InvivoGen产品更换包装和说明书实行无纸化通知
为减少对环境的危害，InvivoGen将推行环保计划，主要涉及以下2个方面：产品包装更换和说明书实行无纸化。
1. 包装更换：用拉链袋包装代替泡壳包装
拉链包装可重复使用、密封性好、便于运输，在使用后更易于回收和处理。6月1日起，InvivoGen将启用新包装，新旧包装的更替需要一个过渡时期，您可能也会收到旧包装的产品，请放心使用。包装的更改不影响产品质量，新包装设计如下：
2. 说明书无纸化
除了细胞系、试剂盒和质粒产品，其它产品不再提供纸质版说明书，InvivoGen将提供下面的卡片，卡片会随货品一起发出，客户可以通过扫描卡片上的二维码下载说明书。
以上更改不会影响产品的质量和使用，InvivoGen一直致力于为科研者提供优质的产品。
详情请联系 Invivogen 全国代理-上海金畔生物科技
支原体检测新风尚—Invivogen支原体检测试剂MycoStrip™
支原体污染是细胞培养中一个主要的污染问题，能够严重影响实验结果的重现性和有效性。InvivoGen的MycoStrip™使用等温PCR的技术检测支原体污染，在5分钟内就能于免疫层析试纸条上快速显示结果。
MycoStrip™基于等温PCR的技术检测污染细胞培养物的支原体。只需准备您的样品并添加我们专有的反应混合物，即可靶向和扩增细胞培养中最常见的支原体物种的16SrRNA基因。重要的是，MycoStrip™与测试的细菌、真菌或哺乳动物DNA没有任何交叉反应。
MycoStrip™的主要特点
• 简单：只需要一个加热块
• 快速：2 – 5分钟内显示结果
• 轻松解读：试纸条上出现一或两条条带
• 最少的操作时间：<15分钟
• 总检测时长：<1小时
• 灵敏度高：检测限低至1 x 102 CFU/ml
• 特异性高：无交叉反应
• 稳定：试剂盒可在-20°C下保存1年
如果测试结果为阳性怎么办？
不用紧张！
InvivoGen的抗支原体试剂可以轻松拯救您的培养物。
使用Plasmocin™或Plasmocure™处理并消除您的培养物污染。治疗完成后（约2周），可以使用MycoStrip™重新测试，比对处理前后的样本结果。
视频链接：
CgAG0mFvjg2AMSq4AIBoVI6GCRU471.mp4
更多详情请联系InvivoGen中国代理商上海金畔生物
抗体联合疗法—Invivogen新冠研究工具推荐
根据《病毒学报》2月8日发布的一项新的研究显示，新型冠状病毒自2019年底流行至今，已演变出800余个不同亚型或分支。有些病毒株的突变位点还位于病毒刺突蛋白的受体结合域（RBD），这可能意味着突变病毒株会有更强的传播力和抗免疫能力。
已发表的多组数据表明，近期出现的新冠变异毒株由于刺突蛋白发生的多个突变，增强了逃逸抗体中和的能力，这使科学家们需要重新评估现存抗体疗法的有效性。
华盛顿大学医学院的Michael S. Diamond团队近日在Nature发表了相关的研究，作者在体外及体内实验测试了被美国FDA批准紧急使用的抗体，如礼来（Lilly）公司开发的LY-CoV555 和礼来与君实生物联合开发的LY-CoV016、再生元(Regeneron)公司开发的REGN10933 和 REGN10987，以及其他正在进行临床试验的单抗对不同变异株（主要是spike基因产生突变的变异毒株）的效用，当中包括取自英国、南非、巴西、印度、美国纽约和加州等地发现的新冠变异株。
测试材料：
测试病毒株*：
WA1/2020 D614G
WA1/2020 N501Y/D614G
B.1.429（California）
B.1.1.7（United Kingdom）
Wash-B.1.351（chimeric strain）
Wash-B.1.1.28（chimeric strain）
B.1.617.1（(India clade)）
B.1.526（New York; S477N or E484K variant）
*SARS-CoV-2 strains with sequence substitutions in the spike gene.
测试抗体：
COV2-2196/COV2-2130（AstraZeneca）
S309/S2E12（Vir Biotechnology）
2B04/ 47D11（AbbVie）
REGN10933/ REGN10987（Regeneron）
LY-CoV555/LY-CoV016（(Lilly）
测试细胞株：
Vero-TMPRSS2；
Vero-hACE2-TMPRRS2
测试动物：
K18-hACE2 C57BL/6J mice (strain: 2B6. Cg-Tg(K18-ACE2)2Prlmn/J)
129 mice (strain: 129S2/SvPasCrl)
Syrian hamsters
结论简要：
1. 体外评估中和作用
研究团队使用Vero-TMPRSS2细胞平台进行中和实验发现，尽管单一使用REGN10933和LY-CoV555等的抗体会丧失部分或全部对携带E484突变变异株（如印度B.1.617.1）的中和能力，但组合使用抗体（如REGN10933/REGN10987）能保持它们的中和效力。
2. 体内评估预防功效
当进一步在小鼠和仓鼠上注射这些单一或组合抗体，研究人员发现组合抗体（如REGN10933/REGN10987）即使剂量较低也可预防多种变异株感染，显着减少体内促炎细胞因子，且没有出现耐药性。
3. 体内评估治疗功效
使用REGN10933/REGN10987等的组合抗体有效降低感染南非B.1.351株小鼠体内的病毒含量。值得留意的是，由于LY-CoV555对多种变异株没有效用，FDA在今年4月取消了单独使用LY-CoV555治疗COVID-19的紧急。此研究也表明单一使用LY-CoV555效用有限，印度B.1.617.1株已对LY-CoV555产生抗性；而LY-CoV555/LY-CoV016的组合抗体对部分变异株（如B.1.351）感染也失去保护作用。
产品推荐：
在新冠变种不断出现的情况下，单一抗体效用减弱，联合抗体疗法将成为趋势。InvivoGen提供可组合使用的REGN、LY-CoV2衍生抗体产品：
https://www.invivogen.com/sars2-spike-regn-mab
https://www.invivogen.com/sars2-spike-lycov-mab
另外InvivoGen可提供过表达ACE2/TMPRSS2的A549人肺癌细胞作为体外检测平台，比起Vero cells更具COVID-19的生物学相关性：
https://www.invivogen.com/a549-ace2-tmprss2-cells
更多详情请联系InvivoGen中国代理商上海金畔生物
InvivoGen支原体检测试剂MycoStrip™新品上市！
细胞养不好，考虑过支原体污染吗？
培养细胞时，发现细胞增殖变慢、形态渐渐改变，
是血清或培养基的问题吗？
很有可能是你的细胞被支原体污染了~~~~~
→ 什么是支原体呢？
支原体是最小和最简单的自我复制生命体。 由于支原体体积小 (～100 nm) , 缺乏刚性的细胞壁， 因此肉眼无法检测到支原体， 它们可以透过一般过滤膜， 并对很多抗生素都具有抵抗力 。支原体污染是细胞培养中的一个主要问题， 不止影响实验结果的有效性， 更会影响细胞工程制药的质量和安全性。
→ 我们为什么要检测支原体？
● 支原体影响细胞代谢，生化特性
● 支原体具传染性，会污染实验器材
● 有些文献审批时需要递交支原体检测数据
● 常规显微镜下无法观察支原体的存在
→ InvivoGen支原体检测新品MycoStrip™：
使用MycoStrip™Mycoplasma detection kit检测细胞培养污染的支原体是基于等温PCR的方法。只需准备你的样本，并添加InvivoGen专有的Reaction Mix，以靶向和扩增细胞培养中最常见的支原体种类的16S rRNA基因。在免疫层析试纸上，5分钟内结果清晰可见。
→ MycoStrip™ 优势：
● 操作简单（不需要特别仪器）
● 快速（1小时，操作时间15分钟）
● 高灵敏度（10-100 CFU/ml ）
→ 操作流程示意图：
→ 结果示例：
更多详情请联系InvivoGen中国代理商上海金畔生物
助力Omicron研究，InvivoGen推出变异株质粒
Omicron（奥密克戎）新冠变异毒株(Clade 21K/ B.1.1.529(BA.1))来势汹汹，比其他令人担忧的变异株具有更高的再次感染风险。这个变体存在大量突变，其中一些是令人担忧的。为此，InvivoGen推出了Omicron（奥密克戎）变异株假型质粒和Omicron（奥密克戎）变异株表达质粒，这些质粒编码了Omicron（奥密克戎）变异株的Spike全长序列。
SARS-CoV-2 Spike假型质粒-Omicron变异株
InvivoGen提供一系列编码了各种Spike变异株的pLV-Spike质粒，可与包装质粒和GFP报告质粒共转染293T细胞，这些质粒可以生成Spike假型慢病毒颗粒。假型慢病毒颗粒感染了表达SARS-CoV-2宿主受体的易感细胞系（例如A549-hACE2-TMPRSS2或HEK-Blue™ hACE2-TMPRSS2细胞）后，可以通过GFP表达量进行测定。此方法适合于病毒进入研究，并可用于测试抗体和小分子抑制剂的中和潜力。
其中，pLV-SpikeV11编码了Omicron（奥密克戎）变异株(Clade 21K/ B.1.1.529(BA.1))的Spike全长序列。为了获得最佳的表达效果。InvivoGen对密码子进行了优化并去除了Cterminal ER-retention signal，该质粒可与报告质粒和辅助蛋白质粒共转染后产生Spike假型慢病毒颗粒，也可用于SARS-CoV-2抑制剂的筛选。
质粒特征
序列参考: EPI_ISL_6699761.1
密码子优化
ORF大小: 3756 bp
测序引物:
– Forward rbt β-globin intron: TGGTTACAATGATATACACTG
– Reverse rbt β-globin pAn: CTCAAGGGGCTTCATGATGTC
质量控制:
– 质粒通过限制性内切酶分析和全长开放阅读框 (ORF) 的测序来确认
– 离子交换色谱纯化后，电泳确认超螺旋构象
SARS-CoV-2 Spike表达质粒-Omicron变异株
pUNO1-SpikeV1和pUNO1-SpikeV11-dfur是专为在哺乳动物细胞中表达SARS-CoV-2 Spike (S)蛋白而设计的质粒，包含含有功能性furin裂解位点或无活性的furin裂解位点两种形式。为了获得最佳的表达效果。InvivoGen对这两个质粒的密码子进行了优化并去除了Cterminal ER-retention signal，可用于SARS-CoV-2抑制剂的筛选，包括小分子、单克隆抗体、康复期血浆。pUNO1-SpikeV11含有功能性furin裂解位点，推荐用于Spike/ACE2细胞融合实验；pUNO1-SpikeV11-dfur含有无活性的furin裂解位点，推荐用于流式细胞术检测细胞表面。
质粒特征
|
货号 |
pUNO1-SpikeV11 |
pUNO1-SpikeV11-dfur |
|
序列参考 |
EPI_ISL_6841980 |
EPI_ISL_6841980 |
|
密码子优化 |
密码子优化和R683/5A突变 |
|
|
ORF大小 |
3756 bp |
3756 bp |
|
测序引物 |
– Forward HTLV 5’UTR: TGCTTGCTCAACTCTACGTC |
– Forward HTLV 5’UTR: TGCTTGCTCAACTCTACGTC |
|
质量控制 |
-质粒通过限制性内切酶分析和全长开放阅读框 (ORF) 的测序来确认 -离子交换色谱纯化后，电泳确认超螺旋构象 |
|
相关产品信息
|
货号 |
名称 |
规格 |
|
plv-spike-v11 |
pLV-SpikeV11 |
20 µg |
|
p1-spike-v11 |
pUNO1-SpikeV11 |
20 µg |
|
p1-spike-v11-df |
pUNO1-SpikeV11-dfur |
20 µg |
更多详情请咨询Invivogen中国代理商-上海金畔生物技术公司
Invivogen — ADCC细胞和内毒素、支原体检测
抗体依赖性细胞毒性（ADCC）报告细胞
抗体依赖性细胞毒性（ADCC）是治疗性单克隆抗体（mAbs）的一种主要作用方式。这种免疫反应依赖于单克隆抗体的双重活性：可变区确保特异性识别靶细胞表达的抗原，恒定区的“可结晶片段”Fc结合效应细胞表面的Fc受体（FcRs）。根据抗体同种型，Fc区对激活性FcRs显示不同的结合亲和力。
ADCC由表达FcγRIIIA （CD16A）的自然杀伤(NK)细胞介导，FcγRIIIA是IgG的活化受体。NK细胞表面的FcγRIIIA交联导致下游信号传导，包括细胞内钙浓度的增加，calcneurin/钙调素介导的NFAT去磷酸化（活化T细胞的核因子），允许其核转位并与ADCC相关基因的启动子区结合。最终，效应细胞释放杀死靶细胞的细胞毒性颗粒。
为了评估单克隆抗体的功能，invivogen为主要依赖NK细胞或外周血单核细胞的费力的经典ADCC检测提供了替代细胞。
| 产品货号 | 产品名称 | 描述 |
| jktl-nfat-cd16 | Jurkat-Lucia™ NFAT-CD16 Cells | Human T Lymphocytes – ADCC Reporter Cells |
| raji-null | Raji-Null Cells | Human lymphoblast cells – ADCC CD19/CD20/Control Target Cells |
| raji-hctla4 | Raji-hCTLA4 Cells | Human lymphoblast cells – ADCC CTLA-4 Target Cells |
| raji-hpd1 | Raji-hPD-1 Cells | Human lymphoblast cells – ADCC PD-1 Target Cells |
| raji-hpdl1 | Raji-hPD-L1 Cells | Human lymphoblast cells – ADCC PD-L1 Target Cells |
内毒素和⽀原体检测
PlasmoTest™提供一种快速、简便、可靠的可视化方法检测细胞培养中的支原体污染，该方法首次使用细胞检测支原体。PlasmoTest™试剂盒中的支原体感受器细胞是通过病原体受体——Toll样受体2（TLR2）来检测支原体。在支原体存在的情况下，TLR2启动下游信号通路，活化NF-kB和一些其他的转录因子，这些转录因子诱导SEAP（分泌型胚胎碱性磷酸酶）分泌到上清中，SEAP可以引起HEK-Blue™ Detection培养基的颜色变为紫色或蓝色。该方法无假阳性结果，出现颜色变化的阳性结果即可判定为细胞污染。
HEK-blue LPS检测试剂盒基于TLR4识别革兰氏阴性菌中结构不同的LPS，特别是脂质A(它们的毒性部分)的能力。设计成对LPS极其敏感的专有细胞，称为HEK-blue-4细胞，是这种内毒素检测试剂盒的主要特征。HEK-blue-4细胞检测到低浓度LPS的存在，起始浓度低至0.03ng/ml，都可以导致NK-κB活化。
| 产品货号 | 产品名称 | 描述 |
| rep-pt1 | PlasmoTest™ – Mycoplasma Detection Kit | 检测支原体污染 |
| rep-lps2 | HEK-Blue™ LPS Detection Kit 2 | 检测支原体污染 |
更多详情请咨询Invivogen代理商-上海金畔生物
热烈祝贺天然免疫产品专家InvivoGen成立25周年！
InvivoGen于1997年成立于法国，可为天然免疫研究提供一整套方案，包括不断更新的模式识别受体（PRRs）激动剂和拮抗剂，PRRs报告基因细胞以及天然免疫信号通路的诱导剂和抑制剂等。另外，InvivoGen的特色明星产品还包括超纯基因筛选抗生素和支原体预防和去除抗生素等。
上海金畔生物自2007年获得InvivoGen在中国的代理权，至今已与InvivoGen携手走过15个年头，为加快国内客户使用InvivoGen产品的到货速度，上海金畔生物备有大量热销产品的现货，欢迎您联系咨询详情！
InvivoGen可提供的主要产品如下：
PRR配体
InvivoGen提供多种高品质的能够特异性激活已知PRRs的PAMPs(病原相关分子模式)，所有PAMPs均经TLR激活验证和内毒素水平检测。
TLR Ligands CDS/STING Ligands ALPK1 Ligands
NOD Ligands Multi-PRR Ligands Labeled PRR Ligands
RLR Ligands Inflammasome Ligands Conjugatable PRR Ligands
CLR Ligands AhR Ligands
抑制剂
InvivoGen提供适用于研究不同先天免疫信号通路的抑制剂，此外，还可提供SARS-CoV-2小分子抑制剂及前体药物DNA合成抑制剂。
细胞培养相关产品
| 产品名称 | 用途 | |
| 抗微生物污染试剂 | MycoStrip™和PlasmoTest™ | 支原体检测 |
| Plasmocin™ prophylactic | 支原体预防 | |
| Plasmocin™ treatment和Plasmocure™ | 支原体去除 | |
| Normocin™ | 广谱预防微生物污染 | |
| Normocure™ | 多重耐药细菌去除 | |
| Fungin™ | 真菌预防及去除 | |
| Primocin® | 原代细胞抗微生物污染 | |
| 细胞转染 | LyoVec™ | 转染试剂 |
| NATE™ | 转染增强试剂 | |
| 基因筛选抗生素 | Blasticidin、Zeocin、Puromycin、G418 (Geneticin)，Hygromycin B Gold和Phleomycin | 基因筛选 |
细胞系
InvivoGen一直在更新人源和鼠源细胞系产品，每一批细胞都经过严格的细胞活性、生物活性和支原体污染检测，以确保获得有效和可重复的实验结果。
● PRR报告基因细胞系
● 细胞因子报告细胞系
● ADCC和ADCP效应报告细胞系
● 转录因子报告细胞系
● COVID-19相关细胞系
● 敲除（KO）细胞系
疫苗佐剂
InvivoGen提供包括已被批准应用的铝盐和油乳剂以及极具前景的PRR激动剂。
抗体相关产品和ELISA
● 针对模式识别受体(如anti-TLRs，anti-NLRs)和细胞因子的抗体。
● 适合在体内研究的InvivoFit™级重组小鼠抗小鼠单克隆抗体(mab)。
● 用于生产抗体的质粒，其有助于改变抗体的同种型。
● 纯化抗体产品：Peptide M、L和G。
● LumiKine™ Xpress试剂盒用于定量检测细胞培养上清、血液样品中细胞因子的水平。
详情请咨询InvivoGen全国代理商-上海金畔生物
mRNA疫苗与天然免疫——InvivoGen综述
信使核糖核酸（Messenger RNA，mRNA）技术开辟了疫苗学的新纪元。这篇综述简要介绍了mRNA疫苗的发展，以及mRNA与纳米递送系统产生的先天免疫反应。
The rise of mRNA vaccines
mRNA疫苗领域在新冠疫情中得到了快速发展，辉瑞/BioNTech 和Moderna分别研制的两款mRNA新冠疫苗更首先获得美国FDA的紧急使用1，使得mRNA疫苗受到大众的广泛关注。事实上，mRNA技术建立在多年的研究基础之上，其概念验证研究最早可以追溯到三十多年前，当时Wolff et al.注意到将裸mRNA注射到小鼠骨骼肌能够在小鼠体内实现外源性蛋白的表达2。之后在1990年代的研究mRNA也被证明可以在体外和体内引发体液和细胞免疫反应3。不过，碍于mRNA本身结构不稳定，在体内应用后很容易降解，以及会诱发不必要的先天免疫反应3，mRNA技术有很长一段时间被认为其临床应用性较低。随着近十多年科学的进步，这些mRNA疫苗的研发难点逐渐被克服，例如通过进行化学修饰使mRNA增加稳定性和调节免疫原性、使用纳米粒子技术提高mRNA的胞内表达和递送效率等。其中，脂质纳米颗粒（LNP）是当前最主流的mRNA疫苗的纳米递送系统。LNP-mRNA技术平台现时已被广泛应用在各种疾病（如癌症、传染病或遗传疾病）的预防性疫苗或治疗性疫苗的临床前或临床研究4。
Overcoming the innate immune responses
mRNA是由DNA作为模版转录而來、带有蛋白质合成编码信息的一类单链RNA（ssRNA）。合成mRNA可以通过体外转录酶促反应（in vitro transcription enzymatic reaction，IVT）产生3。不过，由于RNA具有天然的免疫刺激特性，在进入细胞时，外源的体外转录mRNA会被机体免疫防御系统的第一道防线识别，激活不同的模式识别受体（PRRs），例如位于内体的TLR7/85。而IVT制备过程除了产生目的产物mRNA本身外，还会产生各种副产物。其中主要的副产物双链RNA（dsRNA）可以被TLR3和细胞质中的RIG-I/MDA-5特异性识别5。PRRs对RNA的感知会触发信号转导级联反应，导致产生IFN-α和IFN-β等I型干扰素和促炎性细胞因子（见图1）5。这些先天免疫激活可以有不良的影响，它们可以抑制mRNA的翻译和蛋白抗原合成，甚至引发细胞死亡，最终降低mRNA疫苗的有效性。
为了克服这种先天免疫应答，Karikó et al.首先尝试化学修饰IVT mRNA，他们通过使用天然存在的假尿苷（Pseudouridine，Ψ）来替换RNA序列的尿苷碱基6。这种修饰模拟内源性mRNA，成功减少了mRNA与机体的TLR7/8和其他免疫传感器的结合，限制I型IFN的过度产生并提高mRNA的翻译能力6。除了Ψ，常用的mRNA修饰还有N1-甲基伪尿苷（N1-methylpseudouridine，m1ψ）。研究发现与ψ修饰相比，引入m1ψ的mRNA序列在增强蛋白表达的能力和逃脱机体天然免疫应答的表现更好，尤其是在减少TLR3激活反应方面7。此外，为了进一步避免不必要的先天免疫激活，从IVT mRNA中去除dsRNA杂质是非常重要。IVT mRNA的纯化方法可以通过基于微珠的沉淀和色谱方法来实现，例如高效液相色谱（HPLC）4。
Formulating mRNA with LNPs
经修饰的mRNA转录物可以依靠LNP载体来保护其免于被细胞外的RNA酶（RNAse）降解，协助其顺利进入细胞和内体逃逸3。不过，载体分子也可以与疫苗的免疫原性相关。LNP通常由不同比例的磷脂、胆固醇、可电离/阳离子脂质和PEG-脂质组成4。尽管磷脂和胆固醇作为天然的细胞膜成分不太可能触发显著的先天免疫应答，但一些可电离/阳离子脂质可以通过激活PRR通路诱导炎症反应8。例如，Lonez et al.发现diC14-amidine脂质体可刺激TLR49；另一种阳离子脂质RPR206252也被发现可以通过TLR2和NLRP3通路激活炎症反应10。此外，其他成分如PEG被指出可以激活补体系统，触发机体的超敏反应。LNP递送系统的设计依然需要持续优化，充分评估不同组件成分的炎症性质，以调节与体内的先天免疫系统的相互作用。
Fig. 1: IVT mRNA and dsRNA byproducts-induced immune activation
Innate immune activation assessment
先天免疫感应机制对mRNA疫苗可能是一把“双刃剑”。如上文所述，它可能抑制蛋白表达或导致过度的炎症反应；不过，预防性疫苗或某些类型的癌症疫苗可能会受益于其佐剂效应12。例如有研究显示辉瑞/BioNTech的新冠mRNA疫苗BNT162b2在小鼠体内通过MDA-5信号通路来诱导机体产生S蛋白特异性的CD8+ T细胞13，这种免疫反应可能有助提高疫苗效力的持久性。重要的是，mRNA疫苗的成分除了需要精心设计，也需要一个灵敏而强大的平台来评估它们的免疫原性，以确定mRNA疫苗的初步安全性和有效性。InvivoGen提供了一系列的PRR报告细胞，可以帮助测试纳米材料和mRNA制剂的免疫刺激特性，例如我们的HEK293衍生的TLR3和TLR7报告基因细胞被Coolen et al.用来比较两种不同纳米颗粒材料的mRNA疫苗的免疫激活14；Son et al.采用了InvivoGen的HEK293衍生的TLR4和TLR7报告基因细胞系来检测不同mRNA纳米载体在TLR信号通路的参与15（产品信息请参见下文）。
References
1.U.S. Food and Drug Administration, 2022. Regulatory information, FDA-2020-D-1137. 2.Wolff, J.A. et al. 1990. Science 1990, 247, 1465–1468. 3.Rosa, S.S. et al. 2021. Vaccine, 39(16), 2190-2200. 4.Hou, X. et al. 2021. Nat Rev Mater 6, 1078–1094 (2021). 5.Vlatkovic, I. et al. 2021. Biomedicines, 9(5), 530. 6.Karikó, K. et al. 2008. Molecular therapy, 16(11), 1833-1840. 7.Andries, O. et al. 2015. Journal of Controlled Release, 217, 337-344. 8.Igyártó, B.Z. et al. 2021. Current opinion in virology, 48, 65-72. 9.Lonez, C. et al. 2015. Cell Mol. Life Sci. 2015, 72, 3971–3982. 10.Lonez, C. et al. 2014. Nanomedicine 2014, 10, 775–782. 11.Kozma, G.T. et al. 2019. ACS Nano 2019, 13, 9315–9324. 12.Pardl, N. et al. 2018. Nature reviews Drug discovery, 17(4), 261-279. 13.Li, C. et al. 2022. Nature Immunology, 23(4), 543-555. 14.Coolen, A.L. et al. 2019. Biomaterials, 195, 23-37. 15.Son, S. et al. 2020. Nano letters, 20(3), 1499-1509.
InvivoGen’s solutions to accelerate your mRNA research
PRR REPORTER CELL LINES
InvivoGen一系列的人源和鼠源PRR报告细胞系稳定表达了一个功能性PRR基因，适用于评估您的mRNA转录物和递送材料的免疫原性。除了TLRs报告细胞外，我们还提供一系列表达CLRs、CDSs、STING、NLRs、RLRs、AhR或炎症小体等的细胞系以满足您的实验需求。这些细胞系以SEAP（分泌性胚胎碱性磷酸酶）和/或Lucia荧光素酶报告基因的表达作为读出，在细胞接受刺激后，您可以使用我们专有的报告检测试剂来监测信号通路的活化，得出快速可靠的结果。我们每条细胞系都通过各种方法的彻底验证，例如PCR、DNA测序、Western-Blot、FACS 和功能测定。
| CELL LINE | PRODUCT | PATHWAY STUDIED | REPORTER | CAT.CODE |
| HEK293 (Human) | HEK-Blue™ hTLR3 | Human TLR3 / NF-κB | SEAP | hkb-htlr3 |
| HEK-Blue™ hTLR4 | Human TLR4 / NF-κB | SEAP | hkb-htlr4 | |
| HEK-Blue™ hTLR7 | Human TLR7 / NF-κB | SEAP | hkb-htlr7 | |
| HEK-Blue™ hTLR8 | Human TLR8 / NF-κB | SEAP | hkb-htlr8 |
PRR SCREENING SERVICE
为了令您节省更多的实验时间及精力，InvivoGen也提供高质量的筛选服务，利用我们改造过的HEK293细胞帮助您确定候选疫苗材料的免疫特征。筛选参数可以从一组PRRs中选择，包括TLRs、NOD1/2、RIG-I/MDA-5、Dectin-1、Mincle和STING。 筛选服务分为两个级别（见下表），可以单独或按顺序执行。此外，我们的筛选服务快速，仅需三周的周转时间，助您加快mRNA疫苗前期研究。
| SERVICE | DESCRIPTION | CAT.CODE |
| Compound Profiling | Single dose testing on a set of PRRs | tlrl-test1 |
| Compound Dose Response | Dose response on one or several PRRs | tlrl-test2 |
Fig 2: TLR Response Profile. HEK-Blue™ reporter cells were stimulated with 1/10 dilution of the sample solution provided and a fixed concentration of positive controls. After 24h incubation, TLR-induced NF-κB activation was assessed by measuring the SEAP levels in cell supernatants using QUANTI-Blue™.
更多详情请咨询Invivogen代理商-上海金畔生物
InvivoGen免疫佐剂介绍
InvivoGen公司是天然免疫研究领域的专家，其产品线包含种类丰富的佐剂,选择InvivoGen佐剂将极大提升您在免疫佐剂领域的研究水平。InvivoGen公司提供一系列的佐剂产品,包括已被批准应用的铝盐和油乳剂,另外还有极具前景的模式识别受体的配体产品,统一命名为VacciGrade TM系列。该系列是用于适用于临床前研究的特定级别，每个批次的细菌污染物(内毒素和脂蛋白)水平使用LAL测定和/或TLR2和TLR4报告基因细胞测定进行验证。
佐剂是在疫苗接种时增强抗原特异性免疫反应强度和持久性的物质。它们包括载体和免疫刺激剂。
(1) 载体通常是颗粒性质的(例如氢氧化铝、乳剂)，它们在接种疫苗之前与抗原混合。这就产生了一种“储存效应”(如肌肉内)，使抗原缓慢释放，并延长与免疫细胞的相互作用时间。一些载体还具有免疫刺激特性，如氢氧化铝(明矾)，可引发炎性体症反应。
明矾和油乳剂——通过增加APCs的招募和激活，在注射部位捕获抗原产生“储存效应”，从而持续刺激免疫系统。
| 品名 | 货号 | 中文名称 | 建议工作浓度 |
| AddaS03 TM | vac-as03 | 类AS03角鲨烯佐剂 | / |
| AddaVax TM | vac-adx | 水包油型角鲨烯佐剂 | 1:1 (AddaVax™:antigen) |
| Adju-Phos® adjuvant | vac-phos | 磷酸铝佐剂 | 1:9 – 1:1 (Adju-Phos®:antigen). |
| Alhydrogel® adjuvant 2% | vac-alu | 氢氧化铝佐剂 | 1:9 – 1:1 (Alhydrogel®:antigen). |
| Quil-A® adjuvant | vac-quil | 皂苷疫苗佐剂 | Mice: ≤15 µg/dose Guinea pigs: ≤ 25 µg/dose Rabbits: ≤ 50 µg/dose Pigs: ≤300 µg/dose Cattle: ≤750 µg/dose |
(2) 免疫刺激剂通常是已知能激活模式识别受体(PRR)的合成分子，如Ttoll样受体(TLR)。PRR激动剂具有刺激抗原呈递细胞(APC)的能力，导致抗原呈递增强以及促炎趋化因子和细胞因子的分泌。抗原和PRR激动剂的混合旨在将两种分子共同递送到相同的APC，以获得最大的T细胞反应。
PRR激动剂-有效激活局部先天免疫反应，主要针对apcAPCs，从而影响必要的适应性免疫反应。几乎所有PRR家族的成员都是佐剂的潜在目标。
| 品名 | 名称 | 货号 | 建议工作浓度 |
| CpG ODN VacciGrade TM | ODN2006,ODN1826, | vac-2006；vac-1826； | / |
| ODN2395;ODN1585等 | vac-2395；vac-1585等 | ||
| Poly (1:C) VacciGrade TM | 多肌苷–多胞酸-TLR3激动剂 | vac-pic | 10 – 100 μg/mouse |
| MPLA Synthetic VacciGradeTM | 合成单磷酰脂质A – TLR4激动剂 | vac-mpls | 2- 20 μg/mouse |
| MPLA-SM VacciGradeTM | 单磷酰脂质A（明尼苏达沙门氏菌）-TLR4激动剂 | vac-mpla2 | 2- 20 μg/mouse |
| 2’3′-cGAMP VacciGrade TM | 哺乳动物CDN – Cyclic [G(2 ‘，5 ‘)pA(3 ‘，5 ‘)p] | vac-nacga23 | / |
| c-di-AMP VacciGradeTM | 环二腺苷酸单磷酸– STING激动剂 | vac-nacda | / |
| 2’3′-c-di-AM(PS)2 (Rp,Rp) VacciGrade™ | 环二腺苷酸单磷酸类似物-STING激动剂 | vac-nacda2r | / |
| c-di-GMP VacciGrade™ | 环二胍酸单磷酸-STING激动剂 | vac-nacdg | / |
| CL401 VacciGrade™ | TLR2和TLR7激动剂 | vac-c401-5 | 20 – 50 µg/mouse |
| CL413 VacciGrade™ | TLR2和TLR7激动剂 | vac-c413-5 | 20 – 50 µg/mouse |
| CL429 VacciGrade™ | TLR2 和NOD2激动剂 | vac-c429 | 20 – 50 µg/mouse |
| Flagellin FliC VacciGrade™ | TLR5激动剂 | vac-fla | 1 -10 µg/mouse |
| LPS-EB VacciGrade™ | TLR4激动剂 | vac-3pelps | 0.1 – 25 µg/mouse |
| Pam3CSK4 VacciGrade™ | TLR2/TLR1激动剂 | vac-pms | 2 -20 µg/mouse |
| R848 VacciGrade™ | TLR7/8激动剂 | vac-r848 | 10 – 100 µg/mouse |
| TDB VacciGrade™ | Mincle激动剂 | vac-tdb | 10 – 100 µg/mouse |
(3) 抗原-佐剂结合物是抗原- PRR激动剂融合疫苗，能比抗原和佐剂的简单混合物引起更强的免疫反应。这可以通过克服混合施用后两分子的快速解离来解释。此外，结合抗原能被树突状细胞更有效地吸收，并可内化形成细胞内抗原和免疫刺激物库，用于长时间的T细胞刺激。
可共轭的PRR配体-与抗原和佐剂混合物相比，可以化学偶联到抗原上，以获得更有效的免疫反应。
|
类别 |
名称 |
货号 |
|
STG-982 |
STING激动剂(含马来酰亚胺) |
vac-stg982 |
|
STG-968 |
STING激动剂(含叠氮基团） |
vac-stg968 |
|
TLR7-887 |
TLR7激动剂(含马来酰亚胺) |
vac-tl7887 |
|
TLR7-975 |
TLR7激动剂(含叠氮基团） |
vac-tl7975 |
STING共轭配体的应用
TLR7共轭配体的应用
如需获取最新价格或折扣价，请联系InvivoGen中国代理商-上海金畔生物
更多详情请咨询Invivogen代理商-上海金畔生物
Invivogen细胞常见问题
收到细胞后，首次进行培养，应该注意些什么？
收到细胞后最重要的步骤是解冻，但亚洲的客户无需进行此步骤，因为Invivogen将细胞运往亚洲地区时使用的是细胞培养板在常温下运输。收到细胞后需要立马进行传代培养，不要放在-80℃或者液氮中，因为这会损伤细胞。
我在HEK和THP1细胞的初始培养过程中有困难，请问有什么建议可以参考吗？
如果您在初始培养细胞的过程中遇到任何问题，请参考以下的建议：
● 对于前2-3次传代的细胞，应置于含20%胎牛血清且无抗生素的培养基中培养。但此条件下培养细胞时间不宜过长，2-3代之后的细胞应使用含10%胎牛血清的培养基进行培养。
● 请定期检查细胞状态，不要使细胞的汇合度达到100%。
● 当冻存细胞时，请继续培养其他未冻存的细胞，以防冻存细胞有问题。
如果你正在培养THP1细胞，以下是额外需要注意的地方：
● 对于THP1细胞，我们建议细胞浓度在3 x 105 -7 x 105 cells/mL时进行传代，一般为5 x 105 cells/mL。如果低于这个浓度，细胞将需要很长时间才能生长，如果高于2 x 106 cells/mL，则可能会产生毒性。
● 在每次传代之间，请不要使用离心机分离细胞。THP1细胞在条件培养基中生长的会更好，因此当传代时，不要弃去上一代培养细胞时所使用的全部培养基，留1-2 mL，并加入新鲜的培养基。但是原来培养基的占比不能超过50%，因为这样会导致细胞无法获得足够的营养去生长。
为什么要在细胞传代2-3次之后才可加入筛选抗生素？
由于最初的耐药标记物水平较低，细胞对筛选抗生素会更加敏感。因此，建议等待2 – 3代后再添加筛选抗生素，以避免在前几代时对细胞造成进一步的应激。
建议用什么血清来培养InvivoGen的细胞?
建议使用无内毒素的血清来培养报告细胞系。InvivoGen在培养细胞时，会要求供应商提供其所使用血清的COA，以确保低水平的内毒素，以免激活NF-kB通路。
细胞培养基中应添加多少浓度的青霉素或链霉素？
建议使用100 U/mL的青霉素和100 µg/mL链霉素。
如果用于细胞培养的培养基中所含的L-glutamine（L-谷氨酰胺）浓度与说明书中不一致会有问题吗？
没有问题的，只要培养基中L-谷氨酰胺的浓度不低于2 mM就可以。大多数DMEM配方中含有4mM的L-谷氨酰胺，但一般情况下培养基中含有2 mM的L-谷氨酰胺即可维持细胞的正常生长。
细胞培养过程中可以使用谷氨酰胺或谷氨酰胺衍生物GlutaMax吗？
谷氨酰胺或谷氨酰胺衍生物GlutaMax均已通过测试，可以使用，在使用过程中与添加L-谷氨酰胺的细胞相比未发现有任何差异。
为什么推荐使用热灭活的血清培养细胞？
许多InvivoGen的细胞系都是通过SEAP（分泌型胚胎碱性磷酸酶）报告系统进行改造的。在很多情况下胎牛血清（FBS）中含有的微量碱性磷酸酶（AP）会干扰检测结果。因此，为了降低背景干扰，建议使用灭活血清培养Invivogen的所有细胞。
有灭活胎牛血清（FBS）的操作方法吗？
实验室中建议在56℃中加热30分钟来灭活血清。灭活时，需要等水浴温度达到56℃之后再将含血清的试管放入，以确保血清完全灭活。
冷冻培养基必须含有灭活的胎牛血清（FBS）吗？
实验时我们通常使用含灭活胎牛血清（FBS）的冷冻培养基，生长培养基及测试培养基。然而，如果您在冷冻培养基中使用非灭活的血清也是没有问题的。
在培养HEK细胞时没有贴壁，应如何处理呢？
当HEK-Blue™细胞没有贴壁时，要么是开始培养时稀释过度，要么是在培养瓶中融合过度窒息而死。
以下建议可使您在后续培养中避免出现这种问题：
● 改变培养基，在T25培养基中以1.5×10^6 cells/mL培养细胞。
● 建议将细胞转入新的培养瓶之前要清洗细胞。有时细胞难以贴壁是因为活细胞与死细胞聚集成簇。已因此清洗细胞以去除影响细胞贴壁的DMSO。
● 使用含20%胎牛血清（FBS）的培养基培养细胞。
● CellBIND表面细胞培养瓶的使用会促进细胞贴壁及生长，然而，一般的细胞培养过程中不需要使用表面细胞培养瓶。
培养THP1细胞时细胞分裂一次需要一周的时间是正常的吗？
细胞分裂一次需要一周的时间是不正常的。由于细胞克隆的不同，通常情况下THP1细胞分裂一次需要24-72个小时。培养THP1细胞时需保证细胞的浓度大于或等于5 x 105 cells/mL。Invivogen的研发团队已经注意到当稀释过度时会出现死亡。此外，在等待细胞改善的过程中不要添加Normocin™。
如果THP1细胞在生长过程中出现聚集成团但未死亡应该怎么办呢？
只要细胞生长很好，形态正常，细胞抱团生长是没有问题的。因为死细胞的存在可能是导致细胞抱团生长的原因，所以您可以离心去除死细胞。请注意，我们建议您在进行化验前均质细胞。
应如何从活细胞中去除死细胞？
推荐使用120 G转速离心10分钟。
可以提供一些减少HEK-Blue™细胞背景信号的建议吗?
● 为减少实验中的背景信号，需在刺激之前一直NF-kB的活性。
● 实验分析时使用至少传代24小时的健康细胞。
● 确保细胞的汇合度不超过80%。
● 使用预热的PBS清洗细胞。
● 使用灭活的胎牛血清（FBS）培养细胞（清除血清中残留的碱性磷酸酶）。
● 进行细胞刺激之前不要离心。
● 每个孔板中不要加入过多的细胞（推荐每孔中加入大概50000细胞）。
为什么在检测培养基中不推荐加入NormocinTM？可以在检测培养基中添加筛选抗生素吗？
不建议在检测培养基中添加NormocinTM是因为在进行检测时要减少培养基中潜在的干扰因素。因此也不推荐在检测培养基中添加其他筛选抗生素。
当使用数量相同但传代数不同的细胞及浓度相同的配体实验时，可以得到类似的结果吗？
这很难说，因为很难预测传代数对实验结果的影响。但是在我们的实验中使用传代数不同的细胞对实验结果的影响是非常小的。
Invivogen的细胞系可以用于其它实验吗？例如ELISA和Western blotting.
是的，Invivogen的细胞系是可以用于ELISA和Western Blots的。然而，我们没有做过此类验证。
Invivogen的细胞系可以用于定量检测吗？
它们是半定量测试。然而，它们可以通过使用阳性对照制作标准曲线来用于定量测量。
是否可以将刺激后的上清液冷冻，以便日后读取/检测SEAP的产量?
如果您不能立即进行检测实验，可将上清样本储存于4℃，但储存时间不可超过一周。如果需要更长时间的储存，可将其置于-20℃。但在此条件下推荐使用含20%胎牛血清（FBS）的检测培养基，以在冷冻过程中尽量保护SEAP不受损害，请不要重复冻融循环。
如果实验中需要使用抑制剂处理细胞，是用抑制剂单独预处理细胞还是配体与抑制剂共孵育后处理细胞?
这由抑制剂所决定。如果抑制剂阻断了信号通路中的受体或元素，我们建议将抑制剂与细胞预孵育至少30分钟。如果抑制剂结合或阻断配体(即针对特定细胞因子的抗体)，那么最好在添加到细胞之前将抑制剂与配体预孵育。
在刺激之前，细胞需要接种多长时间？
在加入配体时应同时接种细胞（先加配体）。
对于贴壁细胞应该使用什么冷冻培养基？
对于贴壁细胞，推荐使用DMEM，20%(v/v)的胎牛血清（FBS）和10%(v/v)的DMSO。
对于悬浮细胞应该是什么冷冻培养基？
对于悬浮细胞，推荐使用胎牛血清（FBS）和10%的DMSO。
如果冻存步骤未成功，应如何处理？
以防出现类似的问题，Invivogen强烈建议在解冻冻存的细胞之前维持培养细胞培养板中未冻存的细胞处于正常生长状态。
SEAP的产生需要NF -κB和AP-1转录因子的激活，还是仅仅激活一个转录因子就可以得到信号?
Invivogen的报告细胞系仅需要激活一个转录因子（NFκB 和/或 AP-1）就可以得到信号。
Lucia™荧光素酶来自于什么物种?
InvivoGen的荧光素酶是完全合成的，不属于任何天然荧光素酶。
更多详情请联系 InvivoGen 中国代理商上海金畔生物