PeproTech高品质无饲养层人ES/iPS细胞培养基

PeproTech高品质无饲养层人ES/iPS细胞培养基

PeproTech高品质无饲养层人ES/iPS细胞培养基
PeproGrow-hESC
胚胎
干细胞培养基是化学成分明确的完全培养基,不含血清和酚红,专用于人类胚胎干细胞(hESCs)和诱导多能干细胞(hiPSCs)的无饲养层维持培养和扩增(需以BD Matrigel™作为表面包被基质)。该培养基可保持hESCs和hiPSCs的未分化、多能状态(SSEA4+/Oct4+),流式细胞仪分析显示自发分化的细胞比例低于15%。该培养基的独特配方中含有FGF2(碱性成纤维细胞生长因子)等生长因子,但不含市场上大多数其他品牌胚胎干细胞培养基中存在的胰岛素。PeproGrow-hESC胚胎干细胞培养基由美国PeproTech公司和美国Rutgers(罗格斯)大学干细胞培训中心合作设计与研发,含一瓶100mL或500mL基础培养基和一管单独的重组生长因子冻干粉。
PeproTech 胚胎干细胞培养基(PeproGrow-hESC)的竞争性优势
  • ● 无酚红
  • ● 无胰岛素
  • ● 高铺板率
  • ● 极具竞争力的价格
  • ● 高品质的重组细胞因子来自于全球领先的生产商
  • ● 与美国Rutgers(罗格斯)大学干细胞培训中心合作开发,并在该中心的培训教程中使用

PeproTech高品质无饲养层人ES/iPS细胞培养基

H1人类胚胎干细胞的生长
H1人类胚胎干细胞(hESC)在PeproGrow-hESC胚胎干细胞培养基中培养Dispase酶消化传代,并用含2u MY-27632(Rho激酶抑制剂)的PeproGrow-hESC胚胎干细胞培养基铺板于包被有BD Matrigel™的6孔板中。每天换液,并分别在传代后24,48,和72小时拍照。该hESC经慢病毒(Lentivirus)感染改造,使得其含有Oct4启动子驱动表达的turboGFP荧光蛋白基因,因此图中绿色荧光为Oct4启动子发挥活性所致,提示细胞保持着多能性。与竞争公司的胚胎干细胞培养基相似,PeproGrow-hESC胚胎干细胞培养基可很好地维持干细胞的多能状态,但PeproGrow-hESC胚胎干细胞培养基培养的细胞铺板效果更好,可更快地融合。

 PeproTech高品质无饲养层人ES/iPS细胞培养基

人类胚胎干细胞(hESCs)在PeproGrow-hESC胚胎干细胞培养基中培养的细胞形态 
PeproGrow-hESC胚胎干细胞培养基中含有独特细胞因子组合,起初可能会改变细胞或克隆的外观,使它们看起来更为平整和形态多样。但是随着细胞密度的增大和经过数次传代后,这种形态改变越发不明显。干细胞将形成标准的致密圆形克隆(左图),细胞形态正常,并具有较大的细胞核和较少的细胞质(右图)。

 

PeproGrow-hESC胚胎干细胞培养基培养诱导多功能干细胞(hiPSCs)的免疫染色结果 
细胞接种于24孔板,多聚甲醛固定、DAPI和图中标示的抗体荧光染色抗体染色显示出细胞的多能性。

  

 参数
 细菌检测
 阴性
 渗透压
 340-350 mOsm(毫渗)
 pH值
 7.35-7.40

 

 PeproGrow-hESC胚胎干细胞培养液
 PeproGrow-hESC
 产品编号:BM-hESC
 500mL
 2800元
 PeproGrow-hESC
 产品编号:BM-hESC
 100mL
 1120元

 

Y-27632 人ES/iPS细胞培养用生物试剂-Wako富士胶片和光

Y-27632 人ES/iPS细胞培养用生物试剂-Wako富士胶片和光

供货周期 一个月以上 应用领域 生物产业

通过添加Y-27632至培养基中,可抑制人ES细胞或人iPS细胞在细胞分散时的细胞死亡,还可提高冻存后的iPSC存活率。Y-27632是一种选择性强效ROCK(Rho-associated coiled-coil forming kinase/Rho binding kinase)抑制剂,具有通过ROCK信号传递系统收缩血管平滑肌等多种功能。

Y-27632Y-27632 人ES/iPS细胞培养用生物试剂-Wako富士胶片和光

人ES/iPS细胞培养用

通过添加Y-27632至培养基中,可抑制人ES细胞或人iPS细胞在细胞分散时的细胞死亡,还可提高冻存后的iPSC存活率。Y-27632是一种选择性强效ROCK(Rho-associated coiled-coil forming kinase/Rho binding kinase)抑制剂,具有通过ROCK信号传递系统收缩血管平滑肌等多种功能。

Y-27632 人ES/iPS细胞培养用生物试剂-Wako富士胶片和光









Y-27632产品对比表

FUJIFILM Wako可提供多种类型的Y-27632产品。请根据用途进行选择。


ICH-Q7

ISO9001

无菌测试

活菌数

测试

无动物

来源

内毒素

测试

支原体阴性测试

粉末/液体

引用文献

Y-27632
    (符合GMP标准)

粉末

Y-27632,   MF

粉末

CultureSure® Y-27632

粉末

CultureSure® 10mmol/L

Y-27632溶液,无动物来源成分

液体

(已过滤除菌)

https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/term=%22Wako%22+AND+(%22259-00613%22+OR+%22257-00614%22)

② https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/term=%22Wako%22+AND+(%22030-24021%22+OR+%22036-24023%22+OR+%22034-24024%22+OR+%22030-24026%22)

③ https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/term=%22Wako%22+AND+(%22035-24593%22+OR+%22039-24591%22)

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产品概要

Y-27632 (符合GMP标准)

符合ICH-Q7(原料药GMP)标准,可作为再生医疗等产品商业化生产的原材料。

采用GMP设备和管理体系进行生产。

已进行活菌数测试、内毒素测试、支原体阴性测试、残留溶剂测试等。

● 按照GMP管理体系进行文件管理

在相当于ISO 14644-1 6级的洁净室中进行分装

使用专用的培养基添加剂生产设备,控制污染风险

实施工艺验证、分析验证和清洁验证

无动物源性

Y-27632, MF

符合ISO9001管理标准,可用作再生医疗等产品商业化生产的原材料。

使用符合自愿性标准的管理设备进行生产。已进行活菌数测试、内毒素测试、支原体阴性测试。

使用专用的培养基添加剂生产设备,控制污染风险

实施工艺验证、分析验证和清洁验证

无动物源性

CultureSure® Y-27632

为药物发现、再生医疗的基础研究而开发的无动物源性、符合ISO9001管理标准的产品。

已进行内毒素测试、支原体阴性测试。

CultureSure® 10 mmol/L Y-27632溶液,无动物来源成分

为药物发现、再生医疗的基础研究而开发的无动物源性、符合ISO9001管理标准的产品。

已进行无菌检测、内毒素检测、支原体阴性检测。

由于已经过0.1μm过滤器除菌,可直接加入培养基等产品中使用。

相关名词

GMP

GMP是Good Manufacturing Practice的简称,是药物等相关产品的生产管理和质量控制的标准,医药相关的生产商应遵守GMP。

GMP包括以下3点要求。

1)尽可能降低人为误差

2)防止药物的污染以及质量不佳

3)设计可保证高质量的系统

ICH-Q7(原料药GMP)

ICH是人用药品技术要求国际协调理事会(International Council for Harmonisation of Technical Requirements for Pharmaceuticals for Human Use)的简称,是药物监管机构和制药行业的代表进行合作,从科学和技术的角度出发,共同制定药物监管相关指南的国际会议。

上述指南中的ICH-Q7(原料药GMP)规定了如何进行原料药相关的生产管理和质量控制的标准。

ISO9001

ISO是非政府机构、国际标准化机构(International Organization for Standardization)的简称,ISO制定的规格即为ISO规格。ISO规格是针对产品生产、工序管理、服务提供、材料供给等相关方面制定的标准,经由专家取得了国际上的认可。

ISO9001是以质量管理系统为对象的ISO规格。许多企业和组织都取得了ISO9001认证,以确保客户能一如既往地获得高质量的产品和服务。

溶液制备的参考数据

粉末状的Y-27632产品已确认可溶于水。制备至所需浓度后,请在过滤灭菌后使用。

关于ES/iPS细胞培养的常规使用方法请参考protocol
http://labchem.fujifilm-wako.com.cn/upfiles/files/202311/1617001251119905.pdf

制备各浓度溶液时所需的溶剂量

Y-27632产品(粉末)

1 mg

5 mg

10 mg

制备后的浓度

1   mmol/L

2.956 mL

14.781 mL

29.562 mL

5 mmol/L

0.591 mL

2.956 mL

5.912 mL

10 mmol/L

0.296 mL

1.478 mL

2.956 mL

50 mmol/L

0.059 mL

0.296 mL

0.591 mL

相关页面

CultureSure™ CEPT Cocktail(1,000×)

StemSure® hPSC培养基△

复制下方链接下载产品宣传页:

http://labchem.fujifilm-wako.com.cn/pdf/show/246.html

◆产品列表

产品编号 产品名称 产品规格 产品等级
252-00701 Y-27632 ( GMP-compliant )
Y-27632(GMP标准)
5 mg 细胞培养用
258-00703 Y-27632 ( GMP-compliant )
Y-27632(GMP标准)
25 mg 细胞培养用
259-00613 Y-27632, MF
选择性强效ROCK抑制剂
5 mg 细胞培养用
257-00614 Y-27632, MF
选择性强效ROCK抑制剂
25 mg 细胞培养用
030-24021 CultureSure® Y-27632
CultureSure® Y-27632(选择性ROCK抑制剂)
1 mg 细胞培养用
036-24023 CultureSure® Y-27632
CultureSure® Y-27632(选择性ROCK抑制剂)
5 mg 细胞培养用
035-24593 CultureSure® 10mmol/L Y-27632 Solution, Animal-derived-free
CultureSure® 10mmol/l Y-27632溶液,无动物源
1 mL 细胞培养用
039-24591 CultureSure® 10mmol/L Y-27632 Solution, Animal-derived-free
CultureSure® 10mmol/l Y-27632溶液,无动物源
300 μL 细胞培养用


相关产品


产品编号 产品名称 产品规格 产品等级
033-26071 CultureSure™ CEPT Cocktail(1,000×) 300 μL 细胞培养用

Protocol刊登产品


产品编号 产品名称 产品规格 产品等级
197-17571 StemSure® hPSC Medium Δ  
StemSure® 人多能干细胞培养基
100 mL 细胞培养用
193-17573 StemSure® hPSC Medium Δ  
StemSure® 人多能干细胞培养基
100 mL×4 细胞培养用

产品编号 产品名称 产品规格 产品等级
060-05383 Fibroblast Growth Factor (basic)(FGF-basic / bFGF / FGF2), Human, recombinant, Animal-derived-free(154aa)
 重组人成纤维细胞生长因子(碱性)(FGF-basic / bFGF / FGF2),无动物源
1 mg 细胞生物学用
064-05381 Fibroblast Growth Factor (basic)(FGF-basic / bFGF / FGF2), Human, recombinant, Animal-derived-free(154aa)
 重组人成纤维细胞生长因子(碱性)(FGF-basic / bFGF / FGF2),无动物源
50 μg 细胞生物学用
068-05384 Fibroblast Growth Factor (basic)(FGF-basic / bFGF / FGF2), Human, recombinant, Animal-derived-free(154aa)
 重组人成纤维细胞生长因子(碱性)(FGF-basic / bFGF / FGF2),无动物源
100 μg 细胞生物学用
062-06661 bFGF Solution, MF
bFGF 溶液, MF
50 μL 细胞培养用
068-06663 bFGF Solution, MF
bFGF 溶液, MF
50 μL×4 细胞培养用
039-24155 CultureSure® Sterile Water(Endotoxin and Mycoplasma Free)
CultureSure® 无菌水(无内毒素和支原体)
500 mL 细胞培养用
043-29791 D-PBS(-)
杜氏磷酸盐缓冲液
1 L 细胞培养用
045-29795 D-PBS(-)
杜氏磷酸盐缓冲液
500 mL 细胞培养用
049-29793 D-PBS(-)
杜氏磷酸盐缓冲液
500 mL×10 细胞培养用
203-20251 Trypsin-EDTA Solution without Phenol Red, AF
胰-蛋白酶EDTA溶液(无酚红), AF
100 mL 细胞培养用
205-20255 Trypsin-EDTA Solution without Phenol Red, AF  
胰-蛋白酶EDTA溶液(无酚红), AF
500 mL 细胞培养用

产品编号 产品名称 产品规格 产品等级
220-02041 Vitronectin(20-398 aa), Human, recombinant, Solution
重组人玻璃粘连蛋白(20-398aa)溶液
500 μg 生物化学用

根据需求,可作为培养皿的涂层剂使用。

产品编号 产品名称 产品规格 产品等级
195-16031 StemSure® Freezing Medium
StemSure® 细胞冻存液
100 mL 细胞培养用

产品编号 产品名称 产品规格 备注
630-27581 1.2mL Cryogenic Vial(Self-standing)(Cap: Mix)
1.2 mL血清管(独立型)(管帽:5色入)
500 个 生产商:住友电木

内盖式冷冻管。

产品编号 产品名称 产品规格 备注
638-27881 1 mL Cryogenic Vial(Self-standing)(Cap: Mix)
1 mL血清管(独立型)(管帽:5色入)
500 个 生产商:住友电木


细胞因子溶液产品


产品编号 产品名称 产品规格 产品等级
014-27621 Activin A Solution, Human, recombinant
重组人Activin A溶液
10 μg 细胞培养用
010-27623 Activin A Solution, Human, recombinant
重组人Activin A溶液
50 μg 细胞培养用
195-19071 SCF Solution, Human, recombinant
SCF溶液, 人, 重组
10 μg 细胞培养用
191-19073 SCF Solution, Human, recombinant
SCF溶液, 人, 重组
50 μg 细胞培养用
062-06661 bFGF Solution, MF
成纤维细胞生长因子溶液(碱性)
50 μL 细胞培养用
068-06663 bFGF Solution, MF
成纤维细胞生长因子溶液(碱性)
50 μL×4 细胞培养用

人ES/iPS细胞染色试剂盒-BF干细胞-Wako富士胶片和光

人ES/iPS细胞染色试剂盒-BF干细胞-Wako富士胶片和光

供货周期 两周 应用领域 医疗卫生,化工,生物产业,农业,制药

利用对未分化人ES/iPS细胞具有高亲和力的凝集素和rBC2LCN(AiLecS1),对人ES/iPS细胞进行染色的试剂盒

用于未分化细胞的高灵敏度染色,无需荧光显微镜人ES/iPS细胞染色试剂盒-BF干细胞-Wako富士胶片和光

人ES/iPS细胞染色试剂盒-BF

 

 

本品是利用对未分化人ES/iPS细胞具有高亲和力的凝集素和rBC2LCN(AiLecS1),对人ES/iPS细胞进行染色的试剂盒。

在结合过氧化物酶的rBC2LCN(rBC2LCN-POD)和高灵敏度DAB显色底物的共同作用下,无需荧光显微镜即可识别可见光下未分化的人ES/iPS细胞。

碱性磷酸酶(ALP)染色多数情况下可以用于可见光下未分化细胞的检测,但在骨、软骨、肝脏等具有ALP活性细胞的分化诱导实验中,ALP染色不能用来检测未分化的细胞。由于本试剂盒中使用的rBC2LCN对人ES/iPS细胞具有高亲和力,不会对具有ALP活性的细胞进行染色,可在多种细胞的分化诱导实验中检测未分化细胞。

 

 

人ES/iPS细胞染色试剂盒-BF干细胞-Wako富士胶片和光

 

 

◆检测原理

 

人ES/iPS细胞染色试剂盒-BF干细胞-Wako富士胶片和光

 

将结合过氧化物酶的rBC2LCN(rBC2LCN-POD)与存在于人ES/iPS细胞膜的足糖萼蛋白上的O型糖链进行结合,通过DAB底物与过氧化物酶的反应,能在可见光下观察到未分化细胞。

 

 

◆染色案例①

 

人ES/iPS细胞染色试剂盒-BF是将饲养层条件下培养的人iPS细胞(201B7株)固定之后,先对ALP(NBT/BCIP)(蓝紫色)进行染色,再使用本试剂盒(棕色)共染色。由于进入分化状态的细胞(红色框内的细胞)不与rBC2LCN结合,所以不会被本试剂盒染色。

 

人ES/iPS细胞染色试剂盒-BF干细胞-Wako富士胶片和光

 

 

 

◆染色案例②

 

人ES/iPS细胞染色试剂盒-BF干细胞-Wako富士胶片和光

 

共培养具有ALP活性的间充质干细胞(MSC)与人iPS细胞,再分别使用ALP、本试剂盒进行染色。

在ALP染色中,人iPS细胞(中央部分)与MSC(周围部分)均被染色;而在使用本试剂盒的染色中,只有人iPS细胞被染色。

 

 

◆产品列表

 

产品编号

产品名称

等级

包装

294-83501

Human ES/iPS Cell Staining Kit-BF
人ES/iPS细胞染色试剂盒-BF

细胞染色用

10 次

 

 

相关产品

 

荧光标记rBC2LCN

 

产品编号

产品名称

等级

包装

180-02991

rBC2LCN-FITC (AiLecS1-FITC)
人iPS未分化标记染料rBC2LCN-FITC (AiLecS1-FITC)

细胞染色用

100 μL

186-02993

100 μL×5

185-03161

rBC2LCN-635 (AiLecS1-635)
人iPS未分化标记染料rBC2LCN-635 (AiLecS1-635)

细胞染色用

100 μL

 

经过滤器过滤、灭菌,直接添加至人ES/iPS细胞的培养基中,可观察到荧光标记的人ES/iPS细胞。

也可用于流式细胞仪。

 

 

未标记rBC2LCN

 

产品编号

产品名称

等级

包装

029-18061

BC2LCN(AiLecS2) Lectin, recombinant, Solution
BC2LCN (AiLecS1)凝集素,重组体,溶液

糖链研究用

1 mg

025-18063

1 mg×5

 

 

※ 上述试剂仅供实验研究用,不可用作医药品、食品、临床诊断等。

 

 

iPS向肝脏细胞定向分化操作系统iPS Cell to Hepatocyte Differentiation System酶试剂盒Takara Clontech

上海金畔生物科技有限公司代理Takara酶试剂盒全线产品,欢迎访问官网了解更多产品信息和订购。

iPS向肝脏细胞定向分化操作系统iPS Cell to Hepatocyte Differentiation System
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格(元) 说明书 数量
Cellartis Y30055 Cellartis® iPS Cell to Hepatocyte Differentiation System 1 Kit ¥15,704 iPS向肝脏细胞定向分化操作系统iPS Cell to Hepatocyte Differentiation System iPS向肝脏细胞定向分化操作系统iPS Cell to Hepatocyte Differentiation System iPS向肝脏细胞定向分化操作系统iPS Cell to Hepatocyte Differentiation System
Cellartis Y30051 Cellartis® Hepatocyte Maintenance Medium 100 ml ¥2,521 iPS向肝脏细胞定向分化操作系统iPS Cell to Hepatocyte Differentiation System iPS向肝脏细胞定向分化操作系统iPS Cell to Hepatocyte Differentiation System iPS向肝脏细胞定向分化操作系统iPS Cell to Hepatocyte Differentiation System
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iPS向肝脏细胞定向分化操作系统
(Cellartis iPS Cell to Hepatocyte Differentiation System)
以肝脏细胞为模型的实验越来越受到重视,在肝脏病变机理研究、药物代谢研究、药物毒理评估等方面有广阔的应用前景。然而,以个体原代肝细胞为材料来源会产生如取材困难、材料批间差大、无法长期稳定供应等一系列难以克服的问题。因此,通过iPS批量转化生产肝细胞的方法就显示出特别的优势。Cellartis iPS Cell to Hepatocyte Differentiation System可以稳定地、规模化地实现iPS向hepatocyte的诱导转化生产,而且诱导转化出的肝细胞能够稳定表达药物代谢相关酶系统和药物转运系统。
Cellartis iPS Cell to Hepatocyte Differentiation System是一套Do-It-Yourself系统,客户既可以对某个特殊病人来源的iPS实现转化,也可以利用cellartis供应的iPS进行标准化操作。使用本产品的过程起始于诱导人iPS转化成为确定性内胚层(Definitive Endoderm (DE))细胞,然后诱导转化DE至肝细胞。本产品是All-In-One型产品,实验所需的培养基、基质(coating)等包括在内。应用本产品转化约3 × 106 hiPS cells,可以获得约5 × 106 肝细胞(大约50 cm2面积的单层贴壁细胞)。
利用Cellartis iPS Cell to Hepatocyte Differentiation System转化得到的肝细胞除了清晰表现出肝细胞的必备特征外(如肝细胞特异性标志物、CYP系列酶等),还保留了原始细胞供体者的遗传基因背景。另外,相比较从组织切除获得的原代肝脏细胞(通常需要低温保存),通过本产品系统转化获得的肝细胞在更长的时间跨度上保持着生理功能的稳定性。这一点对于毒理学评估和病毒感染评估具有显著的意义。为长时间维持培养hiPS转化而来的肝细胞,我们推荐Cellartis Hepatocyte Maintenance Medium (Cat. No. Y30051)。
 
关于Cellartis 卓越的iPS Cell to Hepatocyte Differentiation技术的专项说明,请点击:
详情
 
■ 产品特点
· Highly reproducible, robust system—the exact same protocol has been shown to work across 25 different iPS cell lines, so no need to optimize for your lines.
· Ideal for drug metabolism and safety studies—consistently generate panels of >90% pure, functional, hiPS cell-derived hepatocytes with diverse genetic backgrounds.
· Customized starting materials—start with any disease-relevant iPS cell lines and create accurate liver disease models.
· Ready for personalized medicine—make patient-specific, disease-specific cells for therapeutic applications.
· Extended experimental window—hepatocytes can be used for a minimum of 11 days for functional tests.
 
■ 产品成分
· Cellartis DEF-CS 100 Culture System (Y30020, not sold separately)
· Cellartis Definitive Endoderm Differentiation Kit (Y30030, not sold separately)
· Cellartis Hepatocyte Differentiation Kit (Y30050)
 
■ 产品详情请点击:iPS向肝脏细胞定向分化操作系统iPS Cell to Hepatocyte Differentiation System
 
iPS向肝脏细胞定向分化操作系统iPS Cell to Hepatocyte Differentiation System
Immunocytochemistry analysis of hepatocyte differentiation. hiPS cells were differentiated into functional hepatocytes using the Cellartis iPS Cell to Hepatocyte Differentiation System. Hepatocytes were immunostained to detect early hepatic markers HNF4α (red, nuclear) and CK18 (green) on days 14 and 21. As the hepatocytes matured, expression of liver-specific markers CYP3A (red, cytoplasmic) and Albumin (green) increased as seen on day 28, as expected. Cell nuclei were stained with DAPI (blue).
 
参考文献:
Asplund, Annika, et al.One Standardized Differentiation Procedure Robustly Generates Homogenous Hepatocyte Cultures Displaying? Metabolic Diversity from a Large Panel of Human Pluripotent Stem Cells. Stem Cell Rev and Rep (2015).
 
用户分享:
◆ 东海大学医学部-纸谷聪英教授
   利用人iPS细胞体外构建多囊性肝病(Polycystic liver disease)模型
 
iPS向肝脏细胞定向分化操作系统iPS Cell to Hepatocyte Differentiation System
纸谷聪英教授使用Cellartis iPS Cell to Hepatocyte Differentiation System(Y30055)构建肝脏疾病模型的研究成果已刊登在Stem Cell Research。
【论文】
Akihide, K., Hiromi, C., Kinuyo, I., Emi, A., Kota, T., & Tatehiro, K., et al. (2018). An in vitro model of polycystic liver disease using genome-edited human inducible pluripotent stem cells. Stem Cell Research, 32, 17-24.
 
实验数据
 
iPS向肝脏细胞定向分化操作系统iPS Cell to Hepatocyte Differentiation System
 
图:使用 Cellartis iPS Cell to Hepatocyte Differentiation System(Y30055)获得的人iPSC来源肝前体细胞(iPS-HPCs)诱导分化为胆管状Cyst结构。
(引用自文献Akihide Kamiya et al., Stem Cell Research, 2018)
 
访谈时间:
1. 开始使用Cellartis iPS Cell to Hepatocyte Differentiation System(Y30055)的契机是什么?
很多研究组已经报道了多种从人iPS细胞诱导分化形成肝脏细胞的方法,我们研究组也在做相关工作。由于细胞分化不稳定,我担心使用饲养层细胞培养人iPS细胞会对肝脏分化产生影响,因此决定尝试使用Cellartis iPS细胞无饲养层培养系统Cellartis DEF-CS™ 500 Culture System(Y30010)和肝脏分化系统Cellartis iPS Cell to Hepatocyte Differentiation System(Y30055)。
 
2.实际使用后感觉如何?
与之前使用的饲养层培养方法相比,Y30010能更简便高效的进行培养;使用Y30055进行的肝脏分化非常稳定,进一步提升了实验效率。
 
3. 对暂未使用该制品的用户有什么寄语?
人iPS细胞向肝脏细胞分化过程中,细胞密度对分化效率有很大影响,进而影响实验结果。我认为Cellartis系统的优点主要在于各个实验阶段偏差小,结果稳定,适合追求实验效率的人。
 
 
◆ 东京医科齿科大学-柿沼晴教授
   先天性肝纤维化模型的开发和病理阐明的研究
 
iPS向肝脏细胞定向分化操作系统iPS Cell to Hepatocyte Differentiation System
柿沼晴教授使用Cellartis iPS Cell to Hepatocyte Differentiation System(Y30055)构建肝脏疾病模型的研究成果已刊登在Journal of Hepatology。
 
【论文】
Tsunoda, T., Kakinuma, S., Miyoshi, M., Kamiya, A., Kaneko, S., & Sato, A., et al. (2019). Loss of fibrocystin promotes interleukin-8-dependent proliferation and ctgf production of biliary epithelium. Journal of Hepatology.
 
访谈时间:
1.开始使用Cellartis iPS Cell to Hepatocyte Differentiation System(Y30055)的契机是什么?
一起进行研究的老师使用后能够进行稳定的培养,我们研究室也正好想利用无饲养层培养系统,所以开始使用了Cellartis DEF-CS™ 500 Culture System(Y30010)和肝脏分化系统Cellartis iPS Cell to Hepatocyte Differentiation System(Y30055)。
 
2.实际使用后感觉如何?
Y30010无饲养层培养系统使用比较简便,同时能够稳定的培养人iPS细胞。这次实验中,利用Y30055分化至肝前体细胞(iPS-HPCs),进一步诱导分化成了胆管细胞,我认为诱导分化的再现性好。不仅分化至成熟肝细胞谱系,同时相比于以往报道的方法,再现性更稳定。
 
3. 对暂未使用该制品的用户有什么寄语?
在人iPS细胞的培养和分化至肝细胞谱系的诱导中,即使是对人iPS细胞使用经验尚浅的实验者,也能够进行培养并得到稳定的再现。
 
 

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人iPS细胞Human Pluripotent Stem Cells酶试剂盒Takara Clontech

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人iPS细胞Human Pluripotent Stem Cells
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格(元) 说明书 数量
Cellartis Y00275 Cellartis® human iPS cell line 7 (ChiPSC7) Kit 1 Kit ¥26,001 人iPS细胞Human Pluripotent Stem Cells 人iPS细胞Human Pluripotent Stem Cells 人iPS细胞Human Pluripotent Stem Cells
Cellartis Y00285 Cellartis® human iPS cell line 12 (ChiPSC12) Kit 1 kit ¥26,001 人iPS细胞Human Pluripotent Stem Cells 人iPS细胞Human Pluripotent Stem Cells 人iPS细胞Human Pluripotent Stem Cells
Cellartis Y00325 Cellartis® human iPS cell line 22 (ChiPSC22) Kit 1 kit ¥26,001 人iPS细胞Human Pluripotent Stem Cells 人iPS细胞Human Pluripotent Stem Cells 人iPS细胞Human Pluripotent Stem Cells
Cellartis Y00305 Cellartis® human iPS cell line 18 (ChiPSC18) Kit 1 Kit ¥25,341 人iPS细胞Human Pluripotent Stem Cells 人iPS细胞Human Pluripotent Stem Cells 人iPS细胞Human Pluripotent Stem Cells
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人iPS细胞
(Human Induced Pluripotent Stem Cells)
Cellartis人iPS细胞(Human iPS Cell Line)产品是达到了工业客户使用标准生产的干细胞产品。该产品包括细胞和用于增殖培养的Cellartis DEF-CS Culture System培养体系。iPS细胞已经在制品化时完成了对DEF-CS培养体系的适应。Cellartis DEF-CS Culture System培养体系是组分明确而且不依赖饲养层的便捷的干细胞培养体系。Cellartis DEF-CS Culture System适合高效率地增殖培养干细胞,并且保持干细胞在增殖过程中几乎无分化地生长,这使得不需要在大规模增殖培养过程中进行细胞筛选。因此,Cellartis人iPS细胞(Human iPS Cell Line)产品是一套完整的产品体系,对于科研级别和工业规模的需求都适合。
 
■ 产品特点
· Cell lines were created by reprogramming human skin fibroblasts using defective polycistronic retrovirus technology to deliver Oct-4, SOX2, KLF4, and c-Myc
· Cell lines are extensively analyzed for purity and stem-cell characteristics, including recovery after thawing, absence of mycoplasma and bacteria, expression of stem cell-specific markers (Oct-4, NANOG, SSEA-3, SSEA-4, TRA-1-60, TRA-1-81), absence of differentiation markers (Beta-3 tubulin, FOXA2, ASMA), and expected karyotype
· Optimized for culture with the Cellartis DEF-CS Culture System
· Suitable for all major applications; cells can form derivatives of all three germ layers when differentiated
· Kits include the Cellartis DEF-CS 100 Culture System
 
■ 关联产品
Code No. Product Size
Y30010 Cellartis® DEF-CS 500 Culture System 1 Kit
 
■ 产品详情请点击:人iPS细胞Human Pluripotent Stem Cells
 
人iPS细胞Human Pluripotent Stem Cells
Characteristics of Cellartis human iPS cells. The cell lines were generated from fibroblasts using defective polycistronic retrovirus technology to deliver Oct-4, Sox-2, KLF-4, and c-Myc. The skin fibroblasts were obtained from donors of varying age and gender, have a normal karyotype, and have been confirmed to differentiate into specific cell lineages. Consent was obtained from all donors for commercial use.
 
参考文献:
1. de Peppo GM, et al. Osteogenic potential of human mesenchymal stem cells and human embryonic stem cell-derived mesodermal progenitors: a tissue engineering perspective. Tissue Eng Part A.2010 Nov;16(11):3413-3426.
2. Both SK, et al. Differential bone-forming capacity of osteogenic cells from either embryonic stem cells or bone marrow-derived mesenchymal stem cells. J Tissue Eng Regen Med.2011 Mar;5(3):180-190.
3. de Peppo GM, et al. Free-form-fabricated commercially pure Ti and Ti6A14V Porous Scaffolds support the growth of human embryonic stem cell-derived mesodermal progenitors. ScientificWorldJournal. 2012;2012:646417.Epub 2012 Jan 4.
4. Ou Li, et al. Human embryonic stem cell-derived mesenchymal stroma cells(hES-MSCs) engraft in vivo and support hematopoiesis without suppression immune function: implications for off –the shelf ES-MSC therapies. PLOS ONE.2013; 8(1):e55319.
 

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小鼠ES/iPS细胞培养基Mouse ES and iPS cell culture medium (2i)酶试剂盒Takara Clontech

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小鼠ES/iPS细胞培养基Mouse ES and iPS cell culture medium (2i)
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格(元) 说明书 数量
Cellartis Y40031 Cellartis® 2i mES/iPSC Culture Medium 200 ml ¥3,613 小鼠ES/iPS细胞培养基Mouse ES and iPS cell culture medium (2i) 小鼠ES/iPS细胞培养基Mouse ES and iPS cell culture medium (2i) 小鼠ES/iPS细胞培养基Mouse ES and iPS cell culture medium (2i)
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小鼠ES/iPS细胞培养基(2i Medium)
Cellartis 2i mES/iPSC Culture Medium是一款无血清的、成分确定的细胞培养基,可用于小鼠ES和iPS细胞建系。该培养基含有两种小分子抑制剂(基于2i技术:CHIR99021、PD0325901),分别是用于抑制GSK3β和ERK/MEK介导的分化诱导信号通路,以及促进细胞增殖。
单独使用Cellartis 2i mES/iPSC Culture Medium,可以长期维持小鼠ES细胞处于原始状态和基态(Naive, ground state)或者小鼠iPS细胞处于完全多能性(Fully pluripotent)的状态。添加LIF(Leukemia Inhibitory Factor),可以通过调节Nanog信号通路使得Partial-iPS细胞或Pre-iPS细胞有效转化为具有完全多能性的iPS细胞(Silva et al. 2008; Silva et al. 2009).
2i技术也应用于从难获得具有生殖系能力(germline-competent)ES细胞的小鼠品系中建立ES细胞系(Nichols et al. 2009),以及用于从人类和家畜物种中诱导iPS细胞(Wang et al. 2011; Malaver-Ortega et al. 2012)。
 
■ 产品特点
· 成分确定、无血清,促进细胞增殖并维持多能性状态
· 通过添加小分子抑制剂来阻断GSK3β和 ERK/MEK介导的分化诱导通路,并维持小鼠ES细胞和iPS细胞长期具备生殖系能力
· 添加 LIF,使Partial-iPS细胞或Pre-iPS细胞有效转化为具有完全多能性的iPS细胞
 
■ 产品应用
· 建立小鼠ES细胞系和iPS细胞系
· 长期维持纯的ES细胞或iPS细胞
· 使Partial-iPS细胞或Pre-iPS细胞转化为具有完全多能性的iPS细胞(需添加 LIF)
 
■ 产品组成
· 1 bottle (200 ml) of Cellartis mES/iPSC Culture Basal Medium
· 1 tube (200 μl) Cellartis 2i mES/iPSC Supplement
 
 
■ 产品详情请点击:小鼠ES/iPS细胞培养基Mouse ES and iPS cell culture medium (2i)
 
■ 参考文献
1. Malaver-Ortega, L. F. et al. The state of the art for pluripotent stem cells derivation in domestic ungulates. Theriogenology 78, 1749–1762 (2012).
2. Nichols, J. et al. Validated germline-competent embryonic stem cell lines from non-obese diabetic mice. Nat. Med15, 814–818 (2009).
3. Silva, J. et al. Promotion of reprogramming to ground state pluripotency by signal inhibition. PLoS Biol. 6, e253 (2008).
4. Silva, J. et al. Nanog is the gateway to the pluripotent ground state. Cell 138, 722–37 (2009).
5. Wang, W. et al. Rapid and efficient reprogramming of somatic cells to induced pluripotent stem cells by retinoic acid receptor gamma and liver receptor homolog. PNAS 108, 18283–18288 (2011).
 

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小鼠ES/iPS细胞培养基Mouse ES and iPS cell culture medium (3i)酶试剂盒Takara Clontech

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小鼠ES/iPS细胞培养基Mouse ES and iPS cell culture medium (3i)
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格(元) 说明书 数量
Cellartis Y40011 Cellartis® 3i mES/iPSC Culture Medium 200 ml ¥4,759 小鼠ES/iPS细胞培养基Mouse ES and iPS cell culture medium (3i) 小鼠ES/iPS细胞培养基Mouse ES and iPS cell culture medium (3i) 小鼠ES/iPS细胞培养基Mouse ES and iPS cell culture medium (3i)
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小鼠ES/iPS细胞培养基(3i Medium)
Cellartis 3i mES/iPSC Culture Medium是一款无血清的、成分确定的细胞培养基,可用于小鼠ES细胞的建系、多能性维持和增殖培养。该培养基含有三种小分子抑制剂(基于3i技术:ERK/MEK inhibitor、GSK3β inhibitor、FGFR-TK inhibitor),用于抑制分化诱导信号通路和促进细胞增殖,以及可以在无需额外添加细胞因子刺激的情况下维持多能性基态(Pluripotent ground state)。因此,Cellartis 3i mES/iPSC Culture Medium可以应用于多能性分子机制研究和分析。
Cellartis 3i mES/iPSC Culture Medium也应用于从标准条件下难建立ES细胞的小鼠品系中建立ES细胞系(Ying et al. 2008)。相较于LIF(Leukemia Inhibitory Factor)+血清或BMP(Bone Morphogenetic Protein)条件下培养的小鼠ES细胞,使用Cellartis 3i mES/iPSC Culture Medium培养的小鼠ES细胞可以持续地以双倍速度扩增 (Ying et al. 2008; Kiyonari et al. 2010; Iijima et al. 2010)。此外,同样与LIF+血清或BMP条件下培养的小鼠ES细胞相比,使用Cellartis 3i mES/iPSC Culture Medium培养的小鼠ES细胞表现出更高的多能性克隆形成效率(Clonogenicity)。
 
■ 产品特点
· 成分确定、无血清、无饲养层、无细胞因子
· 通过添加小分子抑制剂来抑制分化诱导通路并维持小鼠ES细胞处于多能性状态
· 支持小鼠ES细胞增殖并维持≥99%纯度
 
■ 产品应用
· 维持小鼠ES细胞处于多能性状态
· 从难建系的小鼠品系中制备小鼠ES细胞
· 高效制备具有完全多能性的小鼠ES细胞
 
■ 产品组成
· 1 bottle (200 ml) of Cellartis mES/iPSC Culture Basal Medium
· 1 tube (200 μl) of Cellartis 3i mES/iPSC Supplement
 
 
■ 产品详情请点击:小鼠ES/iPS细胞培养基Mouse ES and iPS cell culture medium (3i)
 
Cellartis 3i mES/iPSC Culture Medium维持小鼠ES细胞处于同质化、未分化状态。
小鼠ES/iPS细胞培养基Mouse ES and iPS cell culture medium (3i)
小鼠ES细胞系ES-E14TG2a分别使用Cellartis 3i mES/iPSC Culture Medium(A)和 GMEM-based medium(B)培养,通过碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase, AKP)染色检测ES细胞多能性,左边为染色前,右边为AKP染色后结果,可以看出Cellartis 3i Medium培养的小鼠ES细胞为均一的、未分化细胞。
 
Cellartis 3i mES/iPSC Culture Medium培养建立的小鼠ES细胞系具备高嵌合率。
小鼠ES/iPS细胞培养基Mouse ES and iPS cell culture medium (3i)
将ES细胞注射并植入胚胎后,通过出生小鼠个体的毛色来判断ES细胞的嵌合率。从Cellartis 3i medium培养建立的ES细胞所获得的小鼠均为黑色毛,即在单代内就获得了完全是ES细胞来源的嵌合体小鼠(A),具备高嵌合率。而从常规培养基培养建立的ES细胞所获得的嵌合体小鼠毛色混杂,未完全嵌合(B)。
 
■ 参考文献
1. Ying, Q. L. et al. The ground state of embryonic stem cell self-renewal. Nature 453, 519–23 (2008).
2. Kiyonari, H. et al. Three inhibitors of FGF receptor, ERK, and GSK3 establishes germline-competent embryonic stem cells of C57BL/6N mouse strain with high efficiency and stability. Genesis 48, 317–327 (2010).
3. Iijima, S. et al. Effect of different culture conditions on establishment of embryonic stem cells from BALB/cAJ and NZB/BINJ mice. Cell Reprogram. 12, 679–688 (2010).
 
 

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iPS向血管内皮细胞定向分化系统iPS Cell to Endothelial Cell Differentiation System酶试剂盒Takara Clontech

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iPS向血管内皮细胞定向分化系统iPS Cell to Endothelial Cell Differentiation System
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格(元) 说明书 数量
Cellartis Y50300 MiraCell® iPS Cell to Endothelial Cell Differentiation Kit 1 Kit ¥16,398 iPS向血管内皮细胞定向分化系统iPS Cell to Endothelial Cell Differentiation System iPS向血管内皮细胞定向分化系统iPS Cell to Endothelial Cell Differentiation System iPS向血管内皮细胞定向分化系统iPS Cell to Endothelial Cell Differentiation System
Cellartis Y50301 MiraCell® iPS Cell to Endothelial Cell Differentiation Kit with DEF-CS 500 Culture System 1 Kit ¥18,627 iPS向血管内皮细胞定向分化系统iPS Cell to Endothelial Cell Differentiation System iPS向血管内皮细胞定向分化系统iPS Cell to Endothelial Cell Differentiation System iPS向血管内皮细胞定向分化系统iPS Cell to Endothelial Cell Differentiation System
Cellartis Y50053 MiraCell® EC Culture Medium 500 ml ¥5,177 iPS向血管内皮细胞定向分化系统iPS Cell to Endothelial Cell Differentiation System iPS向血管内皮细胞定向分化系统iPS Cell to Endothelial Cell Differentiation System iPS向血管内皮细胞定向分化系统iPS Cell to Endothelial Cell Differentiation System
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iPS向血管内皮细胞定向分化系统
(iPS Cell to Endothelial Cell Differentiation System)
MiraCell iPS Cell to Endothelial Cell Differentiation Kit用于人iPS细胞向血管内皮细胞定向分化诱导,试剂盒中包含2种包被剂、2种分化用基础培养基和6种培养基添加剂,足够支持1个T25培养瓶 (1.5×105 Cells)或3个6孔板单孔(1.8×105 cells)的iPS细胞进行内皮方向分化诱导,分化周期为12天(Day0至Day11)。建议分化起始的iPS细胞先使用Cellartis® DEF-CS 500 Culture System(Y30010)驯化3-5代,以确保iPS细胞处于良好的多能性状态。
诱导分化获得的高纯度(CD31阳性率>80%*)血管内皮细胞,经鉴定表达CD31、CD144、Tie2、VEGFR2等血管内皮标志物和具备小管(Tube)形成能力。分化好的血管内皮细胞(Day12以后)可以使用MiraCell EC Culture Medium(Y50053)长期扩大培养,也可以冷冻保存备用。(*起始的人iPS细胞株不同,得到的血管内皮细胞性能可能不同。)
 
本产品使用京都大学iPS细胞研究所开发的人血管内皮细胞的制备技术,由Takara和iHeart Japan公司共同研发,由Takara制造并销售。
 
■ 产品特点
· 完整的试剂盒,支持人iPS细胞-中胚层细胞-血管内皮细胞定向分化
· 多个iPS细胞株测试验证,支持高效分化诱导(>80%)
· 无需基因修饰和药物筛选过程,操作简便
· 获得的血管内皮细胞,可冷冻保存和扩大培养
 
■ 产品组成
MiraCell® iPS Cell to Endothelial Cell Differentiation Kit,Y50300
· Coating Reagent 1 (Day0 & 2);Coating Reagent 2 (Day11)
· EC Differentiation Basal Medium 1 (Day3~9);EC Differentiation Basal Medium 2 (Day11)
· Supplement 1 (Day3);Supplement 2 (Day4);Supplement 3 (Day7);Supplement 4 (Day8);Supplement 5 (Day9);Supplement 6 (Day11)
 
iPS向血管内皮细胞定向分化系统iPS Cell to Endothelial Cell Differentiation System
 
MiraCell® iPS Cell to Endothelial Cell Differentiation Kit with DEF-CS 500 Culture System,Y50301
· MiraCell® iPS Cell to Endothelial Cell Differentiation Kit,Y50300
· Cellartis® DEF-CS 500 Culture System,Y30010
 
iPS向血管内皮细胞定向分化系统iPS Cell to Endothelial Cell Differentiation System
 
■ 实验例
iPS向血管内皮细胞定向分化系统iPS Cell to Endothelial Cell Differentiation System
图1. 3种人iPS细胞株使用MiraCell iPS Cell to Endothelial Cell Differentiation Kit分化诱导,获得的血管内皮细胞的形态比较(A)和标志蛋白质(B)比较。
 
iPS向血管内皮细胞定向分化系统iPS Cell to Endothelial Cell Differentiation System
图2. 3种人iPS细胞株使用MiraCell iPS Cell to Endothelial Cell Differentiation Kit分化诱导,获得的血管内皮细胞继续使用MiraCell EC Culture Medium维持培养,可长时间维持高纯度。()内的数值表示Day32的细胞扩大倍数,以Day8的细胞数为1。
 
iPS向血管内皮细胞定向分化系统iPS Cell to Endothelial Cell Differentiation System
图3. 冷冻保存的、使用MiraCell iPS Cell to Endothelial Cell Differentiation Kit分化诱导的血管内皮细胞(Day16),在解冻复苏培养Day8后的小管形成实验结果。
 
 
 
产品详情请点击:http://catalog.takara-bio.co.jp/product/basic_info.php?unitid=U100009383
 
 

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人iPS细胞基因编辑和单细胞克隆系统Human iPS Cell Editing Systems酶试剂盒Takara Clontech

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人iPS细胞基因编辑和单细胞克隆系统Human iPS Cell Editing Systems
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格(元) 说明书 数量
Cellartis Y30021 Cellartis iPSC Single-Cell Cloning DEF-CS Culture Media Kit 1 kit ¥8,842 人iPS细胞基因编辑和单细胞克隆系统Human iPS Cell Editing Systems 人iPS细胞基因编辑和单细胞克隆系统Human iPS Cell Editing Systems 人iPS细胞基因编辑和单细胞克隆系统Human iPS Cell Editing Systems
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从开始到结束:人iPS细胞基因编辑和单细胞克隆系统
Start-To-Finish hiPSC Editing and Single-Cell-Cloning Systems
人诱导多能干细胞(Human induced pluripotent stem cells,hiPSCs)是一个功能强大的研究工具和疾病模型,因为其具备增殖、自我更新、分化为多种细胞类型的能力。此外,人iPS细胞还可以再现细胞来源个体的疾病表型和基因型。将人iPS细胞结合基于CRISPR/Cas9的基因编辑技术,可以在同基因的细胞系中研究特定基因改变引起的功能影响,因为基因编辑过的人iPS细胞能提供可再生的、无遗传变异的患病细胞和健康细胞资源。
CRISPR/Cas9系统已经成为一个强大的基因编辑工具,因为其高的靶向特异性,编辑效率和易用性。该技术的强大主要源于它的简单,因为全部只需要一个Cas9核酸酶结合一个单链向导RNA(single guide RNA,sgRNA) 就可以决定靶向特异性(Jinek et al. 2012)。这种RNA编程的(RNA-programmable)方法利用了非同源末端连接(non-homologous end joining,NHEJ) DNA修复途径的易错特性,进而产生基因敲除(通过插入/删除)。这种方法也可以通过同源重组(homology-directed repair,HDR)途径被用于基因敲入。
 
CRISPR/Cas9系统的组件可以通过多种方法成功导入至靶细胞,包括基于载体的表达系统,RNA转染, 导入Cas9/sgRNA核糖核蛋白(ribonucleoprotein,RNP)复合物(Sander and Joung 2014)等。与基于载体的方法相比,直接导入Cas9/sgRNA RNPs提供了一种快速转入基因编辑实验的方法,同时脱靶效应的可能性更小(Kim et al. 2014)。
 
一旦Cas9/sgRNA RNP复合物被导入,为了分离和筛选感兴趣的基因型,单细胞必须被分离并扩增为克隆细胞系。传统上,从基因编辑的hiPS细胞建立一个克隆群是低效的、具有挑战性的和耗时的,因为hiPS 细胞是以集落生长和传代的。通常,这会导致细胞死亡和提前分化。然而,Cellartis单细胞克隆系统包含一个成分确定的培养系统(由基础培养基,包被剂,和添加剂组成),用于有效形成单细胞克隆和扩增基因编辑后的hiPSC克隆。DEF-CS culture system (Asplund et al. 2016)是一个基于单层培养的系统,规避了集落状培养带来的挑战,允许单细胞传代和促进接种的单细胞存活和后续扩增。
 
Cellartis iPSC Single-Cell Cloning DEF-CS Culture Media Kit (Code No. Y30021) 是一个完整的,在无饲养层和成分确定条件下,用于hiPSCs有效扩增和扩大生产的系统。试剂盒包含了从接种单细胞至96孔板到扩增至48孔板过程中所有必要的试剂。单细胞克隆扩增后,hiPSCs可以使用Cellartis DEF-CS 500 Culture System (Code No. Y30010)继续培养。
 
关联基因编辑系统:
一、电穿孔法基因编辑
通过电穿孔的方法对hiPSCs进行有效的基因编辑,Takara提供重组Cas9蛋白质和产生大量sgRNAs所有必要的试剂,用于电穿孔hiPSCs。后续与Cellartis iPSC Single-Cell Cloning DEF-CS Culture Media Kit (Code No. Y30021)一起使用,用于进行基因编辑后的单细胞克隆形成和扩增。单细胞克隆扩增后,hiPSCs可以使用Cellartis DEF-CS 500 Culture System (Code No. Y30010)继续培养。
二、Gesicle法基因编辑
Gesicles法是一种无毒的、高效的、替代电穿孔的方法,不依赖昂贵的设备或耗材。通过Gesicle法导入Cas9/sgRNA复合物进行有效的基因编辑,Takara提供所有的必要试剂用于产生细胞衍生的纳米囊泡(Gesicles),来转导Cas9和sgRNA至hiPSCs。后续可与Cellartis iPSC Single-Cell Cloning DEF-CS Culture Media Kit (Code No. Y30021)一起使用,用于进行基因编辑后的单细胞克隆形成和扩增。单细胞克隆扩增后,hiPSCs可以使用Cellartis DEF-CS 500 Culture System (Code No. Y30010)继续培养。
 
■ 产品特点
· Highly efficient gene editing in hiPSCs—use either electroporation or gesicles to deliver Cas9 protein and sgRNA with no genomic integration and reduced off-target effects
· Superior single-cell survival—edited hiPSCs exhibit high (typically ~50%) survival when seeded as single cells in a 96-well plate
· Maintenance of pluripotency after editing and during single-cell cloning—hiPSCs maintain high levels (>90%) of pluripotency markers Oct-4, TRA-1-60, and SSEA-4
· Stable karyotype from start to finish—maintain a normal and stable karyotype throughout editing, single-cell cloning, and expansion
· Flexibility to perform gene editing experiments your way—choose from complete kits that provide editing and single-cell cloning solutions using either electroporation-based or utilize the culture media kit (Code No. Y30021) to perform efficient single-cell cloning following your own editing experiments
· Continuous use of DEF-CS technology throughout gene editing/single-cell cloning experiments—use the Cellartis DEF-CS 500 Culture System (Code No. Y30010) before and during gene editing experiments, then during scale-up after single-cell cloning experiments
 
■ 产品组成
Cellartis® iPSC Single-Cell Cloning DEF-CS Culture Media Kit
(Code No. Y30021,1 kit)
· Cellartis DEF-CS 500 Basal Medium (Code No. Y30011; 500 ml)
· Cellartis iPSC Single-Cell Cloning DEF-CS COAT-1 (Code No. Y30018; 2 × 800 μl)
· Cellartis iPSC Single-Cell Cloning DEF-CS Additives
   (Code No. Y30019; 2 × 750 μl, 1 × 500 μl, 1 × 500 μl)
 
关联基因编辑产品
电穿孔法基因编辑
Guide-it™ sgRNA In Vitro Transcription Kit (632635; 1 kit)
Guide-it™ Recombinant Cas9 (Electroporation-Ready) (632641; 100 μg)
Gesicle法基因编辑
Guide-it™ CRISPR/Cas9 Gesicle Production System (632613;1 kit)
 
■ 产品应用
· CRISPR/Cas9-mediated gene editing of hiPSCs
· Single-cell cloning of hiPSCs
· Disease modeling
 
■ 参考文献
Asplund, A. et al. One Standardized Differentiation Procedure Robustly Generates Homogenous Hepatocyte Cultures Displaying Metabolic Diversity from a Large Panel of Human Pluripotent Stem Cells. Stem Cell Rev. Reports 12, 90-104 (2016).
Jinek, M. et al. A Programmable Dual-RNA-Guided DNA Endonuclease in Adaptive Bacterial Immunity. Science 337, (2012).
Kim, S., Kim, D., Cho, S. W., Kim, J. & Kim, J.-S. Highly efficient RNA-guided genome editing in human cells via delivery of purified Cas9 ribonucleoproteins. Genome Res. 24, 1012-9 (2014).
Sander, J.-D. & Joung, J.-K. CRISPR-Cas9 systems for genomic editing, regulation and targeting. Nat. Biotechnol. 32, 347-55 (2014).
 
■ 产品详情请点击:人iPS细胞基因编辑和单细胞克隆系统Human iPS Cell Editing Systems
 
 
 
人iPS细胞基因编辑和单细胞克隆系统Human iPS Cell Editing Systems
Human induced pluripotent stem cells (hiPSCs) growing in DEF-CS medium were edited with Cas9 and sgRNA specific to CD81. Pluripotency is maintained in edited human induced pluripotent stem cells (hiPSCs) that have been seeded as single cells. 12 clonal lines created from single-seeded hiPSCs exhibit high levels of Oct-4 (97-99%), TRA-1-60 (98-99%), and SSEA-4 (98-99%).
  (图片来源于Takara Bio USA, Inc.)
 
 
 

页面更新:2024-02-29 11:51:04

载体Human iPS Cell Generation™ All-in-One Vector酶试剂盒Takara Clontech

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载体Human iPS Cell Generation All-in-One Vector
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格(元) 说明书 数量
Takara 3671 Human iPS Cell Generation All-in-One Vector 10 μg ¥10,014 载体Human iPS Cell Generation™ All-in-One Vector 载体Human iPS Cell Generation™ All-in-One Vector 载体Human iPS Cell Generation™ All-in-One Vector
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□ 浓度 0.5 μg/μl
     
□ 贮存溶液  
     Tris-HCl (pH 8.0) 10 mM
     EDTA 1 mM
Limited Use Label License: [L44]
 
■ 制品说明
本制品是制备Human iPS细胞诱导用逆转录病毒所使用的载体。在高效、高表达逆转录病毒载体pDON-5 DNA(Code No.: 3658)上,插入了iPS细胞诱导用基因OCT3/4SOX2KLF4LIN28NANOG,各基因以Thosea asigna virus 的2A*1序列连接在一个载体上。本载体与Retrovirus Packaging Kit Ampho(Code No.: 6161)中的pGP Vector以及pE-ampho Vector共转染至逆转录病毒制备用细胞G3T-hi(Code No.: 6163)后,可以制备iPS诱导用逆转录病毒。如此制备的重组逆转录病毒由于和RetroNectin®(Recombinant Human Fibronectin Fragment)(Code No.: T100A/B)有高亲和性,所以在向目的细胞中导入基因时,使用经RetroNectin®处理后的培养皿或平板,可以得到较高的基因导入率,有效提高iPS细胞的诱导效率。
*1 5种基因转录在同一个mRNA上,翻译时在2A序列的特定位点被分割,使5种蛋白质可以等量表达。
 
■ 保存
-20
 
■ 各载体的遗传信息
  基因名   GenBank Accession No.
  OCT4   NM_002701.4
  SOX2   NM_003106.2
  KLF4   NM_004235.3*2
  LIN28   NM_024674.4
  NANOG   NM_024865.2
*2 更新的NM_004235.4中,CDS的5’端追加了对应9个氨基酸的碱基。本制品的KLF4基因中不含N端的这9个氨基酸的序列,已经确认可以有效诱导iPS细胞。
 
■ 载体图谱
载体Human iPS Cell Generation™ All-in-One Vector
 
 
 
 
 

页面更新:2024-02-29 10:22:09