标签归档：epz

EPZ005687

发表于由

EPZ005687

货号：
IE1470

品牌：
Jinpan

EPZ005687

暂无详情
产品简介
有效期 2年
英文名称 EPZ005687
CAS 1396772-26-1
分子式 C32H37N5O3
分子量 539.67
储存条件 -20℃
纯度 ≥98%
外观（性状） White to yellow Solid
单位 瓶
生物活性 EPZ005687 是一种有效的，选择性的 EZH2 抑制剂，Ki 值为 24 nM，对其选择性是对 EZH1 的 50 倍，对其他 15 种甲基转移酶的 500 倍。[1-2]
IC50 Ki: 24 nM (EZH2)[1]
In Vitro EPZ005687显示PRC2酶活性的浓度依赖性抑制，IC 50值为54±5nM。 EPZ005687特异性抑制淋巴瘤细胞中的H3K27甲基化。 EPZ005687对携带EZH2Y641F的细胞系的增殖具有显著影响。 EPZ005687降低了突变体而非野生型EZH2淋巴瘤细胞的增殖[1]。 EPZ005687（0.5,1,5和10μM）以剂量依赖性方式诱导U937细胞的明显凋亡。 EPZ005687明显抑制U937细胞的增殖，但对NBMCD34 +细胞的增殖影响较小。 EPZ005687诱导G1期阻断并降低U937细胞中S期细胞的百分比。此外，EPZ005687在U937细胞中产生明显的H3K27甲基化缺失，但对NBMCD34 +细胞的H3K27甲基化几乎没有影响[2]。
激酶实验 EPZ005687的10点曲线使用在DMSO中的连续3倍稀释制备，从2.5mM开始（化合物的最终顶部浓度为50μM，DMSO为2％）。将1μL等分试样的抑制剂稀释系列点在384孔微量滴定板中。 100％抑制对照由1mM终浓度的产物抑制剂S-腺苷高半胱氨酸（SAH）组成。在1X测定缓冲液（20mM Bicine [pH 7.6]，0.002％吐温20,0.005％牛皮明胶中）将化合物与每孔40μL的5nM PRC2（50μL中的最终测定浓度为4nM）孵育30分钟。 0.5mM DTT）。每孔加入10μL底物混合物，其包含测定缓冲液3H-SAM，未标记的SAM和代表含有C-末端生物素的组蛋白H3残基21-44的肽（附加于C-末端酰胺封端的赖氨酸）以引发反应。将反应在室温下孵育90分钟，并用每孔10μL的600μM未标记的SAM淬灭，然后转移至384孔Flashplate并在30分钟后洗涤。
SMILES O=C(NCC1=C(C)C=C(C)NC1=O)C2=CC(C3=CC=C(CN4CCOCC4)C=C3)=CC5=C2C=NN5C6CCCC6
靶点 Histone Methyltransferase（EZH2）
细胞实验 对于细胞周期，将WSU-DLCL2细胞以1×10 5个细胞/ mL的密度接种在12孔板中。将细胞与EPZ005687以0.2μM，0.67μM，2μM和6μM一起孵育，总共2mL，历时10天。进行所有剩余的细胞周期分析。
数据来源文献 [1]. Knutson SK, et al. A selective inhibitor of EZH2 blocks H3K27 methylation and kills mutant lymphoma cells. Nat Chem Biol. 2012;8(11):890-6.
[2]. Tang SH, et al. Effects of H3K27 methylation inhibitor EPZ005687 on apoptosis, proliferation and cell cycle of U937 cells and normal CD34 positive cells. Zhongguo Shi Yan Xue Ye Xue Za Zhi. 2014 Dec;22(6):1561-6
规格 5mg 10mg

EPZ005687是一种有效的，选择性EZH2抑制剂。

EPZ011989 hydrochloride

发表于由

EPZ011989 hydrochlorideCAS号： 2095432-26-9；1598383-40-4(freebase)分子式： C35H51N5O4·HCl分子量： 642.27描述纯度储存/保存方法可溶性/溶解性

产品描述
描述

EPZ011989 is a potent, selective, orally bioavailable EZH2 inhibitor with Ki of <3 nM.
纯度
98%
储存/保存方法
Store at -20℃ for one year（Powder）；Store at 2-4℃ for two weeks；Store at -20℃ for six months after dissolution.
基本信息
可溶性/溶解性
体外:
Ethanol 100mg/mL(155.69mM)
DMSO 20mg/mL(31.13mM)
Water <1mg>

分子结构图

EPZ011989 hydrochloride

Tazemetostat

发表于由

Tazemetostat

货号：
IT1790

品牌：
Jinpan

Tazemetostat

暂无详情
产品简介
有效期 2年
别名 EPZ-6438
英文名称 Tazemetostat
CAS 1403254-99-8
分子式 C34H44N4O4
分子量 572.74
储存条件 -20℃
纯度 ≥98%
外观（性状） White to gray Solid
单位 瓶
生物活性 Tazemetostat (EPZ-6438) 是一种有效，选择性，口服的 EZH2 抑制剂，Ki 和 IC50 分别为2.5和11 nM。[1-3]
IC50 Ki: 2.5 nM (EZH2)[1]
In Vitro Tazemetostat（EPZ-6438）以与底物S-腺苷甲硫氨酸（SAM）竞争的方式抑制EZH2。 Tazemetostat抑制EZH1，EZH2（在肽测定中），EZH2（在核小体测定中），IC50分别为392nM，11nM和16nM。与其他14种测试的HMT相比，Tazemetostat的选择性相对于EZH1为35倍，选择性> 4,500倍[1]。
In Vivo Tazemetostat（EPZ-6438,125mg / kg）在给药期间诱导肿瘤停滞，并且与给药期后的载体相比产生显著的肿瘤生长延迟。在第21天给药前5分钟或给药后3小时测量Tazemetostat血浆水平显示全身暴露的明显剂量依赖性增加[1]。通过ELISA测量，在给予Tazemetostat（EPZ-6438，口服给药，100,300或1,000mg / kg）的大鼠的PBMC和骨髓中观察到剂量依赖性靶抑制[2]。
SMILES O=C(C1=CC(C2=CC=C(CN3CCOCC3)C=C2)=CC(N(CC)C4CCOCC4)=C1C)NCC5=C(C)C=C(C)NC5=O
靶点 EZH2
动物实验 携带sc G401异种移植物的小鼠[1] SCID小鼠在右侧腹侧用G401肿瘤细胞（每只小鼠5×10 6个细胞）皮下接种于0.2-mL基础培养基和基质胶的混合物中用于肿瘤发展。对于肿瘤功效研究，肿瘤大小达到157mm 3时开始治疗（每组n = 16只小鼠）。 Tazemetostat（125mg / kg，250mg / kg和500mg / kg）或媒介物（0.5％NaCMC加0.1％吐温80水溶液）以10μL/ g的剂量体积口服BID 21或28 d。在第一周期间每天测量动物体重，然后在研究的剩余部分每周测量两次。使用卡尺在两个维度上每周测量肿瘤大小两次，并且体积以立方毫米表示。大鼠[2]雄性和雌性Sprague-Dawley大鼠（8周龄）用Tazemetostat（100,300或1,000mg / kg）或载体口服治疗28天，每天一次。在第22天，来自最高剂量组的雌性接受另一剂量，随后在最后一次给药后约29小时在第23天安乐死。在第28天最后一次给药后约29小时，在第29天对所有其他动物实施安乐死。在安乐死时，收集全血量，分离外周血单核细胞（PBMC），并将细胞沉淀冷冻并储存在-80℃。
细胞实验 293T（CRL-11268），RD（CRL-136），SJCRH30（CRL-2061），A204（HTB-82），G401（CRL-1441），G402（CRL-1440），KYM-1（JCRB0627），293T使用RD，SJCRH30，A204，G401和G402细胞。在第0天，细胞未经处理，经DMSO处理，或者以10μM开始用Tazemetostat处理，并以三倍或四倍稀释度降低。使用Cell Titer Glo在第0天，第4天和第7天读取平板，在第4天补充化合物/培养基。在第7天，将六孔板用胰蛋白酶消化，离心并重新悬浮在新鲜培养基中用于计数。 VI-细胞。将来自每种处理的细胞以96孔板中的原始密度重复一式三份。使细胞粘附于平板过夜，并在第0天处理细胞。在第7,11和14天，使用Cell Titer Glo读取平板，在第11天补充化合物/培养基。一式三份的平均值为用于绘制时间过程中的增殖，并计算IC50值。对于细胞周期和细胞凋亡，将G401和RD细胞以每板1×10 6个细胞的密度一式两份接种在15-cm培养皿中。将细胞与Tazemetostat以1μM一起孵育，总共25mL，历时14天，细胞在第4,7和11天分裂回原始接种密度。细胞周期分析和TUNEL测定使用番石榴流式细胞仪[1]。
数据来源文献 [1]. Knutson SK, et al. Durable tumor regression in genetically altered malignant rhabdoid tumors by inhibition of methyltransferaseEZH2. Proc Natl Acad Sci U S A. 2013 May 7;110(19):7922-7.
[2]. Knutson SK, et al. Selective inhibition of EZH2 by EPZ-6438 leads to potent antitumor activity in EZH2-mutant non-Hodgkin lymphoma. Mol Cancer Ther. 2014 Apr;13(4):842-54.
[3]. Majumder S, et al. Shifts in podocyte histone H3K27me3 regulate mouse and human glomerular disease. J Clin Invest. 2018 Jan 2;128(1):483-499
规格 5mg 10mg

是一种有效的，选择性EZH2抑制剂。

EPZ011989

发表于由

EPZ011989CAS号： 1598383-40-4分子式： C35H51N5O4分子量： 605.81描述纯度储存/保存方法别名外观可溶性/溶解性

产品描述
描述
EPZ011989 is a potent, orally-available EZH2 Inhibitor.
纯度
>98%
储存/保存方法
Store at -20℃ for one year（Powder）；Store at 2-4℃ for two weeks；Store at -20℃ for six months after dissolution.
基本信息
别名
EPZ011989,EPZ-011989
外观
Powder
可溶性/溶解性
DMSO: ≥ 33 mg/mL

分子结构图

EPZ011989

EPZ011989 trifluoroacetate

发表于由

EPZ011989 trifluoroacetateCAS号： 1598383-41-5分子式： C37H52F3N5O6分子量： 719.83 描述纯度储存/保存方法可溶性/溶解性

产品描述
描述
EPZ-011989 trifluoroacetate is a potent and orally active Zeste Homolog 2 (EZH2) inhibitor with metabolic stability. EPZ-011989 trifluoroacetate has inhibitory inhibition for EZH2 with a Ki value of <3 nM. EPZ-011989 trifluoroacetate shows robust methyl mark inhibition and anti-tumor activity. EPZ-011989 trifluoroacetate can be used for the research of various cancers[1]. EPZ011989 (trifluoroacetate) is a click chemistry reagent, itcontains an Alkyne group and can undergo copper-catalyzed azide-alkyne cycloaddition (CuAAc) with molecules containing Azide groups.
纯度
98%
储存/保存方法
Store at -20℃ for one year（Powder）；Store at 2-4℃ for two weeks；Store at -20℃ for six months after dissolution.
基本信息
可溶性/溶解性
DMSO : 100 mg/mL (138.92 mM; Need ultrasonic)

分子结构图

EPZ011989 trifluoroacetate

Pinometostat

发表于由

Pinometostat

货号：
IP3080

品牌：
Jinpan

Pinometostat

暂无详情
产品简介
有效期 2年
别名 EPZ-5676
英文名称 Pinometostat
CAS 1380288-87-8
分子式 C30H42N8O3
分子量 562.71
储存条件 -20℃
纯度 ≥98%
外观（性状） White to off-white solid
单位 瓶
生物活性 Pinometostat (EPZ-5676) 是有效的DOT1L组蛋白甲基转移酶抑制剂， Ki 为 80 pM。[1-2]
In Vitro Pinometostat（EPZ-5676）抑制H3K79me2，MV4-11和HL60细胞的IC50值分别为3 nM和5 nM。 Pinometostat（EPZ-5676）是一种有效的MV4-11增殖抑制剂，IC50值为3.5 nM [1]。 Pinometostat（EPZ-5676）诱导协同和持久的抗增殖作用，增加分化标志物的表达和作为单剂的凋亡，并证明与MLL-r细胞中的AML标准护理药物组合的组合益处[2]。
In Vivo Pinometostat（EPZ-5676）（70mg / kg，ip）在MLL重排白血病的大鼠异种移植模型中引起完全和持续的消退。 Pinometostat（EPZ-5676）（70,35 mg / kg，iv）可降低大鼠肿瘤的HOXA9和MEIS1 mRNA水平，并降低体内MLL-融合靶基因的表达[1]。
SMILES NC1=NC=NC2=C1N=CN2[C@H]3[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN([C@@H]4C[C@H](CCC5=NC6=C(C=CC(C(C)(C)C)=C6)N5)C4)C(C)C)O3
靶点 DOT1L
动物实验 将PBS中的0.2mL MV4-11细胞悬浮液（1×10 7个细胞）皮下注射到雌性无胸腺裸鼠（Crl：NU（Ncr）-Foxn1nu）中。通过卡尺测量肿瘤，并且当肿瘤体积达到约100mma3时，在开始给予Pinometostat（EPZ-5676）之前，根据肿瘤大小将小鼠随机分成治疗组（n = 10）。 Pinometostat每天三次腹膜内给药，持续28天，10和20mg / kg，在10％乙醇的盐水溶液中。称重小鼠并用卡尺每周两次测量肿瘤直至研究结束。
细胞实验 为了分析在Pinometostat处理后MV4-11细胞中组蛋白甲基化的抑制，在变性条件下用Tris-甘氨酸SDS运行缓冲液在10-20％Tris HCl凝胶上分级分离提取的组蛋白（400ng）并转移到硝酸纤维素滤膜上。将滤器切成条并在室温（RT）下在封闭缓冲液中温育1小时，然后在4℃下在封闭缓冲液中温育过夜。用洗涤缓冲液（含有0.01％吐温20（PBST）的磷酸盐缓冲盐水（PBS））将滤膜洗涤3次，每次5分钟，并在室温下用红外标记的第二抗体温育1小时。将滤膜在PBST中洗涤并在室温下用适当的总组蛋白抗体对照（小鼠抗组蛋白H3（1：20,000），CST 3638或小鼠抗组蛋白H4（1：10,000），CST 2935）重新探测1小时。将滤膜再次在PBST中洗涤，并在室温下用红外标记的二抗（IRDye 800Cw驴 – 抗小鼠IgG（1：20,000），Li-Cor 926-32212）孵育1小时。在PBST中最后一次使用后，使用Odyssey红外成像仪（Li-cor）扫描过滤器。为了分析来自给予Pinometostat（EPZ-5676）的大鼠的外周血单核细胞（PBMC）中H3K79甲基化的抑制，在变性凝胶上分级分离20μLPBMC全细胞裂解物，并通过用针对H3K79me2或总H3的抗体进行免疫印迹分析。使用Odyssey软件定量特异于H3K79me2抗体和总组蛋白H3对照抗体的信号强度。通过将H3K79me2信号强度除以相同泳道中的总组蛋白H3控制信号强度来归一化。
数据来源文献 [1]. Daigle SR, et al. Potent inhibition of DOT1L as treatment for MLL-fusion leukemia. Blood. 2013 Jun 25. [Epub ahead of print]
[2]. Klaus CR, et al. DOT1L inhibitor EPZ-5676 displays synergistic antiproliferative activity in combination with standard of care drugs and hypomethylating agents in MLL-rearranged leukemia cells. J Pharmacol Exp Ther. 2014 Sep;350(3):646-56
规格 5mg 10mg

是一种蛋白甲基转移酶DOT1L的S-腺苷甲硫氨酸(SAM)竞争性抑制剂。

GSK3235025

发表于由

GSK3235025

货号：
IG2250

品牌：
Jinpan

GSK3235025

暂无详情
产品简介
有效期 2年
别名 EPZ-015666
英文名称 GSK3235025
CAS 1616391-65-1
分子式 C20H25N5O3
分子量 383.44
储存条件 -20℃
纯度 ≥98%
外观（性状） Solid
单位 瓶
生物活性 EPZ015666 是有口服活性的 PRMT5抑制剂，IC50 为 22 nM。[1-2]
IC50 22 nM (PRMT5)[1]
In Vitro 用EPZ015666处理MCL细胞系导致SmD3甲基化和细胞死亡的抑制，IC50值在纳摩尔范围内[1]。 EPZ015666，一种有效的肽竞争性和SAM合作抑制剂，相对于其他甲基转移酶，对PRMT5具有> 10,000倍的特异性[2]。
In Vivo EPZ015666是口服生物可利用的并且适合于体内研究。我们对携带皮下Z-138和Maver-1异种移植物的严重联合免疫缺陷（SCID）小鼠进行了21天的功效研究，每天两次（BID）口服给药4个剂量组：每公斤25,50,100和200毫克体重（mg / kg）。在连续给药21天后，对动物实施安乐死，并分析血液和组织以确定甲基标记药效学和肿瘤生长抑制（TGI）之间的关系。在两种MCL模型中，EPZ015666在21天后显示剂量依赖性暴露和TGI。与载体治疗的肿瘤相比，在第21天测量的所有EPZ015666剂量组中的肿瘤显示出重量，体积和肿瘤生长的统计学显著差异。以200mg / kg BID给药诱导Z-138细胞中的肿瘤停滞，21天后具有> 93％TGI，而Maver-1细胞显示> 70％TGI。另外，使用Granta-519细胞系测试第三次MCL异种移植物，该细胞系是在第18天达到终点的快速生长模型，并且在200mg / kg组中显示出剂量依赖性功效，45％TGI。 EPZ015666在所有三种模型中都具有良好的耐受性，在200mg / kg剂量组中体重损失最小，没有其他临床观察[1]。
激酶实验 将EPZ015666从1,000至0.051nM连续稀释三倍，并点样到384孔聚丙烯V底微孔板中。将3H-SAM在测定缓冲液中连续稀释两倍，用于七浓度稀释系列，最高浓度为700nM（最终测定浓度）。通过添加4nM酶和40nM肽（两者的最终测定浓度）开始反应。将反应温育60分钟，并通过在测定缓冲液中加入10μL/孔的600μM未标记的SAM（最终测定浓度）来猝灭。对于肽竞争，EPZ015666从1,000至0.051nM连续稀释三倍，并点样到384孔聚丙烯V底微孔板中。将肽在测定缓冲液中连续稀释两倍，得到七峰稀释系列，最高浓度为480nM（最终测定浓度）。通过加入4nM酶和75nM 3H-SAM（两者的最终测定浓度）引发反应。将反应物温育60分钟，并通过在测定缓冲液中加入10μL每孔600μM未标记的SAM（最终测定浓度）来淬灭反应[1]。
SMILES O=C(NC[C@H](O)CN1CCC(C=CC=C2)=C2C1)C3=CC(NC4COC4)=NC=N3
靶点 PRMT5
动物实验 小鼠[1]雄性CD-1小鼠（25-40g; n = 6，每个时间点3只）用单剂量的EPZ015666以2mg / kg静脉尾静脉注射和10mg / kg口服强饲法给药，两种剂量均配制在20％NN-二甲基乙酰胺的水溶液中。将动物禁食过夜并在给药当天给药前称重。通过下颌下或眼眶后出血以预先指定的时间间隔（7个时间点）从动物中取出约30μL血液。对于最后一个时间点（24小时），在动物麻醉（70％CO 2：30％O 2）的同时通过心脏穿刺收集样品。将血液样品转移到K2-EDTA管中并置于湿冰上，然后在4℃（3,000g，15分钟）离心以在样品收集后30分钟内获得血浆。在蛋白质沉淀和LC-MS / MS分析之前，将血浆样品储存在-70±10℃。我们通过分析一系列含有100 ng / mL拉贝洛尔作为内标的对照血浆等分试样和1-3,000 ng / mL EPZ015666来构建标准校准曲线。分析中还包括四个级别的质量控制（3-2,400 ng / mL EPZ015666）。
细胞实验 线性/对数生长的培养细胞在2-20mL培养基中分裂成2×10 5个细胞/ mL的接种密度，这取决于生长期结束时所需的产量。将化合物在DMSO中稀释并加入到每个培养容器中，DMSO的最终浓度为0.2％。使细胞不受干扰地生长96小时。在每个处理期结束时，通过离心（5分钟，1,200rpm）收获细胞，并用PBS冲洗细胞沉淀一次，然后在干冰上冷冻，等待进一步处理。对所有MCL系进行长期增殖测定，根据每种细胞系的生长特征对初始接种密度稍作调整。所有测定均进行12天[1]。
数据来源文献 [1]. Chan-Penebre E, et al. A selective inhibitor of PRMT5 with in vivo and in vitro potency in MCL models. Nat Chem Biol. 2015 Jun;11(6):432-7.
[2]. Kryukov GV, et al. MTAP deletion confers enhanced dependency on the PRMT5 arginine methyltransferase in cancer cells. Science. 2016 Mar 11;351(6278):1214-8
规格 2mg 5mg

是一种有效的，选择性的 PRMT5 抑制剂。

EPZ011989

发表于由

EPZ011989

货号：
IE0300

品牌：
Jinpan

EPZ011989

暂无详情
产品简介
MDL MFCD28964159
别名 CS-2079;CS-1609
CAS 1598383-40-4
分子式 C35H51N5O4
分子量 605.81
纯度 HPLC≥98%
SMILES O=C(NCC1=C(C)C=C(C)NC1=O)C2=CC(C#CCN3CCOCC3)=CC(N(CC)[C@H]4CC[C@H](N(CCOC)C)CC4)=C2C
靶点 EZH2 ，EZH1
规格 5mg 10mg
是特异性的EZH2抑制剂。

EPZ020411 Dihydrochloride

发表于由

EPZ020411 Dihydrochloride

货号：
IE1420

品牌：
Jinpan

EPZ020411 Dihydrochloride

暂无详情
产品简介
别名 EPZ020411hydrochloride
CAS 2070015-25-5
分子式 C25H40Cl2N4O3
分子量 515.52
储存条件 2-8℃
纯度 ≥98%
单位 瓶
SMILES CNCCN(C)CC1=CNN=C1C2=CC=C(O[C@H]3C[C@H](OCCC4CCOCC4)C3)C=C2.Cl[H]
靶点 Histone Methyltransferase;PRMT1，6，8
规格 5mg
EPZ020411是有效的、选择性的PRMT6小分子抑制剂。

EPZ004777

发表于由

EPZ004777

货号：
IE1460

品牌：
Jinpan

EPZ004777

暂无详情
产品简介
有效期 2年
英文名称 EPZ004777
CAS 1338466-77-5
分子式 C28H41N7O4
分子量 539.67
储存条件 -20℃
纯度 ≥98%
外观（性状） Solid
单位 瓶
生物活性 EPZ004777 是一种有效的选择性 DOT1L 抑制剂，IC50 为 0.4 nM。[1-2]
IC50 0.4 nM (DOT1L)[1]
In Vitro EPZ004777证明了DOT1L酶活性的有效浓度依赖性抑制，IC50为400±100pM。与其他HMT（PRMT5,521±137nM;其他，>50μM）相比，EPZ004777对DOT1L的抑制具有显著的选择性。延长的EPZ004777治疗的效果对于MLL重排细胞系是非常特异的。 EPZ004777显著降低了活MV4-11和MOLM-13细胞的数量，而Jurkat细胞的生长未受影响。在EPZ004777存在的情况下，少量MV4-11细胞仍然存活，但是当长时间跟踪生长曲线表明它们已经停止分裂时，它们的数量保持不变。 EPZ004777在浓度为3μM或更高时强烈抑制MLL-AF9转化细胞的增殖[1]。 EPZ004777选择性抑制MLL-AF10和CALM-AF10转化的小鼠骨髓细胞的增殖[2]。
In Vivo EPZ004777耐受性良好，未观察到明显的毒性。连续暴露于EPZ004777 14天后的全血细胞计数分析显示总白细胞计数的统计学显著增加，其由中性粒细胞，单核细胞和淋巴细胞的增加引起。 EPZ004777（50,100或150 mg / mL）给药耐受性良好，未观察到明显的体重减轻[1]。
激酶实验 纯化禽（鸡）红细胞寡核小体。将EPZ004777在DMSO中连续稀释3倍，总共10个浓度，从1μM开始。将1μL等分试样的每种抑制剂稀释液涂布在384孔微量滴定板中。 100％抑制对照由2.5μM终产物浓度的产物抑制剂S-腺苷-L-高半胱氨酸（SAH）组成。将化合物与40μL/孔的0.25nM DOT1L（1-416）在测定缓冲液（20mM TRIS [pH 8.0] 10mM NaCl，0.002％吐温20,0.005％牛皮明胶，100mM KCl）中孵育30分钟，和0.5mM DTT）。每孔加入10μL底物混合物，其包含含有200nM 3H-SAM（80Ci / mmol），600nM未标记SAM和20nM核小体的测定缓冲液以引发反应（两种底物都存在于最终反应混合物中相应的KM值，称为“平衡条件”的测定形式。将反应物温育120分钟并用每孔10μL的800μMSAM终止。在闪光板中测量放射性在核小体底物中的掺入。在相似的平衡测定条件下测定组蛋白甲基转移酶组，其中SAM和蛋白质/肽底物的浓度均等于它们各自的KM值[1]。
SMILES NC1=C2C(N([C@H]3[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN(C(C)C)CCCNC(NC4=CC=C(C(C)(C)C)C=C4)=O)O3)C=C2)=NC=N1
靶点 Histone Methyltransferase（DOT1L）
动物实验 小鼠[1]将9周龄雌性裸鼠（nu / nu）皮下注射右侧腹侧的MV4-11细胞（200μL5×107细胞/ mL悬浮液，在PBS的1：1混合物中）基质胶）。当肿瘤大小达到300-400mm 3时，将小鼠随机分配到治疗组。六只小鼠接受渗透泵的皮下植入，在10％乙醇，90％水中含有50mg / mL EPZ004777，并且五只对照小鼠未接受泵植入。泵植入后6天，处死动物并收集来自处理动物和对照动物的肿瘤样品用于免疫印迹分析。对于播散性白血病模型，用pMMP-LucNeo逆转录病毒转导MV4-11细胞。 8周龄雌性NOD.Cg-PrkdcscidIl2rgtm1Wj1 / SzJ（NSG）小鼠购自Jackson Laboratories。通过侧尾静脉静脉注射总共1×107个MV4-11-LucNeo细胞。在注射75mg / kg D-荧光素后，通过生物发光成像确定播散性白血病的植入。将具有记录的白血病的动物分成由载体（15％乙醇，50％PEG300,35％水）负载的渗透泵或50,100或150mg / mL的EPZ004777组成的治疗组。渗透泵在一周后更换。在100和150mg / mL剂量组中观察到由化合物沉淀引起的刺激，排除了额外的泵替代。每天监测动物的临床症状，并且当它们显示与终末白血病疾病一致的痛苦迹象时实施安乐死。对数秩分析用于确定存活曲线的统计显著性。
细胞实验 为了评估人细胞系中的细胞增殖和活力，将指数生长的细胞一式三份地以3×10 4个细胞/孔的密度接种在96孔板中，最终体积为150μL。将细胞在3μM（增殖曲线）或EPZ004777的增加浓度（IC50测定）存在下孵育至50μM。使用Guava Viacount测定法每3-4天测定活细胞数，持续18天，并在Guava EasyCyte Plus仪器上分析。在细胞计数的天数，更换生长培养基和EPZ004777并将细胞分裂回5×104细胞/孔的密度。总细胞数表示为每孔分裂调节的活细胞。对于每个细胞系，使用Graphpad Prism软件从每个时间点的浓度依赖性曲线确定IC 50值。确定IC 50值的实验持续到IC 50值稳定（THP-1细胞第18天，所有其他细胞系第14天）[1]。
数据来源文献 [1]. Daigle SR, et al. Selective killing of mixed lineage leukemia cells by a potent small-molecule DOT1L inhibitor. Cancer Cell. 2011 Jul 12;20(1):53-65.
[2]. Chen L, et al. Abrogation of MLL-AF10 and CALM-AF10-mediated transformation through genetic inactivation or pharmacological inhibition of the H3K79 methyltransferase Dot1l. Leukemia. 2013 Apr;27(4):813-22.
规格 1mg 5mg

EPZ004777是一种有效的，选择性的DOT1L抑制剂。