MTT配制以及注意事项

MTT全称为3-（4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2-H-tetrazolium bromide，又称噻唑蓝。用于细胞增殖及细胞活性测定和对体外细胞的细胞毒性的测定。
MTT的原理
检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲臢（Zā）（Formazan）并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。二甲基亚砜（DMSO）能溶解细胞中的甲臢（Zā），用酶标仪在490nm波长处(英文说明书写的是570nm）测定其光吸收值，在一定细胞数范围内，MTT结晶形成的量与细胞数成正比。根据测得的吸光度值（OD值），来判断活细胞数量，OD值越大，细胞活性越强（如果是测药物毒性，则表示药物毒性越小）。
MTT配制方法
通常MTT配成的终浓度为5mg/ml，须用PBS（磷酸缓冲液）或生理盐水做溶剂。（市面上一般MTT的包装为100mg,250mg或1g）
1.对于100mg这样的小包装，厂家都是将MTT放入小管中的，建议不要再用天平称量分装，而应该一次性将其全配制成溶液，如100mg用20m1PBS来溶解。
具体做法：
预先在50ml离心管(没有的话，可用培养瓶替代)加入20m1PBS，从中先吸取500-1000u1PBS
装入含MTT的小管中，吹打若十次后将其移入50ml离心管，然后再混匀。可以重复几次以使小管中的MTT不残留于管内。将MTT完全混匀后，用0.22?um滤膜过滤以除去溶液里的细菌，分装避光(避光袋或是黑纸、锡箔纸包住)可长期保存于-20度。按细胞培养板每孔需加10u1计算，一般每96孔板约击1m1，所以分装时可考虑每管分装1ml。
2.对于大包装，可按上述方法称取一部分溶解，也有人将粉剂分装在EP管里，用的时候现配，直接往培养板中加。
3.配制MTT时用PBS溶解，也有人用生理盐水配，60度水浴助溶。PBS配方：NaCl?8g，
KCl0.2g，Na2HPO41.44g，KH2PO40.24g，调PH?7.4，定容至1L。
注意事项：
1、在配制和保存的过程中，容器最好用铝箔纸包住。
2、配成的MTT需要无菌，MTT对菌很敏感。
3、MTT一般最好现用现配，过滤后4度避光保存两周内有效，或配制成Smg/ml保存在-20
度长期保存，避免反复冻融，最好小剂量分装，用避光袋或是黑纸、锡箔纸包住避光以免分解。当MTT变为灰绿色时就绝对不能再用。
4、MTT有致癌性，用的时候小心，有条件最好带那种透明的簿膜手套。