CYTO-ID®长期细胞示踪试剂盒（绿色/红色）——ENZO热销产品

Enzo Life Sciences的CYTO-ID^®绿色/红色长期细胞示踪试剂盒采用专有的非共价细胞标记技术，将含有疏水性脂肪链的荧光染料稳定地结合入细胞膜的脂质双分子层中。标记缓冲液对哺乳动物细胞是等渗的，不含去污剂或有机溶剂。染料对细胞没有毒性，可在细胞中保留长达96小时，并在有丝分裂时传递给子细胞。由于该染料不对细胞内的蛋白质进行共价修饰，与基于硫醇反应的氯甲基或胺反应的琥珀酰亚胺酯类荧光染料的分子探针相比，细胞正常的生理反应得到更好的保留。

也可以使用CELLESTIAL^®染料进行双重标记。标记的细胞可以通过共聚焦荧光显微镜等仪器进行观察。此外，染料标记的和未标记的细胞群可通过流式细胞仪进行分析。在延长96小时的培养后，没有观察到荧光转移到相邻细胞。这与Calcein AM和BCECF AM标记形成鲜明对比，后者在生理温度下只能在存活的细胞内保留几个小时。

Enzo Life Sciences的CYTO-ID^®长期细胞示踪试剂盒适用于多种应用，如追踪细胞谱系，长期细胞活力、细胞毒性、细胞粘附、细胞迁移和细胞-细胞融合研究。

产品特点

● 可使用各种CELLESTIAL^® 荧光探针进行双重标记

● 荧光从染料标记的细胞转移到未标记的细胞的情况极少

● 适用于长期细胞存活率、细胞毒性、细胞粘附、细胞迁移和细胞间融合测定

实验示例

图1.明场（A）和荧光显微镜图像（B）显示了用CYTO-ID^® Green Tracer dye对Jurkat细胞的染色。使用标准的FITC（绿色）滤光片组对膜结合信号进行成像。

图2.流式细胞术分析Jurkat细胞混合群随时间变化的荧光。将用 CYTO-ID^®绿色示踪染料染色的Jurkat细胞与未染色的Jurkat细胞群混合并孵育120小时。

图3.明场（A）和荧光显微镜图像（B）显示了用CYTO-ID^® Red Tracer dye对Jurkat细胞的染色。使用标准的Texas Red（红色）滤光片组对膜结合信号进行成像。

图4.荧光显微镜图像显示了用CYTO-ID^® Red Tracer dye对HeLa细胞的染色。使用标准的Texas Red（红色）滤光片组对膜结合信号进行成像(20x)。

图5.流式细胞术分析Jurkat细胞混合群随时间变化的荧光。将用 CYTO-ID^®红色示踪染料染色的Jurkat细胞与未染色的Jurkat细胞群混合并孵育96小时。

产品信息

部分产品引用文献

1. Proangiogenic effects of tumor cells on endothelial progenitor cells vary with tumor type in an in vitro and in vivo rat model: R. An, et al.; FASEB J. 32, 5587 (2018), Application(s): Identification of TR-BME2 cells in tube-formation co-culture assay with CC521 colon adenocarcinoma cells

2. A liquid biopsy-based method for the detection and quantification of circulating tumor cells in surgical osteosarcoma patients: H. Zhang , et al.; Int. J. Oncol. 50, 1075 (2017), Application(s): Use with HOS cells (osteosarcoma). Microscopy

3. INBRX-120, a CD8α-targeted detuned IL-2 that selectively expands and activates tumoricidal effector cells for safe and durable in vivo responses: F. J. Sulzmaier, et al.; J. Immunother. Cancer 11, e006116 (2023)

4. Epigenetic modulation of immune synaptic-cytoskeletal networks potentiates γδ T cell-mediated cytotoxicity in lung cancer: R.R. Weng, et al.; Nat. Commun. 12, 2163 (2021)

5. Characterization and Cellular Internalization of Spherical Cellulose Nanocrystals (CNC) into Normal and Cancerous Fibroblasts: N.A.H. Shazali, et al.; Materials (Basel) 12, 3251 (2019), Application(s): C6 and NIH3T3 cell tracing

6. Time resolved 3D live-cell imaging on implants: A. Ingendoh-Tsakmakidis, et al.; PLoS One 13, e0205411 (2018)

7. Nerve guidance conduit with a hybrid structure of a PLGA microfibrousbundle wrapped in a micro/nanostructured membrane: S.W. Peng, et al.; Int. J. Nanomedicine 12, 421 (2017), Application(s):Tracking in vitro cells migration (immortalized neuron progenitor KT 98)

8. Thioreductase-containing epitopes inhibit the development of type 1 diabetes in the NOD mouse model: E. Malek Abrahimians, et al.; Front. Immunol. 7, 67 (2016), Application(s): Flow cytometry analysis using isolated mouse spleen B cells

9. Syngeneic murine ovarian cancer model reveals that ascites enriches for ovarian cancer stem-like cells expressing membrane GRP78: L. Mo, et al.; Mol. Cancer Ther. 14, 747 (2015) 

10. An in vitro blood-brain barrier model combining shear stress and endothelial cell/astrocyte co-culture: Y. Takeshita, et al.; J. Neurosci. Methods 232, 165 (2014), Application(s): Confocal microscopy using adult human astrocyte cells

11. Vascular endothelial growth factor-C modulates proliferation and chemoresistance in acute myeloid leukemic cells through an endothelin-1-dependent induction of cyclooxygenase-2: K.T. Hua, et al.; Biochim. Biophys. Acta 1843, 387 (2014)

12. Expanding the Ig superfamily code for laminar specificity in retina: expression and role of contactins: M. Yamagata, et al.; J. Neurosci. 32, 14402 (2012)

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ENZO热销产品——CYTO-ID® Autophagy Detection Kit 2.0自噬检测试剂盒2.0版

目前，研究人员们常通过靶点分析对癌症靶点进行验证，进而了解和控制其调控机制，以及在癌症特征中所起的作用。自噬（Autophagy）是一种应激诱导的保护机制，该机制在基础条件下并不活跃，当受到某些负面条件影响，如营养物质耗尽和化学或遭受环境压力时，真核细胞通过溶酶体介导的细胞内容物的大量降解来利用该机制。

自噬活动的增加在癌症、神经变性疾病、心血管疾病和糖尿病等疾病的病理学研究中的作用，目前已经得到广泛认可和普遍研究。如果机体的溶酶体功能受到抑制，阻止了自噬小泡的去除，那么就可以通过增加的自噬小泡积聚量来体现自噬通量的诱导效果。

Enzo的热销产品CYTO-ID® Autophagy Detection Kit 2.0（货号：ENZ-KIT175），使用了新型染料来检测自噬小泡和监控活细胞的自噬通量，选择性标记积累的自噬小泡。488 nm可激发的绿色染料已经过了功能优化，不染色溶酶体，在自噬前体、自噬体和自噬溶酶体里呈现出明亮的荧光。该试剂盒提供了一种无需细胞转染，可以在活细胞中监控细胞自噬的快速定量方法。该试剂盒还包括用于核染色的Hoechst 33342染料、自噬诱导剂（Rapamycin）和溶酶体抑制剂（Chloroquine）。

作用机制：

CYTO-ID® Autophagy Detection Kit 2.0所用探针是一种阳离子两亲性示踪剂（CAT）染料，它能以类似诱导磷脂药物的方式迅速进入到细胞中，并选择性标记特定的功能分子。

在Enzo升级版的CYTO-ID® Autophagy Detection Kit 2.0试剂盒中，采用了优化后的新型探针，不易在溶酶体中发生积聚的同时，还能够对与自噬途径相关的小泡进行特异性地标记。

产品特点：

● 更明亮，更耐光，特异性地染色自噬小泡；

● 操作便捷，无需转染；

● 反应迅速，孵育时间只需30分钟；

● 对自噬性溶酶体的染色效果微乎其微，可以忽略不计，大大降低了背景对染色效果呈现的干扰；

● 能够快速量化原生异质性细胞群中的自噬；

● 有助于高通量筛选自噬激活剂和抑制剂；

● 业界认可度高，产品的文献引用率高。

产品实例：

Figure 1. 基于流式细胞仪的Jurkat细胞的自噬分析图。Jurkat细胞不进行处理或分别用0.5µM雷帕霉素（RAP）、10µM氯喹（CLQ）或两者同时处理20小时。用CYTO-ID® Green Detection Reagent 2染色30分钟后，清洗细胞，用流式细胞仪进行分析。结果以直方图叠加的形式呈现，用RAP+CLQ共同处理的细胞荧光明显增强。

Figure 2. HeLa细胞在(A)完全培养基或(B)含有40 µM氯喹的饥饿培养基（EBSS）中培养4小时后，用CYTO-ID® Green Detection Reagent 2进行染色。在含有氯喹的EBSS中的饥饿细胞显示出非常明亮的绿色荧光信号和斑点状结构。

Figure 3. HepG2细胞自噬的微孔板分析。HepG2细胞在DMSO (control)、0.5 μM雷帕霉素(Rap)、10 μM氯喹(CLQ)或0.5 μM Rap+10 μM CLQ中培养20小时后，用CYTO-ID® Green Detection Reagent 2进行染色。细胞用Hoechst 33342染色后进行细胞数归一化，通过CYTO-ID® Green Detection Reagent 2检测出Rap+CLQ处理组的细胞自噬增加。

产品信息：

产品最新引用文献：

1. Amorfrutin B Protects Mouse Brain Neurons from Hypoxia/Ischemia by Inhibiting Apoptosis and Autophagy Processes Through Gene Methylation- and miRNA-Dependent Regulation: K. Przepiórska, et al.; Mol. Neurobiol. 60, 576 (2023), Abstract;

2. Brain injury accelerates the onset of a reversible agerelated microglial phenotype associated with inflammatory neurodegeneration: R.M. Ritzel, et al.; Sci. Adv. 9, eadd1101 (2023), Abstract;

3. CNS serotonin content mediating food deprivation-enhanced learning is regulated by hemolymph tryptophan concentration and autophagic flux in the pond snail: Y. Totani, et al.; Nutr. Neurosci. 26, 217 (2023), Abstract;

4. Effects of Sirolimus treatment on patients with β-Thalassemia: Lymphocyte immunophenotype and biological activity of memory CD4+ and CD8+ T cells: M. Zurlo, et al.; J. Cell. Mol. Med. 27, 353 (2023), Abstract;

5. Impaired Autophagy in Krabbe Disease: The Role of BCL2 and Beclin-1 Phosphorylation: N. Papini, et al.; Int. J. Mol. Sci. 23, 5984 (2023), Abstract;

6. Nanoparticles of folic acid-methyl-b-cyclodextrin (FA-MbCD)/adamantane-albumin exhibit enhanced antitumor activity compared with FA-MbCD alone: A. Sakai, et al.; FEBS Open Bio 13, 233 (2023), Abstract;

7. Novel hydroxamic acid derivative induces apoptosis and constrains autophagy in leukemic cells: M.A. Fischer, et al.; J. Adv. Res. (2023), Abstract;

8. Production and Characterization of K562 Cellular Clones Hyper-Expressing the Gene Encoding α-Globin: Preliminary Analysis of Biomarkers Associated with Autophagy: M. Zurlo, et al.; Genes 14, 556 (2023), Abstract;

9. Short peptide domains of the Wnt inhibitor sFRP4 target ovarian cancer stem cells by neutralizing the Wnt β-catenin pathway, disrupting the interaction between β-catenin and CD24 and suppressing autophagy: S.M. Sundaram, et al.; Life Sci. 16, 121384 (2023), Abstract;

10. Surface-Modified Inhaled Microparticle-Encapsulated Celastrol for Enhanced Efficacy in Malignant Pleural Mesothelioma: X. Wang, et al.; Int. J. Mol. Sci. 24, 5204 (2023), Abstract;

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