预制胶本身都不含SDS,可根据电泳缓冲液的不同用于变性电泳和非变性电泳(电泳缓冲液需自备)
非变性胶(Native-PAGE)
1. 非变性胶的蛋白迁移率受到蛋白分子量、蛋白空间结构等多种因素影响。
2. 将Plastic gel 预制胶 Tris-Gly 从包装袋中取出,撕掉底部密封胶带。
3. 将预制胶固定在电泳槽中。
4. 准备非变性电泳缓冲液 (#JP9360) :取 500mL 1× Tris-Glycine非变性电泳缓冲液。
5. 阴极加满电泳液,阳极的电泳液最低须加到1/3液面处,最高不可漫过胶板,再缓慢地将梳子拔出。
6. 上样前请使用移液器吸取电泳缓冲液轻轻吹打加样孔,去除加样孔内残余的胶液。
7. 上样:将非变性蛋白样品与 5× 非变性 Loading buffer 进行 4:1 混合均匀。注意枪头不要戳破凝胶,不要过度插入梳孔使胶板变形造成漏液。
8. 电泳条件:180 V, 60 min,当溴酚蓝指示带电泳至胶板底部,或实验预定位置时,即可结束电泳。
9. 电泳结束,取出凝胶。用螺丝刀在板子侧边缘慢慢撬开板子,打开胶盒,轻轻取出凝胶。
10. 酸性蛋白(等电点pI<7)正常上样电泳即可。反之,碱性蛋白(等电点pI>7)带正电荷,需将电极插反(红插黑,黑插红),这时上样孔成为正极,样品向下电泳。
变性胶(SDS-PAGE)
1. 请参考下面的分离图谱选择合适浓度的预制胶,以帮助您进行更好的蛋白电泳条带分离。
2. 将Plastic gel 预制胶 Tris-Gly 从包装袋中取出,撕掉底部密封胶带。
3. 将预制胶固定在电泳槽中。
4. 准备变性电泳缓冲液 (#JP9359) :取 500mL 1× Tris-Glycine变性电泳缓冲液。
5. 阴极加满电泳液,阳极的电泳液最低须加到1/3液面处,最高不可漫过胶板,再缓慢地将梳子拔出。
6. 上样前请使用移液器吸取电泳缓冲液轻轻吹打加样孔,去除加样孔内残余的胶液。
7. 上样:将蛋白样品与 5× 变性Loading buffer (进行4:1混合均匀,加热处理。注意枪头不要戳破凝胶,不要过度插入梳孔使胶板变形造成漏液。
8. 电泳条件:180 V, 60 min,当溴酚蓝指示带电泳至胶板底部,或实验预定位置时,即可结束电泳。
9. 电泳结束,取出凝胶。用螺丝刀在板子侧边缘慢慢撬开板子,打开胶盒,轻轻取出凝胶。
![Plastic gel 预制胶 Tris-Gly 4-20%, 15wells, 1.0mm](http://www.jinpanlab.com/wp-content/uploads/2024/03/20240322_65fcf687ddd78.png)