PMSF(100mM)
货号：BL507A
规格：10ml
品牌：Biosharp
苯甲基磺酰氟 PMSF(100mM)
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产品编号 |
产品名称 |
规格 |
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BL507A |
PMSF(100mM) |
10ml |
产品简介：
PMSF分子式为C7H7FO2S,分子量为174.19,纯度>99%。常用生化试剂,用于抑制蛋白酶,进口试剂配制。
产品组份：
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产品编号 |
产品名称 |
规格 |
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BL507A-S |
PMSF(100mM) |
10ml |
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BL507A-P |
PMSF(晶体) |
使用说明：
第一次使用时把一管PMSF晶体全部倒入到PMSF溶剂中,溶解混匀,即配制成10ml 100mM PMSF。
注意事项：
1、有毒,注意防护。
2、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
保存条件：
室温保存,一年有效,配成PMSF溶液后需-20℃保存。
| 货号 | BL507A |
| 规格 | 10ml |
| 品牌 | Biosharp |
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PMSF 苯甲基黄酰氟
| EC | EINECS 206-350-2 |
| MDL | MFCD00007424 |
| 别名 | Phenylmethanesulfonyl fluoride |
| CAS | 329-98-6 |
| 分子式 | C7H7FO2S |
| 分子量 | 174.19 |
| 纯度 | ≥98% |
| 单位 | 瓶 |
| 生物活性 | PMSF是通常用于制备细胞裂解物的不可逆的丝氨酸/半胱氨酸蛋白酶抑制剂。[1-3] |
| In Vitro | PMSF（2mM）在Li +存在下抑制卡巴胆碱刺激的肌醇磷酸累积仅15％-19％。 PMSF对磷酸肌醇转换的抑制是由于磷酸肌醇分解后的一个或多个步骤[1]。 PMSF抑制T.brucei的血流中GPI中间体的肌醇残基的酰化。 PMSF抑制糖脂C的形成但不抑制体外脂肪酸重塑。 PMSF抑制了在procyclic锥虫中添加GPI酰化和乙醇胺磷酸酶，但在Hela细胞中没有[2]。 |
| In Vivo | PMSF（0.1mL/10g b.wt，ip）产生抗伤害感受，如甩尾潜伏期评估中％MPE的剂量响应性增加所示，但未能产生明确的剂量反应性运动抑制。接受腹膜内注射PMSF的小鼠表现出大麻素效应，包括抗伤害感受，体温过低和不动，ED50值分别为86,224和206mg/kg。 PMSF（30 mg/kg）预处理增强了anandamide对甩尾反应（抗伤害感受），自发活动和活动性的影响，分别为5倍，10倍和8倍[3]。 |
| SMILES | O=S(CC1=CC=CC=C1)(F)=O |
| 靶点 | Serine/Cysteine protease |
| 动物实验 | 在测定中使用重18至25g的雄性ICR小鼠。将PMSF溶解在芝麻油中，并以0.1mL/10g b.wt的体积腹膜内施用。在静脉注射anandamide或载体注射前10分钟始终给予PMSF。使小鼠适应评估室过夜而不中断食物或水。在静脉注射anandamide或载体给药后，如下评价每只动物：5分钟的甩尾潜伏期（抗伤害感受）反应和5至15分钟的自发（运动）活动;或核心（直肠）温度5分钟和环固定（僵住症）5至10分钟。 |
| 数据来源文献 | [1]. Sekar, M.C. and B.D. Roufogalis, Differential effects of phenylmethanesulfonyl fluoride (PMSF) on carbachol and potassium stimulated phosphoinositide turnover and contraction in longitudinal smooth muscle of guinea pig ileum. Cell Calcium, 1984. 5(3): p. [2]. Guther, M.L., W.J. Masterson, and M.A. Ferguson, The effects of phenylmethylsulfonyl fluoride on inositol-acylation and fatty acid remodeling in African trypanosomes. J Biol Chem, 1994. 269(28): p. 18694-701. [3]. Compton, D.R. and B.R. Martin, The effect of the enzyme inhibitor phenylmethylsulfonyl fluoride on the pharmacological effect of anandamide in the mouse model of cannabimimetic activity. J Pharmacol Exp Ther, 1997. 283(3): p. 1138-43. |
| 规格 | 100mg 10mM*1mL (in DMSO) 200mg |
一种不可逆的丝氨酸/半胱氨酸蛋白酶抑制剂，通常用于细胞裂解液的制备中。
使用本产品的应用案例（仅供参考）
In Vitro
WB（cell，1 mmol/L PMSF）
The whole cell lysates were prepared using lysis buffer containing aprotinin (2 mg/L), the phosphatase inhibitor leupeptin (5 mg/L), and phenylmethylsulfonyl fluoride (PMSF; 1 mmol/L; Jinpan). Equal amounts of proteins were loaded and separated by 10% SDS-polyacrylamide gel electrophoresis and transferred to polyvinylidene difluoride membranes.
来源文献：Guo C, Ouyang Y, Cai J, Xiong L, Chen Y, Zeng X, Liu A. High expression of IL-4R enhances proliferation and invasion of hepatocellular carcinoma cells. Int J Biol Markers. 2017 Oct 31;32(4):e384-e390. doi: 10.5301/ijbm.5000280. PMID: 28665449.
普通RIPA裂解液(组织/细胞)
| 别名 | 蛋白提取试剂盒 |
| 英文名称 | RIPA buffer |
| 储存条件 | 附件PMSF-20℃，裂解液4℃。有效期1年 |
| 单位 | 瓶 |
| 规格 | 100ml |
产品简介：RIPA 组织/细胞裂解液是利用表面活性剂等来裂解细胞膜（包括核膜）。本试剂提取的蛋白为可溶性总蛋白。
使用说明 ：
如发现RIPA有沉淀，请放室温半小时或者常温水浴使沉淀溶解。
根据使用量，取每1ml RIPA 加入10ul PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM，混匀备用 （PMSF现用现加）。
1、样品前处理：
a)对于贴壁细胞：去除培养液，用 PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍。按照 6 孔板每孔细胞量加入150-250 ul裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。
b)对于悬浮细胞：离心收集细胞，按照6孔板每孔细胞量加入150-250ul裂解液的比例加入裂解液，用手指轻弹悬浮细胞以充分裂解。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必需分装成 5-10×105细胞/管，然后再裂解。
c)对于组织样品：把组织剪切成细小的碎片。按照每20mg组织加入150-250ul裂解液的比例加入裂解液
(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量) 。
用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。
2、后处理：
将裂解后的样品10000-14000g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。
高效RIPA裂解液(组织/细胞)
| 别名 | 蛋白提取试剂盒 |
| 英文名称 | RIPA buffer(high) |
| 储存条件 | 附件PMSF-20℃，裂解液4℃。有效期1年 |
| 外观（性状） | 黄色澄清液体 |
| 单位 | 瓶 |
| 规格 | 20ml 100ml |
本品为高效组织细胞裂解液。主要用于从动物组织和动物细胞中抽取的可溶性蛋白。组织活细胞本产品配有一支PMSF（0.3ml/1.5ml），PMSF请于-20℃保存。
使用说明
如发现RIPA有沉淀，请放室温半小时或者常温水浴使沉淀溶解。
根据使用量，取每1ml RIPA 加入10ul PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM。混匀备用 （PMSF现用现加）。
1、样品前处理：
a)对于贴壁细胞：去除培养液，用 PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍。按照 6 孔板每孔细胞量加入150-250 ul裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。
b)对于悬浮细胞：离心收集细胞，用手指把细胞用力弹散。按照 6 孔板每孔细胞量加入 150-250 ul 裂解液的比例加入裂解液，再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必需分装成50-100万细胞/管，然后再裂解。
c)对于组织样品： 把组织剪切成细小的碎片。按照每20mg组织加入150-250 ul裂解液的比例加入裂解液。 (如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量)。
用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。
2、后处理：
将裂解后的样品10000-14000g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。
注意事项 ：
本试剂为强烈型裂解液，可以提取核蛋白，但在提取核蛋白的同时，也会将基因组一并释放出来，造成细胞裂解液粘稠，此时可以直接加入蛋白上样缓冲液，煮沸再离心，离心后直接上样电泳；若想测定浓度，可入加少量 SDS（1%），煮沸后离心测浓度。本系列蛋白提取试剂所提取的蛋白由于含有去污剂，所以不适合使用Bradford蛋白浓度测定试剂盒，请选择BCA法或者Lowry法检测蛋白浓度。
如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白，则可以通过超声处理打碎打散粘稠状物，随后离心取上清用于后续实验。
非变性组织/细胞裂解液
| 英文名称 | Native lysis Buffer |
| 储存条件 | 附件PMSF-20℃，裂解液4℃。有效期1年 |
| 单位 | 瓶 |
| 规格 | 100ml |
使用说明：
根据使用量，取每 1ml 裂解液加入 10ul PMSF，使 PMSF 的最终浓度为 1mM。混匀备用（PMSF 现用现加）。
1、样品前处理：
a)对于贴壁细胞：去除培养液，用 PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍。按照 6 孔板每孔加入 150-250ul裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触，冰上放置裂解 5-10 分钟。
b)对于悬浮细胞：离心收集细胞，用手指把细胞用力弹散。按照 6 孔板每孔细胞加入 150-250 微升裂解液的比例加入裂解液，冰上放置裂解 5-10 分钟。期间可以用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必需分装成 50-100 万细胞/管，然后再裂解。
c)对于组织样品：把组织剪切成细小的碎片。按照每 20 毫克组织加入 150-250 微升裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量) 。 用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。
2、后处理：
充分裂解后，将裂解后的样品 10000-14000g 离心3-5 分钟，取上清，即可进行后续的 PAGE、Western 和免疫沉淀、免疫共沉淀等操作。
注意事项：
为取得最佳的使用效果，尽量避免过多的反复冻融。可以适当分装后使用。裂解样品的所有步骤都需在冰上或 4℃进行。裂解时间可根据实验要求进行优化处理。
非变性蛋白裂解液裂解得到的蛋白样品，可以用 BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度。由于含有较高浓度的 Triton X-100 等干扰物质，不能用 Bradford 法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。