MycoStrip™—细胞支原体污染检测原来可以这么简单
支原体污染是细胞培养中一个主要的污染问题,能够严重影响实验结果的重现性和有效性。InvivoGen公司凭借40多年为科学界开发支原体解决方案的经验,开发了简单可靠的检测细胞培养支原体污染的MycoStrip™试剂盒,基于等温PCR的技术检测支原体污染,在5分钟内就能于免疫层析试纸条上快速显示结果。
支原体属于柔膜菌纲,其成员特征为缺乏细胞壁以及拥有多变的形态。支原体对包括原代细胞在内的所有真核细胞类型具有高度传染性。成百上千的支原体可以附着在一个细胞上,与细胞膜融合、繁殖,最终数量可以超过培养细胞1000倍。支原体没有细胞壁的特点使它们对常用的抗生素(如青霉素和链霉素)产生抗性。 此外,它们的尺寸微小(~100 nm),能够穿透过 0.2 μm 的标准过滤膜。支原体与宿主细胞竞争营养素和代谢物前体,它们能改变许多细胞功能,影响到细胞代谢和细胞生长,最终导致细胞死亡。因此,我们需要采取预防措施来防止细胞培养物受到污染。
目前的支原体检测方法大多费时费力。Japanese cell bank验证了由InvivoGen开发的基于等温PCR的支原体快速检测试剂盒MycoStrip的有效性,并将其检测灵敏度与其他检测方法进行了比较。实验中,将M. hyorhinis支原体(NBRC 14858)加入到VERO细胞(JCRB0111)中进行培养,稀释后的样品分别用MycoStrip、生物发光法(Bioluminescence assay)、荧光染色法(Fluorescent staining)和Nested-PCR进行检测。经证实,MycoStrip的灵敏度与荧光染色的灵敏度相当,显示出足够的检测效率证明了基于等温PCR的MycoStrip是一种简单且高度通用的支原体检测方法,因为该检测方法不需要特殊设备,将试剂与样品混合并滴在试纸上即可轻松快速地获得结果。MycoStrip可普遍用于支原体污染的常规检测。
MycoStrip™ 优势
• 简单:只需要一个加热块
• 快速:2—5分钟内显示结果
• 轻松解读:试纸条上出现一或两条条带
• 最少的操作时间:<15分钟
• 总检测时长:<1小时
• 灵敏度高:检测限低至1 x 102 CFU/ml
• 特异性高:无交叉反应
• 稳定:试剂盒可在-20°C下保存1年
使用MycoStrip™检测支原体
MycoStrip™专门设计用于检测最常污染细胞培养的支原体和无胆甾原体,其中包括导致95%细胞培养污染的六个物种。重要的是,使用MycoStrip™不会与任何其他细菌、真菌或哺乳动物DNA发生交叉反应。
4 个简单步骤检测细胞培养物中的支原体
50 和100 strips的规格还可以提供不带卡壳的形式,更经济、环保。
产品组份
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With cassette
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Without cassette
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产品名称
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MycoStrip™
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MycoStrip™ 50
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MycoStrip™ 100
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产品货号
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rep-mys-10
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rep-mys-20
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rep-mys-50
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rep-mysnc-50
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rep-mysnc-100
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组分
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10 Tests
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20 Tests
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50 Tests
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50 Tests
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100 Tests
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• Reaction Mix
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1 vial
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2 vials
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5 vials
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5 vials
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10 vials
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• Reaction Buffer
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1 vial
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2 vials
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4 vials
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4 vials
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8 vials
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• Migration Buffer
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2 vials
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3 vials
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1 bottle
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1 bottle
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2 bottles
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• Positive Control
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1 vial
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1 vial
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1 vial
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1 vial
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2 vials
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• Detection strips
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10
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20
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50
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50
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100
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结果示例
常见问题
1. 如果支原体检测呈阳性怎么办?
InvivoGen有解决方案!可以使用InvivoGen全面的抗支原体试剂清除和预防污染。推荐用Plasmocin™ 或Plasmocure™ ,治疗完成后(约2周),使用MycoStrip™重新检测。
2. 收集的待测上清液中含有一些细胞,会干扰检测吗?
无需担心,哺乳动物细胞DNA的存在不会影响检测分析。
3. 样品制备过程中,将样品加热到95°C是否有好处?
敏感度没有提高,但此步骤可以杀死支原体,避免接触活的支原体。
4. 是否每次使用MycoStrip™时都需要设立阳性和阴性对照?
包括阳性和阴性对照的定期监测,对于结果的可靠性以及故障排除很重要。
5.在什么阶段可以冻存样品以供后续检测分析?
可以按照以下方式储存样本:
• 细胞培养上清液:在开始“样品制备”方案之前,可以将上清液储存在-20°C直到需要使用时。使用前,将样品在37°C下完全解冻,涡旋充分混匀以确保所有盐溶解。
• 已制备的样品:执行“样品制备”方案的步骤1-4之后,可以将样品存储在-20°C直至需要使用时。
• 处理过的样品:执行“检测分析”方案的步骤1-4之后,处理过的样品在-20°C下最多保存3个月。
6. 有一个样本的测试带模糊,不能确定是否应将其视为支原体污染的阳性结果?
如果其中一个样品上观察到一条微弱的条带,可以认为这是支原体污染的阳性结果。建议使用以下方法确认此结果:
• 浓缩样品:使用更大体积的上清液并重复“样品制备”方案中步骤2-3。使用MycoStrip™重新检测浓缩后的样品。
• 在使用MycoStrip™重新检测之前,继续培养细胞48小时。
• 使用无菌水(不含核酸酶)替代PBS重悬样品,以提高检测的灵敏度。
7. 实验室中没有热循环仪,可以使用什么代替?
可以使用校准过的加热块或水浴代替。请注意,使用水浴可能会引入新的污染源。
8. 如果将准备好的样品在加热块上放置了一个多小时,是否仍然能使用该样品?
在65°C下孵育40分钟以上会显著影响检测结果,因此不建议继续使用此样品。
MycoStrip™相关产品推荐
产品货号 |
产品名称
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规格
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产品说明
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rep-pt1
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PlasmoTest™
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1 kit (250 samples)
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细胞比色分析法检测支原体污染
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pt-ctr2
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PlasmoTest™ Controls
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200 tests
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PlasmoTest™试剂盒对照
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rep-ptrk
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PlasmoTest™ Reagent Kit
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500 samples
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PlasmoTest™试剂盒补充试剂
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ant-mpp
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Plasmocin® prophylactic
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25 mg (10 x 1 ml)
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支原体预防试剂
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ant-mpt
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Plasmocin® treatment
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50 mg (2 x 1 ml)
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支原体清除试剂
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ant-mpt-1
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Plasmocin® treatment
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25 mg (1 x 1ml)
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支原体清除试剂
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ant-pc
|
Plasmocure™
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100 mg (1 ml)
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强效支原体清除抗生素,适合用于带有Plasmocin抗药性支原体
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InvivoGen于1997年成立于法国,致力于天然免疫相关产品的研发和生产, InvivoGen拥有强大的化学和分子生物学团队,专注于研究和合成基因治疗和疫苗接种领域科研用途的分子和质粒。InvivoGen公司提供各类PRRs(模式识别受体)相关的全套产品,包括PRRs配体(激动剂和拮抗剂)、PRRs诱导剂和抑制剂、报告细胞系、抗体和基因;另外,高纯度的基因筛选抗生素、效果显著的支原体预防和去除抗生素也是InvivoGen的特色产品。
详情请联系 Invivogen 全国代理-上海金畔生物科技