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双重磷酸酶染色试剂盒TRACP & ALP double-stain Kit酶试剂盒Takara Clontech

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上海金畔生物科技有限公司代理Takara酶试剂盒全线产品，欢迎访问官网了解更多产品信息和订购。

双重磷酸酶染色试剂盒TRACP & ALP double-stain Kit
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格（元） 说明书 数量
Takara MK300 TRACP & ALP double-stain Kit 1 Kit ￥2,496 双重磷酸酶染色试剂盒TRACP & ALP double-stain Kit 双重磷酸酶染色试剂盒TRACP & ALP double-stain Kit 双重磷酸酶染色试剂盒TRACP & ALP double-stain Kit
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【产品规格变更通知】
自2020年2月4日发货的lot开始（Lot. AJG0826A），本试剂盒中的细胞固定液【Fixation base solution】变更为不含有丙酮和乙醇的包装。
客户需要另外单独准备丙酮及乙醇（一般的试剂级别即可）。
上述日期以前收到的产品，请使用此说明书 双重磷酸酶染色试剂盒TRACP & ALP double-stain Kit
 
■ 制品内容 双重磷酸酶染色试剂盒TRACP & ALP double-stain Kit
1. Fixation base solution 13.5 ml
Citrate buffer (pH 5.4)  
注：首次使用前，请添加丙酮和乙醇。  
2. Sodium tartrate 4 ml
0.5 M sodium tartrate buffer (pH 5.2)  
3. Substrate for ACP (premixed) for 10 ml × 3
NABP/FRVLB  
4. Substrate for ALP (premixed) for 10 ml × 3
BCIP/NBT  
5. Nuclear stain 10 ml
Methyl green (Contains acetic acid in the solvent.)  
   
试剂盒之外需要准备的试剂：  
· acetone (reagent grade) 13.5 ml
· ethanol (reagent grade) 2.7 ml
注：添加上述两种试剂到1. Fixation base solution中，具体操作方法请参考说明书。
 
 
■ 制品说明
本制品是将成骨细胞的特异标志酶碱性磷酸酶 (ALP) 的显色基质和破骨细胞的特异标志酶抗酒石酸酸性磷酸酶 (TRACP) 的显色基质直接加入到样品中，对碱性磷酸酶和酸性磷酸酶染色的同时并进行活性比较的双重染色试剂盒。同时与试剂盒中附带的核染色试剂组合使用，还可以观察到破骨细胞的多核。
有两种细胞在骨代谢中起着重要的作用，一种是吸收骨基质的破骨细胞，另一种是合成骨基质的成骨细胞，骨形成与骨吸收形成骨代谢平衡。通过对两种特异性标志酶的同时检出，可以分析骨相关细胞的分化及骨组织的分布情况。
本制品中的两种基质是预混型，配制反应液十分简便，可以在对碱性磷酸酶和抗酒石酸酸性磷酸酶双重染色的同时并进行活性比较。如果需要使用水溶性基质，那么可以选择TRACP & ALP Assay Kit (Code No. : MK301)。使用时请根据实验目的进行选择。
 
■ 保存
-20℃。开封后按照各试剂的适宜温度保存。
 
■ 特点
◇ 反应液的配制十分简便。
◇ 可进行酸性磷酸酶和碱性磷酸酶活性的单独染色和双重染色。
◇ 试剂盒中含有细胞固定液和核染色用试剂。
 

页面更新：2024-04-01 15:51:31

双链cDNA合成试剂盒PrimeScript™ Double Strand cDNA Synthesis Kit酶试剂盒Takara Clontech

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双链cDNA合成试剂盒PrimeScript™ Double Strand cDNA Synthesis Kit
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格（元） 说明书 数量
Takara 6111A PrimeScript™ Double Strand cDNA Synthesis Kit 10 Rxns ￥1,629 双链cDNA合成试剂盒PrimeScript™ Double Strand cDNA Synthesis Kit 双链cDNA合成试剂盒PrimeScript™ Double Strand cDNA Synthesis Kit 双链cDNA合成试剂盒PrimeScript™ Double Strand cDNA Synthesis Kit
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■ 制品内容 (10 次量)
PrimeScript RTase (200 U/μl) 10 μl
RNase Inhibitor (40 U/μl) 10 μl
Oligo(dT)18 Primer (1 μg/μl) 20 μl
Random Primer (9mer) (0.3 μg/μl) 20 μl
5 × 1st Strand Synthesis Buffer 40 μl
dNTP Mixture (10 mM each) 40 μl
E. coli RNase H/E. coli DNA Ligase Mixture 20 μl
E. coli DNA Polymerase I (20 U/μl) 20 μl
5 × 2nd Strand Synthesis Buffer 300 μl
T4 DNA Polymerase (1 U/μl) 40 μl
RNase free dH2O 600 μl × 2
Control RNA (1 μg/μl)* 5 μl
 
*【Control RNA】
本试剂盒中的Control RNA是以pSPTet3质粒 (质粒中的SP6启动子下游插入长约1.4 kb的pBR322来源的DNA片段，其DNA片段上含有抗四环素基因) 为模板由SP6 RNA聚合酶经体外转录而得到的。Control RNA (约1.4 kb) 是带有30个A碱基的具有poly (A)+尾的RNA。以这种RNA为模板合成的双链cDNA插入到适当的质粒载体中，如果确实为全长的cDNA，那这种质粒便可获得四环素抗性。
 
■ 制品说明
以原核细胞或者真核细胞的mRNA为模板合成cDNA后再进行cDNA的克隆，是分子生物学研究中的一种重要手段。利用这一技术可以容易地进行基因的构造解析和目的蛋白质的表达研究等。
一般来说，cDNA的合成以及cDNA文库的利用方法是：在合成与目的mRNA互补的双链cDNA后，将双链cDNA与细菌或病毒来源的载体进行重组，再将重组体导入细菌或真核细胞内进行复制、扩增cDNA，然后再对cDNA进行解析，或者再进一步进行体外转录或体外翻译等。
本试剂盒主要以来自植物和动物的poly (A)+RNA合成双链DNA 。
本试剂盒主要是以Gubler-Hoffman法为基础构建的，其原理见图1、图2，简要说明如下：
1. 在PrimeScript RTase的作用下，利用Oligo(dT)18 Primer或者Random Primer合成cDNA的第一条链 。
2. 使用E. coli RNase H使DNA-RNA杂合体中的RNA链形成单链切口 (Nick) 。在E. coli DNA Polymerase I 与E. coli DNA Ligase的作用下，RNA链被DNA链置换，合成cDNA的第二条链。
3. 使用T4 DNA Polymerase使双链cDNA片段末端平滑。
 
■ cDNA合成原理图
 
双链cDNA合成试剂盒PrimeScript™ Double Strand cDNA Synthesis Kit
图1 使用Oligo(dT)18 Primer时的cDNA合成
 
 
双链cDNA合成试剂盒PrimeScript™ Double Strand cDNA Synthesis Kit
图2 使用Random Primer时的cDNA合成
 
■ 保存
-20℃。
 
■ Troubleshooting
如果实验不能正常进行，请按照说明书内容确认实验操作，检验以下几点：
1. Control RNA的使用
本试剂盒中的Control RNA (pSP Tet3 Poly(A)+ mRNA) 可以用于对照实验，并确认1st Strand cDNA或2nd Strand cDNA的合成反应是否顺利进行。
2. mRNA的纯度检测
为了能够获得更高的cDNA合成效率，尽可能使用完整的mRNA是非常重要的。在进行cDNA合成反应前，可以通过测定260 nm和280 nm的吸光度 (A260/A280在1.8～2.1是理想值) ，或使用琼脂糖凝胶电泳法对RNA的纯度进行检测。
3. RNase的污染
实验时要注意一定不能在mRNA的样品中混入RNase。实验用的器具、试剂等应尽可能进行高温灭菌处理。操作过程要佩戴手套。
 
 

页面更新：2023-12-01 16:12:01

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Takara MK300 TRACP & ALP double-stain Kit 1 Kit ￥2,496 双重磷酸酶染色试剂盒TRACP & ALP double-stain Kit 双重磷酸酶染色试剂盒TRACP & ALP double-stain Kit 双重磷酸酶染色试剂盒TRACP & ALP double-stain Kit
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■ 制品内容 双重磷酸酶染色试剂盒TRACP & ALP double-stain Kit
1. Fixation base solution 13.5 ml
Citrate buffer (pH 5.4)  
注：首次使用前，请添加丙酮和乙醇。  
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0.5 M sodium tartrate buffer (pH 5.2)  
3. Substrate for ACP (premixed) for 10 ml × 3
NABP/FRVLB  
4. Substrate for ALP (premixed) for 10 ml × 3
BCIP/NBT  
5. Nuclear stain 10 ml
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· acetone (reagent grade) 13.5 ml
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注：添加上述两种试剂到1. Fixation base solution中，具体操作方法请参考说明书。
 
 
■ 制品说明
本制品是将成骨细胞的特异标志酶碱性磷酸酶 (ALP) 的显色基质和破骨细胞的特异标志酶抗酒石酸酸性磷酸酶 (TRACP) 的显色基质直接加入到样品中，对碱性磷酸酶和酸性磷酸酶染色的同时并进行活性比较的双重染色试剂盒。同时与试剂盒中附带的核染色试剂组合使用，还可以观察到破骨细胞的多核。
有两种细胞在骨代谢中起着重要的作用，一种是吸收骨基质的破骨细胞，另一种是合成骨基质的成骨细胞，骨形成与骨吸收形成骨代谢平衡。通过对两种特异性标志酶的同时检出，可以分析骨相关细胞的分化及骨组织的分布情况。
本制品中的两种基质是预混型，配制反应液十分简便，可以在对碱性磷酸酶和抗酒石酸酸性磷酸酶双重染色的同时并进行活性比较。如果需要使用水溶性基质，那么可以选择TRACP & ALP Assay Kit (Code No. : MK301)。使用时请根据实验目的进行选择。
 
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■ 特点
◇ 反应液的配制十分简便。
◇ 可进行酸性磷酸酶和碱性磷酸酶活性的单独染色和双重染色。
◇ 试剂盒中含有细胞固定液和核染色用试剂。
 

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