液法酶解的产物进行分析，图A为未酶解的完整蛋白质，图B为溶液法室温酶解16 h的蛋白质，图C为使用Capturem Trypsin酶解1 min的蛋白质，结果显示使用Capturem Trypsin可以快速有效地酶解紧密折叠的蛋白质。

Capturem™ Pepsin的操作流程。在酶消化之前，抗体样品被变性和还原。使用附带的活化buffer初次活化柱子后，将还原处理后的抗体样品溶液（50-800 μl）加入离心柱中，离心1分钟。 在这个过程中，柱上发生胃蛋白酶消化，随后再一次离心洗脱即可获得肽片段，加入NaOH中和洗脱的肽片段，即可用于下游分析。

使用Capturem™ Pepsin消化不同的小鼠抗体同种型。小鼠的IgG1, IgG2a, IgG2b, 和 IgG3各取 100 μg，使用TCEP和醋酸于75℃处理15 min进行变性操作，然后用5%甲酸buffer稀释。使用Capturem™ Pepsin对稀释的样品进行消化，通过SDS-PAGE对消化和未消化的样品（各取4 μg）进行检测，如上图所示。

不同批次的Capturem™ Pepsin消化产物HPLC图谱比较。使用5%的甲酸稀释50 μg的Apo，选择3个不同批次的Capturem™ Pepsin对其进行消化，HPLC结果显示三组消化产物具有相同的片段，说明Capturem™ Pepsin具有良好的重复性。

Capturem™ Pepsin与pepsin溶液法消化结果比较。对50 μg 的anti-HER2单克隆抗体使用3种方法进行消化，分别是Capturem™ Pepsin，pepsin溶液法孵育4小时，pepsin溶液法孵育过夜。然后进行质谱分析。由上图可以看出，使用溶液法的消化产物峰左移并且总体峰的数量较多，说明产生了过度消化，而使用Capturem™ Pepsin则没有这个问题。

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页面更新：2024-02-29 09:44:22

上海金畔生物科技有限公司代理Takara酶试剂盒全线产品，欢迎访问官网了解更多产品信息和订购。

Capturem膜技术 Capturem™ Trypsin （质谱级）
品牌	Code No.	产品名称	包装量	价格（元）	说明书	数量
Clontech	635736	Capturem™ Trypsin 96-Well Plate (Mass Spectrometry Grade)(库存销售完毕即终卖)	4 × 96-Well Plates	￥23,077
Clontech	635740	Capturem™ Trypsin Miniprep Kit (Mass Spectrometry Grade)(库存销售完毕即终卖)	20 Rxns	￥3,430

■ 产品简介

Capturem™ Trypsin能在室温下快速、高效并且完整的酶解消化蛋白质用于质谱分析，与需要4小时甚至过夜的传统蛋白质酶解消化操作流程相比，可以使蛋白质组学分析流程更加连贯、流畅。本制品基于新型Capturem™ 膜技术，膜上固定trypsin（猪胰腺来源，且经过还原甲基化修饰，稳定性和抗自溶能力都显著增强），有小型离心柱以及96孔板的形式可供选择，能在短短几分钟内完成独立或高通量样品的蛋白质酶解消化，不需要溶液法的长时间孵育（长时间孵育易造成蛋白质的氧化或非特异性修饰，最终导致鉴定困难并且重复性低），并且自溶片段很少，效率更高。此外，使用小离心柱或plate的方法操作速度快，更能避免溶液法易出现的过度酶解消化的情况。每个小离心柱或96 well plate的单孔最大上样量为80 μg的蛋白质或25 μg的抗体。

■ 产品特点

·操作快速，步骤简单，Miniprep产品4 min内即可在室温下酶解蛋白质样品，无需过夜处理 ·比溶液法效率更高，酶解更彻底，且不易出现过度酶解 ·Trypsin经过修饰稳定性更高，样品中自溶片段更少，蛋白质非特异性修饰几率更低 ·可以使整个蛋白质组学分析流程更加连贯，实现更有效的肽和蛋白质的质谱鉴定 ·有独立的小型离心柱和高通量的96 well plate形式可供选择，满足不同的实验需求

* 4 × 96-Well Plates包装的产品不包含Activation Buffer，需要搭配购买635739或自行配制，每个plate需要搭配使用25 ml Activation Buffer

■ 操作流程

Capturem™ Trypsin消化流程。 在用活化buffer激活Capturem™ Trypsin后，将天然状态或经变性处理的样品溶液（50-800 μl）加入孔中，通过2 min的离心使样品过柱。在柱上进行胰蛋白酶消化，随后肽片段再次进行2 min的离心洗脱。与传统溶液法需要过夜消化的时长相比，Capturem™ Trypsin进行完全的抗体消化仅需3-6 min。*本流程不包括变性/还原/烷基化的时间。

■ 产品应用

·蛋白质鉴定 ·蛋白质组学分析 ·质谱样品制备 ·抗体鉴定

■ 实验例

在天然条件下用Capturem™ Trypsin消化80 μg的肌红蛋白（Apo）的HPLC图谱。由图可见，Capturem™ Trypsin酶解消化的产物具有很高的重复性。

对使用Capturem™ Trypsin消化的SILuLite进行定量。Trypsin离心法消化SILuLite可产生ng级别（1, 10, 50 ng）的可检测替代肽段。特异性肽段的AUCs具有线性相关性。

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