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高保真RT-PCR试剂盒PrimeScript™ II High Fidelity One Step RT-PCR Kit
品牌	Code No.	产品名称	包装量	价格（元）	说明书	数量
Takara	R026A	PrimeScript™ II High Fidelity One Step RT-PCR Kit	50 Rxns	￥1,857
Takara	R026B (A × 4)	PrimeScript™ II High Fidelity One Step RT-PCR Kit	50 Rxns × 4	￥6,703

■ 制品内容 (Code No.: R026A)

PrimeScript II RT Enzyme Mix 50 μl PrimeSTAR GXL for 1 step RT-PCR 200 μl 2 × One Step High Fidelity Buffer 625 μl × 2 Control F-1 Primer*1 (20 μM) 10 μl Control R-1 Primer*2 (20 μM) 10 μl Positive Control RNA (2×105 copies/μl) 20 μl RNase Free dH2O 625 μl × 2     *1 Positive Control RNA用上游引物。 *2 Positive Control RNA用下游引物。

图1. Control RNA: 使用Control Primer时扩增的DNA片段

■ 制品说明

PCR（Polymerase Chain Reaction；聚合酶链式反应）是一种使用两种引物扩增目的DNA的方法。虽然原理上PCR法是扩增DNA，RNA不能直接被扩增，但是经过反转录酶的作用将RNA反转录成cDNA后扩增（RT-PCR），PCR法便可应用于RNA的解析了。目前，此方法已广泛应用于RNA的构造解析、cDNA的克隆及RNA水平上的表达解析等多种领域。 PrimeScript II High Fidelity One Step RT-PCR Kit是在一个反应管中连续进行反应的1 step RT-PCR用试剂盒。反转录酶使用延伸性能好且能够合成全长cDNA的PrimeScript II RTase，PCR使用准确性高且适于扩增长链及GC Rich cDNA的PrimeSTAR® GXL DNA Polymerase，这两种酶经优化后可用于1 step RT-PCR。 本试剂盒可用于宽泛浓度RNA起始的反应，在反转录反应10分钟、PCR反应延伸时间为10秒/kb的高速条件下，能够扩增难扩增的长链及GC rich等各种目的基因，可简便快速且准确地获得cDNA产物。 本试剂盒具有以下优点： · 使用单管反应，降低污染的风险，可准确且简便地扩增RNA起始的目的基因。 · 反转录反应只需10分钟，PCR延伸时间达10秒/kb的高速反应。 · 可扩增GC rich、长链cDNA。 · 反应中total RNA的使用量范围广，易于使用。 本试剂盒含有RNA起始合成cDNA及经PCR扩增cDNA所需的全部试剂。   ■ 保存 -20℃。

■ 试剂盒特点

RNA模板   适用于所有RNA        扩增片段大小   ～8 kb        反转录酶   PrimeScript II RTase (使用温度45℃)        DNA Polymerase   PrimeSTAR GXL for 1 step RT-PCR        RNase Inhibitor   必须使用 (PrimeScript II RT Enzyme Mix 中含有) 1st strand cDNA合成用引物   使用特异性下游引物 (PCR扩增反应用反义链引物)   (不可使用 Random 6 mers 及 Oligo dT Primer)        操作   在一个反应管中连续的进行RT-PCR反应

■ 使用注意

以下为使用本试剂盒时的注意事项，使用前一定认真阅读。

1. 当同时需要进行多个RT-PCR 反应时，应先配制各种试剂的混合液（Master Mix；其中包括 RNase Free dHH2O、Buffer、dNTP Mixture 等），然后再分装到每个反应管中。这样，可使所取的试剂体积更准确，减少试剂损失，避免重复分取同一试剂。同时也可以减少实验操作或实验之间产生的误差。 2. 使用PrimeScript II RT Enzyme Mix、PrimeSTAR GXL for 1 step RT-PCR等酶类产品时，应轻轻混匀，避免起泡；分取之前要小心地离心收集到反应管底部；由于酶保存液中含有50%的甘油，粘度高，分取时应慢慢吸取。 3. 2 × One Step High Fidelity Buffer使用前需充分vortex后，离心备用。 4. 酶制品应在实验前才从-20℃中取出，使用后也应立即放入-20℃保存。 5. 为了防止Positive Control RNA分解，应尽量避免反复冻融，建议将其分成小包装后冻存。有条件的实验室最好保存于-70℃～-80℃。 6. 分装试剂时务必使用新的枪头（Tip），以防止样品间污染。 7. 本试剂盒的反转录反应使用基因特异性引物。不要使用Random Primer或Oligo-dT Primer。

页面更新：2023-11-01 16:33:03

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高保真RT-PCR试剂盒PrimeScript™ II High Fidelity RT-PCR Kit
品牌	Code No.	产品名称	包装量	价格（元）	说明书	数量
Takara	R023A	PrimeScript™ II High Fidelity RT-PCR Kit	50 Rxns	￥1,516
Takara	R023B (A × 4)	PrimeScript™ II High Fidelity RT-PCR Kit	50 Rxns × 4	￥5,456

■ 制品内容 (50 次量*1)

PrimeScript II RT Enzyme Mix 50 μl 5×PrimeScript II Buffer 200 μl dNTP Mixture (10 mM each) 100 μl Oligo dT Primer (50 μM) 50 μl Random 6 mers (20 μM) 50 μl PrimeSTAR GXL for RT-PCR 100 μl 5×PrimeSTAR GXL Buffer 500 μl Control F-1 Primer*2 (20 μM) 10 μl Control R-1 Primer*3 (20 μM) 10 μl Positive Control RNA (2×105 copies/μl) 20 μl RNase Free dH2O 1ml     *1 反转录反应20 μl、PCR反应50 μl，2 Step RT-PCR时可使用50次。 *2 Positive Control RNA用上游引物。 *3 Positive Control RNA用下游引物。

■ 制品说明

PCR (Polymerase Chain Reaction；聚合酶链式反应) 是一种使用两种引物扩增目的DNA的方法。虽然原理上PCR法是扩增DNA，RNA不能直接被扩增，但是经过反转录酶的作用将RNA反转录成cDNA后扩增 (RT-PCR)，PCR法便可应用于RNA的解析了。目前，此方法已广泛应用于RNA的构造解析、cDNA的克隆及RNA水平上的表达解析等多种领域。 PrimeScript II High Fidelity RT-PCR Kit是一种对长链RNA及富含GC序列的RNA合成cDNA时具有高保真性的RT-PCR用试剂盒。 本试剂盒中使用的PrimeScript II反转录酶是改良型的PrimeScript RTase，可在合成长链cDNA时发挥效力，同时PCR时使用了对长链及富含GC序列的cDNA扩增时具有高保真性的DNA聚合酶PrimeSTAR GXL DNA Polymerase。因PrimeScript II RTase可很好地抑制由于引物错配引起的非特异性扩增，即使使用高浓度的Oligo dT Primer进行反转录反应也不会导致cDNA合成时的阻害作用，因此使用高浓度的RNA作为模板也可进行良好的反转录反应。 本试剂盒中使用PrimeScript II RTase与RNase Inhibitor的混合型PrimeScript II RT Enzyme Mix。另外，PrimeSTAR GXL DNA Polymerase克服了以往的高保真酶由于核酸浓度过高而存在的反应阻害性，在高浓度核酸存在条件下也能发挥其效力，可以在更宽广的RNA模板范围内获得cDNA扩增产物。 本试剂盒具有以下优点: 1. 能够从长链RNA及富含GC序列的RNA中获得错配率很低的cDNA扩增产物。 2. 在42℃条件下反转录反应也可以使具有复杂结构的RNA进行良好的延伸。 3. 反应体系中Total RNA的使用范围非常宽广，便于使用。 本试剂盒含有反转录反应及PCR扩增反应所需要的全部试剂。并且，也可以进行1 Step RT-PCR反应。

■ 各种引物的序列

引物名称 各引物序列 Random 6 mers Pd (N)6 Oligo dT Primer Takara独自开发的dT区域的序列 Control F-1 Primer 5′-CTGCTCGCTTCGCTACTTGGA-3′ Control R-1 Primer 5′-CGGCACCTGTCCTACGAGTTG-3′

■ Positive Control RNA

本试剂盒中的Control RNA是以pSPTet3质粒 (质粒中的SP6启动子下游插入长约1.4 kb的pBR322来源的DNA片段，DNA片段上含有抗四环素基因) 为模板由SP6 RNA聚合酶经体外转录而得到的。

图1. Control RNA：使用Control Primer时所能扩增的DNA片段

■ 保存

-20℃。

■ 使用注意

1. 当同时需要进行数次RT-PCR反应时，应先配制各种试剂的混合液 (Master Mix；其中包括RNase Free dH2O、Buffer、dNTP Mixture等)，然后再分装到每个反应管中。这样，可使所取的试剂体积更准确，减少试剂损失，避免重复分取同一试剂。同时也可以减少实验操作或实验之间产生的误差。 2. 使用PrimeScript II RT Enzyme Mix、PrimeSTAR GXL for RT-PCR等酶类产品时，应轻轻混匀，避免起泡；分取之前要小心地离心收集到反应管底部；由于酶保存液中含有50%的甘油，粘度高，分取时应慢慢吸取。 3. 酶制品应在实验前才从-20℃中取出，使用后也应立即放入-20℃保存。 4. 为了防止Positive Control RNA分解，应尽量避免反复冻融。有条件的实验室最好保存于-70℃～-80℃。 5. 分装试剂时务必使用新的枪头 (Tip)，以防止样品间污染。

页面更新：2023-11-01 16:22:38

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一步法RT-PCR试剂盒PrimeScript™ One Step RT-PCR Kit Ver.2
品牌	Code No.	产品名称	包装量	价格（元）	说明书	数量
Takara	RR055A	PrimeScript™ One Step RT-PCR Kit Ver.2	50 Rxns	￥1,350 ￥515
Takara	RR055B (A × 4)	PrimeScript™ One Step RT-PCR Kit Ver.2	50 Rxns × 4	￥4,858

■ 制品内容 (Code No.: RR055A)

PrimeScript 1 Step Enzyme Mix 100 μl 2 × 1 Step Buffer 625 μl ×2 Control F-1 Primer (20 μM)*1 20 μl Control R-1 Primer (20 μM)*2 20 μl Positive Control RNA (2×105 copies/μl) 20 μl RNase Free dH2O 625 μl ×2   *1 Positive Control RNA用上游引物。 *2 Positive Control RNA用下游引物。

■ 制品说明

PCR (Polymerase Chain Reaction；聚合酶链式反应) 是一种体外扩增DNA的简单而有效的方法。虽然原理上PCR法是扩增DNA，RNA不能直接被扩增，但是经过反转录酶的作用把RNA反转录成cDNA后，PCR法便可应用于RNA的解析了。目前，RT-PCR方法已广泛应用于RNA的构造解析、cDNA的克隆及RNA水平上的表达解析等多种领域。 本试剂盒采用了一步 (One Step) RT-PCR法。RNA→cDNA→PCR反应操作在同一反应体系中连续进行，反应中途不需添加任何试剂，降低污染风险。反转录反应使用了Takara Bio公司特别开发的新型反转录酶PrimeScript RTase。该反转录酶对具有复杂二级结构的RNA模板也具有很强的延伸能力；PCR反应使用了扩增性能优越的Hot Start型DNA聚合酶TaKaRa Ex Taq® HS，大大提高了本试剂盒的扩增性能和反应特异性。在本试剂盒中，已将PrimeScript RTase、TaKaRa Ex Taq HS、RNase Inhibitor以及One Step RT-PCR用稳定剂等配制成了Premix型的PrimeScript 1 step Enzyme Mix；同时把反应用Buffer、dNTP以及One Step Enhancer Solution配制成了Premix型的2×1 Step Buffer的形式，使实验操作时的反应液配制更为简单方便。使用本试剂盒可进行高效的RT-PCR扩增。反转录温度可以设定为50℃，能够有效抑制非特异性扩增。另外，本试剂盒可减少由于错配和引物二聚体造成的非特异性反应。 本试剂盒中含有进行One Step RT-PCR反应用的全部试剂，可以方便有效地对RNA进行扩增分析。

■ 各种引物的序列

引物名称 各引物序列 Control F-1 Primer        5′-CTGCTCGCTTCGCTACTTGGA-3′ Control R-1 Primer        5′-CGGCACCTGTCCTACGAGTTG-3′

■ 原 理

PrimeScript One Step RT-PCR Kit Ver.2可在同一反应管中连续进行由PrimeScript RTase将RNA反转录为cDNA，再由TaKaRa Ex Taq HS扩增此cDNA的RT-PCR反应。

图1. PrimeScript One Step RT-PCR Kit Ver.2原理图

■ 保存

-20℃。

■ 注意事项

1. 当同时需要进行数次RT-PCR反应时，应先配制至少10次量各种试剂的混合液，然后再分装到每个反应管中。这样，可使所取的试剂体积更准确，减少试剂损失，避免重复分取同一试剂。同时也可以减少实验操作或实验之间产生的误差。

2. 使用PrimeScript 1 Step Enzyme Mix时，应轻轻混匀，避免起泡；分取之前要小心地离心收集到反应管底部；由于酶保存液中含有50%的甘油，粘度高，分取时应慢慢吸取。

3. 2×1 Step Buffer使用前用vortex充分混匀，离心后使用。 4. 酶制品应在实验前才从-20℃中取出，使用后也应立即放回-20℃中保存。 5. 为了防止Positive Control RNA分解，应尽量避免反复冻融。有条件的实验室最好保存于-70℃～-80℃。 6. 分装试剂时务必使用新的枪头，以防止样品间污染。 7. 使用本试剂盒进行反转录反应时必须使用特异性的反转录引物，Random Primer、Oligo dT Primer不能使用。

页面更新：2023-11-01 16:22:11