平末端PCR产物克隆用载体pSIMPLE-19 EcoR V/BAP Vector酶试剂盒Takara Clontech

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平末端PCR产物克隆用载体pSIMPLE-19 EcoR V/BAP Vector
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格(元) 说明书 数量
Takara 6012 pSIMPLE-19 EcoR V/BAP Vector 1.0 μg ¥422 平末端PCR产物克隆用载体pSIMPLE-19 EcoR V/BAP Vector 平末端PCR产物克隆用载体pSIMPLE-19 EcoR V/BAP Vector 平末端PCR产物克隆用载体pSIMPLE-19 EcoR V/BAP Vector
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■ 制品内容
pSIMPLE-19 EcoR V/BAP Vector (50 ng/μl) 20 μl × 1 支
Control Insert 2 (50 ng/μl)* 10 μl × 1 支
   
* 本DNA片段与EcoR V酶切载体连接后,可以使用EcoR V切下DNA片段。
 
■ 制品说明
pSIMPLE-19 EcoR V/BAP Vector是一种高效克隆末端平滑PCR产物的专用载体。本载体由pUC19载体改建而成,它消除了pUC19载体上的多克隆酶切位点,再在多克隆酶切位点处导入了EcoR V酶切位点,使用EcoR V将其切成末端平滑的线性DNA后,进行了5′末端的去磷酸化处理,以避免克隆DNA片段时产生大量载体自连现象。
本载体尽管消除了LacZ基因上的多克隆酶切位点,但不影响 β-半乳糖苷酶的正常表达,PCR扩增片段克隆于载体后仍可以利用α-互补性进行蓝白菌落的筛选,挑选阳性克隆。
有很多高保真DNA聚合酶,如:Takara PrimeSTAR HS、Pyrobest、KOD、PfxPfu等,其扩增的DNA片段为平滑末端,可以方便使用本载体进行DNA克隆。由于本载体的5’ 末端进行了去磷酸化处理,如果PCR扩增片段的5’ 末端不带磷酸基团时,应对其进行5’ 末端磷酸化处理后再使用本载体进行DNA克隆。
由于本载体上消除了多克隆酶切位点,当PCR产物使用本载体进行DNA克隆时,将无法使用载体上的限制酶切下,需要在PCR扩增引物上导入合适的酶切位点。此时如果使用PCR扩增引物导入的酶切位点进行DNA酶切时,酶切反应将不会受到载体上其它多克隆酶切位点上的限制酶影响,可以大大提高酶切效率,增加亚克隆成功率。
本制品的β-半乳糖苷酶的表达活性高,菌落显示蓝色的时间短,菌落显示的蓝色深。因此,克隆后容易进行克隆体的蓝白筛选。
本载体同样可以用于末端平滑的其他DNA片段的克隆。
 
■ 保存
-20℃。
 
■ 纯度
Control Insert2经克隆后的白色菌落中,有90%以上含有Insert DNA片段。
 
■ 用途
1. 平滑末端PCR产物的克隆。
2. 其他平滑末端DNA片段的克隆。
3. 对克隆后的DNA片段使用BcaBEST Sequencing Primers、M13 Primers进行DNA测序。
 
■ pSIMPLE-19 EcoR V/BAP Vector的结构
平末端PCR产物克隆用载体pSIMPLE-19 EcoR V/BAP Vector
 
■ 注意事项
1. 由于载体上的多克隆酶切位点被破坏,所以使用本载体克隆PCR产物时,注意应在PCR引物上设计导入酶切位点,否则将会难以切下DNA片段进行其它亚克隆实验。
2. 为了避免载体自连,本载体进行了去磷酸化处理,因此Insert DNA片段的5′端必须保证带有磷酸基团,否则无法进行连接。Takara PrimeSTAR HS、Pyrobest、KOD、PfxPfu 等DNA聚合酶扩增的PCR片段须经过磷酸化处理后才能进行连接反应(引物的5′端进行磷酸化标记时除外)。
3. 克隆时使用的Insert DNA片段 (PCR产物) 建议进行切胶回收纯化,否则PCR产物中的短片段DNA (甚至是电泳也无法确认的非特异性小片段)、残存引物等杂质都会影响克隆效率。
4. 按照本实验操作进行连接后,直接进行转化时的连接液不要超过20 μl。当要转化的DNA量较大或准备进行电转化时,需对连接液进行乙醇沉淀,纯化DNA后再进行转化。进行乙醇沉淀时使用Dr. GenTLE Precipitation Carrier (Code No.: 9094) 可以提高DNA的回收率。
5. 连接反应请在25℃以下进行,温度升高 (>26℃) 较难形成环状DNA。连接效率偏低时,可适当延长连接反应时间至数小时。
6. 本制品来源于pUC19载体,因此,适合pUC19载体的感受态细胞都可以使用,如: JM109等。
 
 

页面更新:2024-01-25 16:07:10

2xSuper Taq PCR 预混液(含染料)

2xSuper Taq PCR 预混液(含染料)

¥400.00

货号:BL1015C

规格:1ml×10

品牌:biosharp

商品详情:

2xSuper Taq PCR 预混液(含染料)

产品编号

产品名称

规格

BL1015A

2xSuper Taq PCR 预混液(含染料)

1 ml

BL1015B

2xSuper Taq PCR 预混液(含染料)

1 ml×5

BL1015C

2xSuper Taq PCR 预混液(含染料)

1 ml×10

 

产品简介:

本产品是将PCR反应所需的Taq DNA聚合酶、dNTPsMg2+、反应缓冲液以及稳定剂等成分预先配制成2倍浓度的混合溶液。本产品所用的Taq DNA聚合酶是一种经优化的混合酶,具有5’-3’ DNA 聚合酶活性和3’-5’的外切酶活性,能够纠正DNA扩增过程中产生的碱基错配现象,在标准缓冲液中其保真度约相当于普通Taq DNA Polymerase6倍。该酶合成能力很强,即使是复杂的模板,也能快速准确的完成反应,反应速度约为30 s/kb。对于一般性模板可以保证15 kb的扩增长度

使用含染料的产品在PCR反应完成后,不需添加上样缓冲液即可直接上样进行电泳,红色染料可指示电泳进程;PCR产物经过纯化处理,用于酶切、连接、荧光测序等后续操作。本产品适用于:复杂模板的扩增,快速扩增。同时High-GC Enhancer可适用于高GC含量、具有复杂二级结构的模板的扩增。

 

产品特点:

本产品适用于复杂难扩增模板扩增,具有快速简便、灵敏度高、稳定性好等优点,使用时只需加入DNA模板和引物,并用水补足体积,可最大限度地减少人为误差、节约时间、降低污染几率。部分PCR产物具有3’端突出碱基,可直接用于TA克隆,加A处理后可提高TA克隆效率。

 

产品组份:

组分

BL1015A

BL1015B

BL1015C

2xSuper Taq PCR 预混液(含染料)

1 ml

1 ml × 5

1 ml × 10

5×High-GC Enhancer

0.4 ml

0.4 ml × 5

0.4 ml × 10

 

 

 

使用方法:

详见说明书。

 

注意事项:

1.  本产品Taq DNA 聚合酶扩增时延伸速度约为 30 s/1 kb,不要超过 1 min/1 kb

2.  采用本产品扩增时,当引物长度大于 20 个碱基,退火温度应设定为 Tm+3℃;当引物小于 20 个碱基,退火温度应设定 为最低的 Tm 值。建议使用引物终浓度为 0.5 μM,如果需要可在 0.2-1.0 μM 之间调整。

3.  本产品具有较高的热稳定性,变性温度可以设置为 94-98℃。扩增≥10kb 片段时,推荐的变性温度为 94℃,变性时间 为 30 s

4.  本产品Taq DNA 聚合酶的 PCR 产物经过纯化后,可直接用于 TA 克隆;如产物经加 A 处理后可进一步提高 TA 克隆效率。

5.  经多个高 GC PCR 项目测试,产品组分“5×High-GC Enhancer”在不同的项目中对 PCR 扩增的促进效果存在波动, 部分项目甚至会出现 PCR 抑制,因此在开展新的 PCR 项目时,需要首先经过测试,再决定是否添加“5×High-GC Enhancer”

6.  本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品。

7.  为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

 

有效期

-20℃保存,保质期 24 个月,避免反复冻融。

货号 BL1015C
规格 1ml×10
品牌 biosharp

UE-96PCR清洁试剂盒 货号: UE-96-PCR-4/UE-96-PCR-24 规格: 4T/24T

UE-96PCR清洁试剂盒

产品货号: UE-96-PCR-4/UE-96-PCR-24

产品规格: 4T/24T

目录价(元):2150.6/10894.3

大包装询价


产品概述:

储存条件
Buffer PCR-A: DNA结合溶液。室温密闭贮存。
Buffer W2 concentrate: 去盐液。 使用前,按试剂瓶上指定的体积加入无水乙醇(可用100%乙醇或95%乙醇),混合均匀,室温密闭贮存。
Eluent: 2.5 mM Tris-HCI, pH 8.5。室温密闭贮存。

UE-96PCR清洁试剂盒 货号:               UE-96-PCR-4/UE-96-PCR-24  规格:               4T/24T

流程图

UE-96PCR清洁试剂盒 货号:               UE-96-PCR-4/UE-96-PCR-24  规格:               4T/24T

说明书:

UE-96PCR清洁试剂盒 货号:               UE-96-PCR-4/UE-96-PCR-24  规格:               4T/24T UE-UE-96-PCR-4/UE-96-PCR-24    
常见问题解答:

得率低或者得不到DNA
·Buffer W2中没有加入乙醇
Buffer W2在使用之前必需加入100%或者95%的乙醇。
·不合适的洗脱液
DNA只能在低盐和pH7.0的条件下有效的洗脱。应使用试剂盒提供的洗脱液或者用水(pH7.0)洗脱。在65℃下预热洗脱液可以提高洗脱效率。
·洗脱液体积不够或者没有浸润膜
洗脱液应加在制备膜的中央以确保其均匀的浸润整个膜。
·采用不合适的负压装置
确保负压保持在 -25至-30英尺汞柱。

DNA不能很好地用于下游实验
·洗脱时盐浓度过高 
确保在洗脱之前盐分都被洗涤去除。正确使用Buffer W1,避免在管体上残留。
·样品上样电泳时样品跑出胶孔
洗脱液中残留有乙醇(样品会飘在琼脂糖凝胶孔中)
仔细的操作说明书中的所有步骤以去除残留的乙醇。
·洗脱液中含有引物二聚体
引物二聚体会影响后续的反应,如测序。任何大于40bp的引物二聚体都将不会被完全去除。结合完后,用750ul盐酸胍(35g盐酸胍溶于100ml去离子水)洗涤UE PCR清洁制备管或者制备板,然后再接着进行说明书中所述的洗涤洗脱步骤。
·洗脱液中含有变性的单链DNA,这在凝胶电泳中可见一条又小又淡又糊的条带
洗脱后,将洗脱液在95℃中温浴2min。在使用前冷却至室温。95℃温浴2min后也可以在洗脱液中加入10 mM NaCl以促进复性。

PCR相关耗材酶试剂盒Takara Clontech

上海金畔生物科技有限公司代理Takara酶试剂盒全线产品,欢迎访问官网了解更多产品信息和订购。

PCR相关耗材
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格(元) 说明书 数量
Takara 9148 TaKaRa PCR Micro Strip 8-Tube 120 strips ¥401 PCR相关耗材 PCR相关耗材
Takara 9149 TaKaRa PCR Micro Strip 8-Cap 120 strips ¥401 PCR相关耗材 PCR相关耗材
Takara NJ200 0.2 ml Hi-Tube Dome Cap 1000 pcs ¥745 PCR相关耗材 PCR相关耗材
Takara NJ300 0.2 ml Hi-8-Tube 125 strips ¥1,350 PCR相关耗材 PCR相关耗材
Takara NJ301 0.2 ml Hi-8-Dome Cap 125 strips ¥296 PCR相关耗材 PCR相关耗材
Takara NJ302 0.2 ml Hi-8-Flat Cap 125 strips ¥552 PCR相关耗材 PCR相关耗材
Takara NJ710 96 well snap plate 10 plates ¥530 PCR相关耗材 PCR相关耗材
Takara NJ720 Flat cap for snap plate 120 strips ¥461 PCR相关耗材 PCR相关耗材
Takara NJ204 0.2 ml Single-Tube Dome Cap 1000 pcs ¥627 PCR相关耗材 PCR相关耗材 PCR相关耗材
Takara NJ205 0.2 ml Single-Tube Flat Cap 1000 pcs ¥627 PCR相关耗材 PCR相关耗材 PCR相关耗材
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■ 各反应管的适用PCR仪
 PCR反应管
0.2 ml single tube Dice Gradient
(TP600)
Dice Touch
(TP350)
制品名称 Code No. 反应液量* 反应液量*
 0.2 ml Hi-Tube Dome Cap NJ200 5~50 μl 5~50 μl
 0.2ml Single-Tube Dome Cap NJ204
 0.2ml Single-Tube Flat Cap NJ205
 *使用的反应液量少时,会出现反应结果不稳定的情况。Dice Gradient可以设置的最大反应液量是150 μl,Dice Touch可以设置的最大反应液量是100 μl,反应液量设置超过最大反应液量时,需要将Hold时间延长。
 
0.2ml 8联tube & cap Dice Gradient
(TP600)
Dice Touch
(TP350)
制品名称 Code No. 5 μl 10 μl 50 μl 5 μl 10 μl 50 μl
 0.2 ml Hi-8-Tube NJ300 ×
 0.2 ml Hi-8- Dome Cap NJ301
 0.2 ml Hi-8-Tube NJ300
 0.2 ml Hi-8-Flat Cap NJ302
 PCR Micro Strip 8-Tube 9148
 PCR Micro Strip 8-Cap 9149
 ◎:扩增稳定 
 △:每孔的扩增产物都有偏差,反应液有蒸发现象。  
 ×:不适用
 ―:未研讨
 
 【反应条件】
 按照表中所记载的反应体系进行下面的PCR反应。 
TP350/TP600/TP650
Target:λ DNA 8 kb
试剂:TaKaRa Taq
94℃ 30 sec. PCR相关耗材 30 Cycles
 
65℃ 10 min.
   
 
 【注意】 0.2 ml Hi-Tube系列反应管和0.2 ml Hi 8联Tube系列反应管,可以用于SP。但不能用于MP、PERSONAL和GP,这3种PCR仪需要与TaKaRa PCR Micro Strip 8-Tube(Code No. 9148)及TaKaRa PCR Micro Strip 8-Cap(Code No. 9149)配套使用。
 
 PCR反应板
  专用Cap 适用PCR Thermal Cycler
TaKaRa 96 well PCR Hi-Plate
(Code No. NJ111)
TaKaRa PCR Hi-Caps
(Code No. NJ811)
Dice系列(TP600/TP350)
96 well snap plate
(Code No. NJ710)
Flat cap for snap plate
(Code No. NJ720)
Dice系列(TP600/TP350)
注意】各反应管和反应板请使用各自的专用Cap。如果使用不配套的cap,反应液可能会有蒸发的现象。
 
 【High grade type tube】
 【特长】 PCR相关耗材
· 无需灭菌处理
· Cap有圆顶和平顶两种
· Cap深入孔内的部分长,密封性更好
· Tube内壁不容易残留样品
   *灭菌处理会使反应性能下降,请不要灭菌。
PCR相关耗材
0.2 ml Hi-Tube Dome Cap (Code No. NJ200)
 
 【96孔板】
PCR相关耗材 PCR相关耗材
TaKaRa 96 well PCR Hi-Plate (Code No. NJ111) 96 well snap plate (Code No. NJ710)
   
*未灭菌。使用时,请根据需要进行灭菌处理。
灭菌不会变形。
RNase、DNase free(不需要灭菌*)
*灭菌处理可能会使反应性能下降,请不要灭菌。
 
PCR相关耗材 PCR相关耗材
TaKaRa PCR Hi-Caps(8联) (Code No. NJ811) Flat cap for snap plate (Code No. NJ720)
 
 

页面更新:2019-12-23 14:50:59