MTT 噻唑蓝

MTT 噻唑蓝

货号:
IM0280

品牌:
Jinpan

MTT  噻唑蓝

暂无详情

MTT  噻唑蓝

Zhong QW, et al. Food Chem. 2021 Mar 30;341(Pt 1):128148.
产品简介
EC EINECS 206-069-5
MDL MFCD00011964
别名 噻唑蓝溴化四唑; Thiazolyl blue tetrazolium bromide; 3-(4,5-二甲基-2-噻唑基)-2,5-二苯基四氮唑溴化物; 3-(4,5-Dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2H- tetrazolium bromide; Methylthiazolyldiphenyl-tetrazolium bromide
CAS 298-93-1
分子式 C18H16BrN5S
分子量 414.32
纯度 ≥98%
单位
生物活性 MTT是一种广泛用于测量细胞增殖的比色剂。 MTT在活细胞中从黄色还原为紫色。
In Vitro MTT与罗丹明B联合使用以测量线粒体膜电位。 MTT-formazan在线粒体中产生,作为罗丹明的荧光猝灭剂,根据膜电位分布在活细胞膜上。在没有mPMS的情况下,MTT的细胞减少很强。当MTT掺入大的单层脂质体中时,它是不透膜的,因此它通过内吞作用被细胞摄取[1]。
SMILES CC1=C(C)N=C(N2N=C(C3=CC=CC=C3)N=[N+]2C4=CC=CC=C4)S1.[Br-]
靶点 Others
数据来源文献 [1]. Berridge MV, et al. Tetrazolium dyes as tools in cell biology: new insights into their cellular reduction. Biotechnol Annu Rev. 2005;11:127-52.
规格 200mg 10mM*1mL (in DMSO) 5mg/mL*1mL in Water 500mg 1g

MTT是一种广泛用于测量细胞增殖的比色剂。MTT可以被线粒体内的一些脱氢酶还原生成结晶状的深紫色产物formazan,可以被DMSO完全溶解,然后通过酶标仪可以测定490nm波长附近的吸光度。细胞增殖越多越快,则吸光度越高;细胞毒性越大,则吸光度越低。

注意事项:MTT溶液需避光保存,长时间光照会导致失效。当颜色变为灰绿色时,请勿使用。


使用说明(仅供参考

1.收集对数期细胞,根据自己的实验需求,培养细胞。
2.小心吸去上清,加入90μL新鲜培养基,再加入10μL MTT溶液,继续培养4 h。
3.然后吸掉上清,每孔加入110μL DMSO,置摇床上低速振荡10 min,使结晶物充分溶解。

4.在酶联免疫检测仪490 nm处测量各孔的吸光值。

注:MTT溶液浓度一般的常用浓度为0.5%(仅供参考),实验者也可根据自己的实验需求进行调整。

使用本产品的应用案例(仅供参考

In Vitro

Cell (HEK-293 cells,37 °C ,4 h,490nm)

Cell viability was determined by a quantitative colorimetric assay with MTT. To screen the pre-protection of SDAP1 and SDAP2, cells were pretreated with SDAP1 and SDAP2 (0.25, 0.5, 0.75, 1, 1.25, 1.5 mg/mL) before administration of GM (3 mg/mL) for 24 h. HEK-293 cells were dispensed in 96-well plates at a density of 8,000 cells/well and cultured at 37 °C for 24 h. Afer 24 h incubation, cells were treated with various concentrations of SDAP1 and SDAP2 (0.25, 0.5, 0.75, 1, 1.25 and 1 mg/mL) at 24 h, and aferwards exposed to GM (3 mg/mL) for 24 h. Next, afer 24 h of GM treatment, the MTT solution was added to each well, and incubated at 37 °C for 4 h. Te medium was removed, and 150 μL of dimethylsulfoxide (Jinpan, China) was added to each well. Finally, the optical density was detected with a microplate reader at 490 nm.

来源文献:Wang Z, Wang L, Wang J, Luo J, Ruan H, Zhang J. Purified Sika deer antler protein attenuates GM-induced nephrotoxicity by activating Nrf2 pathway and inhibiting NF-κB pathway. Sci Rep. 2020 Sep 24;10(1):15601. doi: 10.1038/s41598-020-71943-6. PMID: 32973191; PMCID: PMC7518274.

Cell(HepG2 Cell,5 mg/mL MTT,4h, 570nm

Methylthiazole tetrazolium (MTT) assay was applied to measure the cell viability of  Up-3, Up-4, and Up-5. Briefly, after incubation, the cells was washed with PBS, and  incubated with 10 µL of MTT (5 mg/mL) for 4 hours. The supernatants was mixed  with 100 µL of DMSO and then the absorbance was measured at 570 nm with a  microplate reader. The absorbance of the  untreated cells (Normal group) was considered as 100%.

来源文献:Zhong QW, Zhou TS, Qiu WH, Wang YK, Xu QL, Ke SZ, Wang SJ, Jin WH, Chen JW, Zhang HW, Wei B, Wang H. Characterization and hypoglycemic effects of sulfated polysaccharides derived from brown seaweed Undaria pinnatifida. Food Chem. 2021 Mar 30;341(Pt 1):128148. doi: 10.1016/j.foodchem.2020.128148. Epub 2020 Sep 22. PMID: 33038776.

噻唑兰MTT

噻唑兰MTT

货号:BS186-250mg

规格:250mg

品牌:Biosharp

产品简介:
MTT 又称噻唑蓝。用于细胞增殖及细胞活性测定和对体外细胞的细胞毒性的测定。
检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性 MTT 还原为水不溶性的蓝紫色结
晶甲臢并沉积在细胞中,而死细胞无此功能。二甲基亚砜能溶解细胞中的甲臢,用酶标仪在 490nm 波长处测定其光吸收值,在一定细胞数范围内,MTT 结晶形成的量与细胞数成正比。根据测得的吸光度值,来判断活细胞数量,OD 值越大,细胞活性越强。
别名:噻唑四唑蓝溴化盐;噻唑蓝四唑蓝;溴化噻唑蓝四氮唑
CAS:298-93-1
分子式: C18H16BrN5S
分子量: 414.32
储存条件: 2-8℃,避光保存
外观(性状): 黄色或橙黄色粉末
单位:瓶
有效期:一年
应用: 生化试剂,可用于细胞增殖及细胞活性测定。
使用方法:通常,MTT 浓度为 5mg/ml。称取 MTT 0.5 克,溶于 100 ml 的磷酸缓冲液
(PBS)或无酚红的培养基中,用 0.22μm 滤膜过滤以除去溶液里的细菌,放 4℃ 避光保存即可。在配制和保存的过程中,容器最好用铝箔纸包住。(配置方法仅供参考,请根据具体实验要求结合文献进行使用)
注意:
1. 需使用新鲜的 PBS,已经长菌的 PBS 会导致 MTT 溶解后出现蓝黑色沉淀。
2. 本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗,食品及化妆品等用途。
3. 为了您的安全和健康,请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。
货号 BS186-250mg
规格 250mg
品牌 Biosharp
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TT配制以及注意事项

MTT配制以及注意事项
MTT全称为3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2-H-tetrazolium bromide,又称噻唑蓝。用于细胞增殖及细胞活性测定和对体外细胞的细胞毒性的测定。
MTT的原理
检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲臢(Zā)(Formazan)并沉积在细胞中,而死细胞无此功能。二甲基亚砜(DMSO)能溶解细胞中的甲臢(Zā),用酶标仪在490nm波长处(英文说明书写的是570nm)测定其光吸收值,在一定细胞数范围内,MTT结晶形成的量与细胞数成正比。根据测得的吸光度值(OD值),来判断活细胞数量,OD值越大,细胞活性越强(如果是测药物毒性,则表示药物毒性越小)。
MTT配制方法
通常MTT配成的终浓度为5mg/ml,须用PBS(磷酸缓冲液)或生理盐水做溶剂。(市面上一般MTT的包装为100mg,250mg或1g)
1.对于100mg这样的小包装,厂家都是将MTT放入小管中的,建议不要再用天平称量分装,而应该一次性将其全配制成溶液,如100mg用20m1PBS来溶解。
具体做法:
预先在50ml离心管(没有的话,可用培养瓶替代)加入20m1PBS,从中先吸取500-1000u1PBS
装入含MTT的小管中,吹打若十次后将其移入50ml离心管,然后再混匀。可以重复几次以使小管中的MTT不残留于管内。将MTT完全混匀后,用0.22?um滤膜过滤以除去溶液里的细菌,分装避光(避光袋或是黑纸、锡箔纸包住)可长期保存于-20度。按细胞培养板每孔需加10u1计算,一般每96孔板约击1m1,所以分装时可考虑每管分装1ml。
2.对于大包装,可按上述方法称取一部分溶解,也有人将粉剂分装在EP管里,用的时候现配,直接往培养板中加。
3.配制MTT时用PBS溶解,也有人用生理盐水配,60度水浴助溶。PBS配方:NaCl?8g,
KCl0.2g,Na2HPO41.44g,KH2PO40.24g,调PH?7.4,定容至1L。
注意事项:
1、在配制和保存的过程中,容器最好用铝箔纸包住。
2、配成的MTT需要无菌,MTT对菌很敏感。
3、MTT一般最好现用现配,过滤后4度避光保存两周内有效,或配制成Smg/ml保存在-20
度长期保存,避免反复冻融,最好小剂量分装,用避光袋或是黑纸、锡箔纸包住避光以免分解。当MTT变为灰绿色时就绝对不能再用。
4、MTT有致癌性,用的时候小心,有条件最好带那种透明的簿膜手套。

TT配制以及注意事项

噻唑兰MTT

噻唑兰MTT

货号:BS186-1g

规格:1g

品牌:Biosharp

产品简介:
MTT 又称噻唑蓝。用于细胞增殖及细胞活性测定和对体外细胞的细胞毒性的测定。
检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性 MTT 还原为水不溶性的蓝紫色结
晶甲臢并沉积在细胞中,而死细胞无此功能。二甲基亚砜能溶解细胞中的甲臢,用酶标仪在 490nm 波长处测定其光吸收值,在一定细胞数范围内,MTT 结晶形成的量与细胞数成正比。根据测得的吸光度值,来判断活细胞数量,OD 值越大,细胞活性越强。
别名:噻唑四唑蓝溴化盐;噻唑蓝四唑蓝;溴化噻唑蓝四氮唑
CAS:298-93-1
分子式: C18H16BrN5S
分子量: 414.32
储存条件: 2-8℃,避光保存
外观(性状): 黄色或橙黄色粉末
单位:瓶
有效期:一年
应用: 生化试剂,可用于细胞增殖及细胞活性测定。
使用方法:通常,MTT 浓度为 5mg/ml。称取 MTT 0.5 克,溶于 100 ml 的磷酸缓冲液
(PBS)或无酚红的培养基中,用 0.22μm 滤膜过滤以除去溶液里的细菌,放 4℃ 避光保存即可。在配制和保存的过程中,容器最好用铝箔纸包住。(配置方法仅供参考,请根据具体实验要求结合文献进行使用)
注意:
1. 需使用新鲜的 PBS,已经长菌的 PBS 会导致 MTT 溶解后出现蓝黑色沉淀。
2. 本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗,食品及化妆品等用途。
3. 为了您的安全和健康,请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。
货号 BS186-1g
规格 1g
品牌 Biosharp
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MTT细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒

MTT细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒

货号:BL132A

规格:500T

品牌:Jinpan

MTT细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒

产品编号

产品名称

规格

BL132A

MTT细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒

500 T

BL132B

MTT细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒

1000 T

 

产品简介:

MTT分析法以代谢还原噻唑蓝3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl tetrazolium bromide (MTT)为基础。活细胞的线粒体中存在与NADP相关的脱氢酶,可将黄色的MTT还原为不溶性的蓝紫色的甲臜(Formazan),死细胞此酶消失,MTT不被还原。用DMSO溶解Formazan 后可用酶标仪在490nm波长处检测光密度。

 

产品组成:

组分

名称

规格

保存

500T

1000T

试剂一

5×MTT

5 mL

10 mL

-20℃避光干燥

试剂二

Dilution Buffer

25 mL

50 mL

2-8避光干燥

注:5×MTT溶液收到后建议分装保存到-20℃,避光保存,一年有效

 

使用方法:

见说明书

 

注意事项:

1、 悬浮细胞用此法时必须经离心后才能吸出上清再加DMSO

2、 Formazan的生成不仅与活细胞数成比例,也受作用时间的影响,因此当样品较多时测定的OD值可能随时间而变。

3、 用不同试剂溶解Formazan时,测定的OD值不同:DMSO溶解时,建议在490nm波长下检测;若用含SDS的相关溶剂溶解,建议在570nm下检测。

4、 本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品。

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

 

保存条件:

-20℃避光保存一年

货号 BL132A
规格 500T
品牌 Jinpan
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MTT细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒

MTT细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒

货号:BL132B

规格:1000T

品牌:Jinpan

MTT细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒

产品编号

产品名称

规格

BL132A

MTT细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒

500 T

BL132B

MTT细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒

1000 T

 

产品简介:

MTT分析法以代谢还原噻唑蓝3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl tetrazolium bromide (MTT)为基础。活细胞的线粒体中存在与NADP相关的脱氢酶,可将黄色的MTT还原为不溶性的蓝紫色的甲臜(Formazan),死细胞此酶消失,MTT不被还原。用DMSO溶解Formazan 后可用酶标仪在490nm波长处检测光密度。

 

产品组成:

组分

名称

规格

保存

500T

1000T

试剂一

5×MTT

5 mL

10 mL

-20℃避光干燥

试剂二

Dilution Buffer

25 mL

50 mL

2-8避光干燥

注:5×MTT溶液收到后建议分装保存到-20℃,避光保存,一年有效

 

使用方法:

见说明书

 

注意事项:

1、 悬浮细胞用此法时必须经离心后才能吸出上清再加DMSO

2、 Formazan的生成不仅与活细胞数成比例,也受作用时间的影响,因此当样品较多时测定的OD值可能随时间而变。

3、 用不同试剂溶解Formazan时,测定的OD值不同:DMSO溶解时,建议在490nm波长下检测;若用含SDS的相关溶剂溶解,建议在570nm下检测。

4、 本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品。

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

 

保存条件:

-20℃避光保存一年

货号 BL132B
规格 1000T
品牌 Jinpan
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MTT细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒

MTT细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒货号: JP50010

产品描述
描述

MTT 法又称 MTT 比色法,是一种检测细胞存活和生长的方法。其检测原理为活细胞线粒体中的琥珀 酸脱氢酶能使外源性 MTT 还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒(Formazan)并沉积在细胞中,而死细胞无此功能。在一定细胞数范围内,MTT 结晶形成的量与细胞数成正比,吸光度越大,表示细胞活性越强,说明药物毒性越小。该方法已广泛用于一些生物活性因子 的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验以及肿瘤放射敏感性测定等。它的特点是灵敏度 高、经济。

组分:MTT(25mg)、MTT 溶剂(5ml)、Formazan 溶解液(55ml)
使用方法
1、将细胞板放置于无菌操作台中。 2、在细胞板中每孔加入10%体积的 MTT溶溶剂。 【MTT溶液的配制:用5ml MTT溶剂溶解25mg MTT,配制成5mg/ml的MTT溶液。配制后即可使用,或直接-20℃避光保存,也可以根据需要适当分装后-20℃避光保存。】 3、将细胞板放回培养箱中继续孵育3 – 4小时。做对比试验时,孵育时间需一致。 4、孵育后将细胞板从培养箱中拿出,按照下面的方法溶解产生MTT甲臜结晶物。 (1)如果是贴壁细胞,则弃去培养基。加入与初始体积等量的Formazan Solvent。每孔的溶解液体积可能不同,但为了方便比较,总体积须保持一致。 (2)如是非贴壁细胞或培养基的去除会造成MTT甲臜丢失,则直接在培养基中加入与初始体积等量的溶解 液。 (3)加入 Formazan Solvent 后,须在 1 小时内完成读数。 5、在摇床中温和地振荡可增强溶解。某些情况下,尤其是细胞密度较高时,需要反复吹打使 MTT 甲臜结 晶物完全溶解。 6、分光光度计测定 OD570 和参考波长 OD690。 7、96 孔板可以在配备合适滤光片的酶标仪上进行检测。 8、其他类型的多孔板则需用合适大小的比色皿或读板器进行分光光度检测。
注意事项
1、由于使用96孔板进行检测,如果细胞培养时间较长,一定要注意蒸发的问题。一方面,由于96孔板周围一圈最容易蒸发,可以采取弃用周围一圈的办法,改加PBS,水或培养液;另一方面,可以把96孔板置于靠近培养箱内水源的地方,以缓解蒸发。 2、若所用受试化合物与MTT能够反应,可先离心后弃去培养液,小心用PBS冲2~3遍后,再加入含MTT的培养液。 3、Formazan的生成不仅与活细胞数成正比,也受作用时间的影响,因此样品较多时测定的结果可能随时间而变。 4、本品含有致癌物质,避免与皮肤和眼睛接触,请小心操作。为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。 5、本产品只用于科研,不可应用于临床或诊断。
基本信息
别名
MTT Cell Proliferation and Cytotoxicity Assay Kit,MTT kit
储存/保存方法
2~8℃,避光保存,有效期12个月。

MTT实验步骤有哪些,有什么注意事项

MTT实验步骤有哪些,有什么注意事项

MTT通常用于药物(也包括其他处理方式如放射线照射)对体外培养的细胞毒性的测定以及.细胞增殖及细胞活性测定。该方法已广泛用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验以及肿瘤放射敏感性测定等。它的特点是灵敏度高、经济。但是由于MTT经还原所产生的甲瓒产物不溶于水,需被溶解后才能检测。这不仅使工作量增加,也会对实验结果的准确性产生影响,而且溶解甲瓒的有机溶剂对实验者也有损害。在MTT实验步骤中要注意的是MTT有致癌性,用的时候小心,有条件最好带那种透明的薄膜手套.配成的MTT需要无菌,MTT对菌很敏感;往96孔板加时不避光也没有关系,毕竟时间较短,或者你不放心的时候可以把操作台上的照明灯关掉。
MTT实验步骤——贴壁细胞
1、收集对数期细胞,调整细胞悬液浓度,每孔加入100ul,铺板使待测细胞调密度至1000-10000孔,(边缘孔用无菌PBS填充)。
2.、5%CO2,37℃孵育,至细胞单层铺满孔底(96孔平底板),加入浓度梯度的药物,原则上,细胞贴壁后即可加药,或两小时,或半天时间,但我们常在前一天下午铺板,次日上午加药.一般5-7个梯度,每孔100ul,设3-5个复孔.建议设5个,否则难以反应真实情况
3.、5%CO2,37℃孵育16-48小时,倒置显微镜下观察。
4、每孔加入20ulMTT溶液(5mg/ml,即0.5%MTT),继续培养4h。若药物与MTT能够反应,可先离心后弃去培养液,小心用PBS冲2-3遍后,再加入含MTT的培养液。
5、终止培养,小心吸去孔内培养液。
6、每孔加入150ul二甲基亚砜,置摇床上低速震荡10min,使结晶物充分溶解。在酶联免疫检测仪OD490nm处测量各孔的吸光值。
7、同时设置调零孔(培养基、MTT、二甲基亚砜),对照孔(细胞、相同浓度的药物溶解介质、培养液、MTT、二甲基亚砜)
MTT实验步骤——悬浮细胞
1、收集对数期细胞,调节细胞悬液浓度1×106/ml,按次序将①补足的1640(无血清)培养基40ul ;②加Actinomycin D(有毒性)10ul用培养液稀释 l?g/ml,需预试寻找最佳稀释度,1:10-1:20);③需检测物10ul;④细胞悬液50ul(即5×104cell/孔),共100ul加入到96孔板(边缘孔用无菌水填充)。每板设对照(加100?(储存液100 1640)。
2、置37℃,5%CO2孵育16-48小时,倒置显微镜下观察。
3、每孔加入10 ul MTT溶液(5 mg/ml,即0.5%MTT),继续培养4 h。(悬浮细胞推荐使用WST-1,培养4 h后可跳过步骤4),直接酶联免疫检测仪OD570nm(630nm校准)测量各孔的吸光值)
4、离心(1000转x10min),小心吸掉上清,每孔加入100 ul二甲基亚砜,置摇床上低速震荡10 min,使结晶物充分溶解。在酶联免疫检测仪OD570nm(630nm校准)测量各孔的吸光值。
5、同时设置调零孔(培养基、MTT、二甲基亚砜),对照孔(细胞、相同浓度的药物溶解介质、培养液、MTT、二甲基亚砜),每组设定3复孔。
MTT实验步骤中需要注意的是MTT法只能用来检测细胞相对数和相对活力,但不能测定细胞绝对数。在用酶标仪检测结果的时候,为了保证实验结果的线性,MTT 吸光度最好在0-0.7 范围内。配制MTT时用PBS溶解,也有人用生理盐水配,60℃水浴助溶。

TT实验步骤有哪些,有什么注意事项

噻唑兰MTT

噻唑兰MTT

货号:BS186-5g

规格:5g

品牌:Biosharp

产品简介:
MTT 又称噻唑蓝。用于细胞增殖及细胞活性测定和对体外细胞的细胞毒性的测定。
检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性 MTT 还原为水不溶性的蓝紫色结
晶甲臢并沉积在细胞中,而死细胞无此功能。二甲基亚砜能溶解细胞中的甲臢,用酶标仪在 490nm 波长处测定其光吸收值,在一定细胞数范围内,MTT 结晶形成的量与细胞数成正比。根据测得的吸光度值,来判断活细胞数量,OD 值越大,细胞活性越强。
别名:噻唑四唑蓝溴化盐;噻唑蓝四唑蓝;溴化噻唑蓝四氮唑
CAS:298-93-1
分子式: C18H16BrN5S
分子量: 414.32
储存条件: 2-8℃,避光保存
外观(性状): 黄色或橙黄色粉末
单位:瓶
有效期:一年
应用: 生化试剂,可用于细胞增殖及细胞活性测定。
使用方法:通常,MTT 浓度为 5mg/ml。称取 MTT 0.5 克,溶于 100 ml 的磷酸缓冲液
(PBS)或无酚红的培养基中,用 0.22μm 滤膜过滤以除去溶液里的细菌,放 4℃ 避光保存即可。在配制和保存的过程中,容器最好用铝箔纸包住。(配置方法仅供参考,请根据具体实验要求结合文献进行使用)
注意:
1. 需使用新鲜的 PBS,已经长菌的 PBS 会导致 MTT 溶解后出现蓝黑色沉淀。
2. 本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗,食品及化妆品等用途。
3. 为了您的安全和健康,请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。
货号 BS186-5g
规格 5g
品牌 Biosharp
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TT实验原理是什么?

MTT实验原理是什么?
MTT是一种检测细胞存活和生长的方法。MTT实验原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒(Formazan)并沉积在细胞中,而死细胞无此功能。二甲基亚砜(DMSO)能溶解细胞中的甲瓒,用酶联免疫检测仪在490nm波长处测定其光吸收值,可间接反映活细胞数量。
在一定细胞数范围内,MTT结晶形成的量与细胞数成正比。根据测得的吸光度值(OD值),来判断活细胞数量,OD值越大,细胞活性越强(如果是测药物毒性,则表示药物毒性越小)。该方法已广泛用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验以及肿瘤放射敏感性测定等。它的特点是灵敏度高、经济。
MTT通常用于.细胞增殖及细胞活性测定以及药物(也包括其他处理方式如放射线照射)对体外培养的细胞毒性的测定。
缺点:由于MTT经还原所产生的甲瓒产物不溶于水,需被溶解后才能检测。这不仅使工作量增加,也会对实验结果的准确性产生影响,而且溶解甲的有机溶剂对实验者也有损害。
注意事项:
1、在配制和保存的过程中,容器最好用铝箔纸包住。
2、配成的MTT需要无菌,MTT对菌很敏感
3、MTT一般最好现用现配,过滤后4度避光保存两周内(个人曾做过4度避光保存4周的MTT溶液,效果仍然不错)有效,或配制成5mg/ml保存在-20度长期保存,避免反复冻融,最好小剂量分装,用避光袋或是黑纸、锡箔纸包住避光以免分解。当MTT变为灰绿色时就绝对不能再用。
4、MTT有致癌性,用的时候小心,有条件最好带那种透明的簿膜手套.
通常,此法中的MTT浓度为5mg/ml。因此,可以称取MTT 0.5克,溶于100 ml的磷酸缓冲液(PBS)或无酚红的培养基中,用0.22μm滤膜过滤以除去溶液里的细菌,放4℃ 避光保存即可。在配制和保存的过程中,容器最好用铝箔纸包住。
TT实验原理是什么?