Mabtech ELISpot和FluoroSpot试剂盒—特异性检测疫苗诱导的免疫反应

Mabtech ELISpot和FluoroSpot试剂盒—特异性检测疫苗诱导的免疫反应

ELISpot由于其定量检测、高敏感性和操作简单,因而可以作为临床试验中评估和定义候选疫苗的一种分析方法, FluoroSpot将这种分析方法向前推进了一步,允许同时检测同一样品中的几种分析物。ELISpot和FluoroSpot可用于监测T细胞反应,并提供细胞反应的频率和细胞因子谱。使用这些免疫测定法也可以研究B细胞反应。通过这两种方法可以对疫苗引起的抗体反应的质量和持续时间进行监测。

FluoroSpot可用于检测和分析多功能T细胞的疫苗特异性免疫反应,如T细胞分泌IFN-γ和IL-2。该方法已在临床应用中得到验证,表明FluoroSpot具有ELISpot方法的所有优点,如灵敏度、稳定性和简便性。

Mabtech ELISpot和FluoroSpot试剂盒—特异性检测疫苗诱导的免疫反应

通过肿瘤活检,RNA测 序 ,从而找到新表位。将新表位RNA注入患者体内,患者的树突状细胞吞噬这种“癌症疫苗”,翻译RNA编码的抗原并将其呈现给T细胞。图为接种疫苗前后免疫原性的改变。

FluoroSpot可同时检测同一样品中的三种分析物

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Mabtech不同形式的ELISpot,ELISA,FluoroSpot

Mabtech不同形式的ELISpot,ELISA,FluoroSpot

● Mabtech ELISpot Kits

根据不同研究人员的需求,Mabtech可提供不同形式的ELISpot试剂盒,满足多种测试需求。具体主要有以下3种形式的ELISpot Kits:

Mabtech不同形式的ELISpot,ELISA,FluoroSpot

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ELISpotBASIC基础ELISpot套装 ELISpotPLUS含预包被板、二步检测试剂及底物 ELISpotPRO含预包被板、一步检测试剂及底物


● 不同形式ELISpot Kits的区别

组分

ELISpotBASIC (the Reagents for 4 plates) ELISpotPLUS(1,2 or 10 plates) ELISpotPRO(2 or 10 plates)
ELISpot plates Pre-coated Pre-coated
Capture mAb
Detection mAb-ALP/HRP
Detection mAb-biotin N/A
Streptavidin-ALP/HRP N/A
Substrate
Positive control stimuli anti-CD3 mAb (selected analytes)
Polyclonal activator For B-cell ELISpot N/A N/A
货号区别(以Mouse IFN-gamma指标为例) 3321-2AALP显色)
3321-2HHRP显色)
3321-1HP-11 plate)
3321-1HP-22 plates)
3321-1HP-1010 plates)
3321-4APTALP显色,白板)
3321-4APWALP显色,透明板)
3321-4ASTALP显色,白色可拆板)
3321-4HPTHRP显色,白板)
3321-4HPWHRP显色,透明板)
3321-4HSTHRP显色,白色可拆板)

注:-表示无此组分,√表示含此组分,N/A表示不适用,下同。与PLUS形式的ELISpot相比,PRO级别的ELISpot使用的是一步法检测体系,可提高反应速率,但在信号放大上不如PLUS级别的ELISpot。


● Mabtech FluoroSpot Kits

FluoroSpot是在ELISpot基础上发展起来的,使用荧光检测代替比色法。荧光免疫斑点实验结合了ELISpot的灵敏性和同时分析几种分析物分泌的能力,适用于单次检测和大规模筛选不同功能特征的细胞群检测。荧光免疫斑点实验是将夹心法与荧光标记检测法相结合,对同一孔内的两种或多种分析物进行检测。 

组分 FluoroSpotFLEX FluoroSpotPLUS
FluoroSpot plates No-coated Pre-coated strip-plates
Capture mAb(s)
Detection mAb(s)
Secondary detection reagents conjugated to fluorophores
Anti-CD3 mAb (positive control)*
Anti-CD28 mAb (for co-stimulation)*
R848+IL-2 (polyclonal activators)**
Fluorescence enhancer II
Size 1 and 10 plates 2 and 10 plates
货号区别(以Mouse IFN-gamma指标为例) 需先在mabtech官网输入种属和指标,以官网生成的货号为准 FSP-41A
FSP-41B
同指标货号A/B表示指标检测的激发波不同


● Mabtech ELISA Kits

根据不同研究人员的需求,Mabtech可提供2种形式的ELISA试剂盒,具体包括灵活性比较强的ELISABASIC适用于想建立自己检测方法的研究人员)以及稳定性较好的ELISAPRO含有预包被抗体的可拆板子,可节省检测时间)。

Mabtech不同形式的ELISpot,ELISA,FluoroSpot


● 不同形式ELISA Kits的区别

组分 ELISABASIC(the Reagents for 4 plates) ELISAPRO(1,2 or 10 plates)
ELISA plates Pre-coated strip-plates
Capture mAb
Detection mAb
SA-ALP (or HRP)
Substrate
ELISA standard
 Buffers, diluents, stop solution, adhesive plate covers
Reconstitution buffer
Diluent, stop solution, adhesive plate covers
货号区别(以Mouse IFN-gamma指标为例) 3321-1AALP显色)
3321-1HHRP显色)
3321-1HP

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FluoroSpot荧光免疫斑点实验

FluoroSpot荧光免疫斑点实验

FluoroSpot荧光免疫斑点实验可用于单细胞水平上检测多种细胞因子的分泌。和ELISpot一样,是一种灵敏、操作简单的方法。在FluoroSpot实验中,不同细胞因子的单抗混合物用到了夹心法中。不同于ELISpot,FluoroSpot使用的是荧光标记的检测试剂。一种分析物用生物素化抗体检测,另外一种分析物使用tag标记的抗体检测。这种实验方法的设计保证了可以在同一孔内进行2种细胞因子的检测。接下来使用红色荧光标记的Streptavidin和绿色荧光标记的抗tag抗体进行信号的级联放大。使用自动荧光读板仪分析产生的2种颜色的荧光斑点并生成图像。图像叠加后上显示在相同位置的荧光斑点表示为同时分泌2种细胞因子的细胞。

                                        图1   FluoroSpot检测原理                                                 图2  白色念珠菌提取物处理和未处理的PBMC细胞(300,000
                                                                                                                                      cells/well)过夜培养后,使用FluoroSpot检测分泌 IFN-γ 和 / 

                                                                                                                                     或IL-22的细胞。使用AID (Autoimmun Diagnostika GmbH)
                                                                                                                                     公司的iSpot分析仪进行斑点分析。在FITC (IFN-γ) 和 Cy3
                                                                                                                                     (IL-22)叠加图片上相同位置显示的斑点表示为同时分泌IFN-γ
                                                                                                                                     和 IL-22的细胞。
FluoroSpot试剂盒信息
 FluoroSot试剂盒
 产品名称
 编号
 供应商
 Human IgG/IgA FluoroSpot kit
 FS-05R06G
 Mabtech
 Human IgG/IgM FluoroSpot kit
 FS-05R17G
 Mabtech
 Human IgG/IgA/IgM FluoroSpot kit
 FS-050617
 Mabtech
 Human IFN-γ/Granzyme B FluoroSpot kit
 FS-0110
 Mabtech
 Human IFN-γ/Granzyme B FluoroSpot kit, pre-coated
 FSP-0110
 Mabtech
 Human IFN-γ/IL-2 FluoroSpot kit
 FS-0102
 Mabtech
 Human IFN-γ/IL-2 FluoroSpot kit, pre-coated
 FSP-0102
 Mabtech
 Human IFN-γ/IL-5 FluoroSpot kit
 FS-0108
 Mabtech
 Human IFN-γ/IL-13 FluoroSpot kit
 FS-0104
 Mabtech
 Human IFN-γ/IL-17A FluoroSpot kit
 FS-0103
 Mabtech
 Human IFN-γ/IL-22 FluoroSpot kit
 FS-0118
 Mabtech
 Human IL-1β/GM-CSF FluoroSpot kit
 FS-1215
 Mabtech
 Human IL-1β/IL-6 FluoroSpot kit
 FS-1213
 Mabtech
 Human IL-1β/IL-12/-23 (p40) FluoroSpot kit
 FS-1214
 Mabtech
 Human IL-1β/TNF-α FluoroSpot kit
 FS-1209
 Mabtech
 Human IL-6/GM-CSF FluoroSpot kit
 FS-1315
 Mabtech
 Human IL-6/IL-12/-23 (p40) FluoroSpot kit
 FS-1314
 Mabtech
 Human IL-6/TNF-α FluoroSpot kit
 FS-1309
 Mabtech
 Human TNF-α/GM-CSF FluoroSpot kit
 FS-0915
 Mabtech
 Human TNF-α/IL-12/-23 (p40) FluoroSpot kit
 FS-0914
 Mabtech
 FluoroSot试剂盒
 Monkey IgG/IgA FluoroSpot kit
 FS-05R24G
 Mabtech
 Monkey IFN-γ/IL-2 FluoroSpot kit
 FS-2122
 Mabtech
 小鼠FluoroSot试剂盒
 Mouse IFN-γ/IL-2 FluoroSpot kit
 FS-4142
 Mabtech
 Mouse IFN-γ/IL-5 FluoroSpot kit
 FS-4143
 Mabtech
 Mouse IFN-γ/IL-17A FluoroSpot kit
 FS-4144
 Mabtech
*注意事项
 1. 使用抗CD28抗体对CD28共刺激,可以提高IL-2的分泌
在FluoroSpot实验中,捕获抗体对细胞因子的捕获可能会影响细胞因子的分泌。板孔里包被的IL-2捕获抗体能够降低游离IL-2的分泌,而游离IL-2对T细胞活化是必须的。为了补偿这种影响,可使用抗CD28单抗进行共刺激,在合适的浓度下可以增加特异性抗原的分泌而不会增加自然分泌。其他细胞因子也有可能会受到捕获抗体的影响,因此使用抗CD28抗体刺激在很多情况下可以有效的解决这个问题。
2.建议使用带分离滤光片的自动读板仪分析
建议使用带FITC和Cy3滤光片的自动荧光ELISpot分析仪仪分析FluoroSpot。为了准确的检测2种细胞因子分泌的细胞,分析仪需要具有对2种滤光片获得的信号进行叠加分析的能力。