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感受态细胞E.coli DH5α Competent Cells酶试剂盒Takara Clontech

发表于2024年11月9日由上海金畔生物科技有限公司

上海金畔生物科技有限公司代理Takara酶试剂盒全线产品，欢迎访问官网了解更多产品信息和订购。

感受态细胞E.coli DH5α Competent Cells
品牌	Code No.	产品名称	包装量	价格（元）	说明书	数量
Takara	9057	E.coli DH5α Competent Cells	100 μl × 10	￥309

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■ 制品内容 E.coli DH5α Competent Cells 100 μl × 10 pUC19 plasmid ( 0.1 ng/μl) 10 μl SOC Medium* 1 ml × 10

*SOC Medium:       2%   Tryptone  0.5%   Yeast extract  10 mM   NaCl  2.5 mM   KCl   10 mM   MgSO4 10 mM   MgCl2  20 mM   Glucose

■ 制品说明

Takara在Hanahan's method基础上进行了改良，制备出E.coli DH5α Competent Cells。 E.coli DH5α Competent Cells在使用pUC系列质粒载体进行DNA转化时，利用β-半乳糖苷酶活性 (α-互补性)，通过蓝白斑方法可以很容易地鉴别重组体菌株。由于菌株无lac lq，故不需要IPTG。因此，当制作基因文库或进行亚克隆时，可以使用X-Gal筛选重组DNA或重组质粒。 X-Gal : 5-Bromo-4-Chloro-3-Indolyl-β-D-Galactoside

■ 细胞浓度

1 - 2×109 bacteria/ml

■ Genotype

E.coli DH5α : F-, φ 80dlacZ ΔM15, Δ(lacZYA -argF )U169, deoR , recA1 , endA1 , hsdR17 (rK-, mK+), phoA, supE44 , λ-, thi -1, gyrA96 , relA1

■ 保存

-80℃。 注意： -80℃或更低温度下保存。如果保存温度不能恒定，转化效率将会降低。请使用附带的pUC19 对照质粒来确认保存细胞的转化效率。不能液氮保存。

■ 质量控制

1. 转化效率

转入1 ng 的pUC19，涂于含有Amp+ 的选择培养基进行筛选。 转化效率 : >1 x 108 transformants/μg pUC19

2. β-半乳糖苷酶的α-互补性

当使用pUC19 plasmid进行转化时，含有100 μg/ml Ampicillin和60 μg/ml X-Gal的L-agar plate出现蓝色菌落。

■ 注意事项

1. 将感受态细胞从-80℃冷冻取出后请立即置于干冰/乙醇中。使用前保存于干冰/乙醇中。

2. 可使用1.5 ml microcentrifuge tubes代替14 ml 圆底 tubes (BD company Code: 352059 或 352057,等)，但效率可能会降低。

3. 当使用100 μl感受态细胞时，加入的高纯度DNA样品不要超过10 ng。否则转化效率会降低。

4. 当改变感受态细胞数量或tubes类型时，适当调整反应条件。例如，当使用1.5 ml microcentrifuge tubes时，42℃放置60秒而不是45秒。

5. L-broth 或φb-broth可替代SOC培养基。此时，转化效率可能会降低。

·L-broth : Ingredient per liter water     Tryptone 10 g     Yeast extract 5 g     NaCl 5 g       用1 N NaOH调整pH到7.5并高压灭菌。     ·φ b-broth: Ingredient per liter water     Tryptone 20 g     Yeast extract 5 g     MgSO4·7H2O 5 g       用1 N KOH调整pH到7.5并高压灭菌。

6. 当加入X-Gal时，按照以下操作进行：

·将 20 mg/ml X-Gal (溶解于二甲基甲酰胺) 按200-300 μl/100 ml的比例加入到 agar培养基中。

7. DH5α可用于M13mp载体的复制。但由于其不携带F因子，因而不能形成菌斑。

8. 不建议将解冻的感受态细胞再次冷冻保存。但是，如果再次冻结不可避免，将细胞置于干冰/乙醇中迅速冷冻，置于-80℃保存。但是，转化效率可能会降低至少一个数量级。

页面更新：2023-12-01 15:06:22

感受态细胞E.coli HST16CR Competent Cells酶试剂盒Takara Clontech

发表于2024年10月30日由上海金畔生物科技有限公司

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感受态细胞E.coli HST16CR Competent Cells
品牌	Code No.	产品名称	包装量	价格（元）	说明书	数量
Takara	9131	E.coli HST16CR Competent Cells	100 μl×10	￥619

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■ 制品内容 E.coli HST16CR Competent Cells 100 μl × 10 pUC19 plasmid (0.1 ng/μl) 10 μl SOC media* 1 ml × 10

*SOC Media:     2%   Tryptone  0.5%   Yeast extract  10 mM   NaCl  2.5 mM   KCl   10 mM   MgSO4 10 mM   MgCl2  20 mM   Glucose

■ 制品说明

感受态细胞是具有摄取外源DNA能力的受体菌，可摄取基因重组质粒等，是转化时的重要工具。Takara在Hanahan’s method基础上进行了改良，制备出的E. coli HST16CR Competent Cells。 E. coli HST16CR Competent Cells是以E. coli HST08 Premium Competent Cells（Code No. 9128）为基础，获得的ColE1 ori的复制相关基因 pcnB缺失的具有高转化效率的菌株。由于pcnB基因的缺失，能够降低pUC系列载体的拷贝数，可有效用于难以克隆的含跨膜结构域蛋白质等、克隆基因对大肠杆菌生长有抑制作用的高拷贝载体克隆。 因为是以E. coli HST08 Premium Competent Cells为基础，缺失外源甲基化DNA的基因群(mrr –mcrBC–hsdRMS )和mcrA，因此可用于甲基化DNA的克隆、基因组文库构建和常规亚克隆。另外，使用pUC系列载体转化时，可通过β-半乳糖苷酶的α-互补性，在培养基中添加X-gal进行蓝白筛选，以筛选重组体。 X-Gal：5-Bromo-4-Chloro-3-Indolyl-β-D-Galactoside

■ 细胞浓度

1-2×109 bacteria/ml

■ Genotype

E. coli HST16 CR: ： F-, endA1 , supE44 , thi –1, recA 1, relA 1, gyrA 96, phoA ,Φ80d lacZ ΔM15,Δ（ lacZYA – argF ）U169 , Δ ( mrr – hsdRMS – mcrBC ), ΔmcrA ,ΔpcnB, λ–

■ 保存

-80℃。 注意： 如果不在-80℃下保存，转化效率将会降低。此时，在使用前，请使用附带的pUC19 对照质粒来确认细胞的转化效率。不能液氮保存。

■ 质量标准

[1] 转化效率 转化质粒载体时，转入1 ng 的pUC19 plasmid，涂于Amp+ 的L-plate进行筛选。 转化效率 : >1 x 108 colonies/μg pUC19 plasmid [2] β-半乳糖苷酶的α-互补性 转化pUC19 plasmid时，确认含100 μg/ml ampicilin 和 60 μg/ml X-Gal的L-agar plate上出现蓝色菌落。

■ 注意事项

1. 取出所需管数的感受态细胞后，搬运时请置于干冰/乙醇中。

2. 可使用1.5 ml microcentrifuge tubes代替14 ml 圆底 tubes (BD Code: 352059 或 352057，等)，但效率可能会降低。

3. 当使用100 μl感受态细胞时，加入不超过10 ng的高纯度质粒DNA。增加DNA量转化效率会降低。

4. 当改变感受态细胞使用体积或tube类型时，需要研讨适当的反应条件。例如，当使用1.5 ml microcentrifuge tubes时，请42℃加热60秒。

5. 可以使用L-broth 或φb-broth替代SOC培养基。此时，转化效率可能会降低。

·L-broth：10 g Tryptone, 5 g Yeast extract, 5 g NaCl，用1 M NaOH调整pH到7.5，加水使终体积为1 L，高压灭菌。

·φ b-broth：5 g Yeast extract, 20 g Tryptone, 5 g MgSO4·7H2O，用1 M KOH调整pH到7.5，加水使终体积为1 L，高压灭菌。

·L-plate: 10 g Tryptone, 5 g Yeast extract, 5 g NaCl，用1 M NaOH调整pH到7.5，添加agar到1.5%，加水使终体积为1 L，高压灭菌。

6. 当加入X-Gal时，按照以下操作进行： 将 20 mg/ml X-Gal (溶解于二甲基甲酰胺) 按200-300 μl/100 ml 的比例加入到agar media中。

7. 不建议将解冻的感受态细胞再次冷冻保存。但是，如果再次冻结不可避免，将细胞置于干冰/乙醇中迅速冷冻，置于-80℃保存。但是，转化效率可能会降低至少一个数量级。

页面更新：2024-01-31 15:28:56

E.coli蛋白质表达感受态细胞TaKaRa Competent Cells BL21酶试剂盒Takara Clontech

发表于2024年9月30日由上海金畔生物科技有限公司

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E.coli蛋白质表达感受态细胞TaKaRa Competent Cells BL21
品牌	Code No.	产品名称	包装量	价格（元）	说明书	数量
Takara	9126	TaKaRa Competent Cell BL21	100 μl x 10	￥357

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■ 制品内容

TaKaRa Competent Cells BL21 10 × 100 μl pUC19 DNA (0.1 ng/μl) 10 μl SOC Medium* 10 × 1 ml

*SOC Medium:          2%   Tryptone  0.5%   Yeast extract  10 mM   NaCl  2.5 mM   KCl  10 mM   MgSO4  10 mM   MgCl2  20 mM   Glucose

■ 制品说明

E.coli BL21来源于B株，为lon蛋白水解酶、ompT外膜蛋白水解酶缺陷型，因此表达的外源蛋白质在该体系中具有更高的稳定性。本制品有利于外源蛋白质的稳定表达。 本制品可用于pCold I-IV DNA 和pCold TF DNA的蛋白质表达，但不适合于启动子为T7的蛋白质表达体系，如pET系列，因为BL21宿主不表达T7 RNA聚合酶。另外，不建议使用此菌株构建或制备质粒，因为它不是recA基因缺失型菌株。 注意：本制品不可用于电击法转化。   ■ 保存 -80℃。 注意：如果不是-80℃保存，转化效率将会降低。可使用附带的pUC19 DNA确认保存细胞的转化效率。不能液氮保存。   ■ 质量控制 转入1 ng 的pUC19 DNA，涂于含有Amp+的选择培养基进行筛选。 转化效率 : ≥1×106 colonies /μg pUC19 DNA   ■ Genotype E.coli BL21: F–, ompT, hsdSB (rB–mB–), gal, dcm   ■ 注意事项 1. 将感受态细胞从-80℃冷冻取出后请立即置于干冰/乙醇中。使用前保存于干冰/乙醇中。 2. 当使用100 μl感受态细胞时，加入不超过10 ng的高纯度质粒DNA。否则转化效率会降低。 3. 当改变感受态细胞数量或tubes类型时，适当调整反应条件。 4. 使用TE buffer溶解纯化的质粒DNA。DNA溶液如果盐浓度高，可能会降低转化效率。 5. L-broth 或φb-broth可替代SOC培养基。此时，转化效率可能会降低。   ·L-broth : Ingredient per liter water     Tryptone 10 g     Yeast extract 5 g     NaCl 5 g     用1 N NaOH调整pH到7.5并高压灭菌。   ·φb-broth: Ingredient per liter water     Tryptone 20 g     Yeast extract 5 g     MgSO4·7H2O 5 g       用1 N KOH调整pH到7.5并高压灭菌。 6. 稀释时，使用SOC培养基。 7. 不建议将解冻的感受态细胞再次冷冻保存。但是，如果再次冻结不可避免，将细胞置于干冰/乙醇中迅速冷冻，置于-80℃保存。但是，转化效率可能会降低至少一个数量级。

页面更新：2023-12-21 14:55:12

感受态细胞E.coli CJ236 Competent Cells酶试剂盒Takara Clontech

发表于2024年9月22日由上海金畔生物科技有限公司

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感受态细胞E.coli CJ236 Competent Cells
品牌	Code No.	产品名称	包装量	价格（元）	说明书	数量
Takara	9053	E.coli CJ236 Competent Cells	100 μl × 10	￥517

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■ 制品内容 E.coli CJ236 Competent Cells 100 μl × 10 pUC119 plasmid ( 0.1 ng/μl) 10 μl × 1 SOC Medium* 1 ml × 10

*SOC Medium:      2%   Tryptone  0.5%   Yeast extract  10 mM   NaCl  2.5 mM   KCl  10 mM   MgSO4 10 mM   MgCl2  20 mM   Glucose

■ 制品说明

Takara公司在Hanahan’s method基础上进行了改良，制备出E.coli CJ236 Competent Cells，当1 ng pUC119转化100 μl 细胞时，转化效率可达1×107 cfu/μg。 E. coli CJ236 Competent Cells适用于制备含有dU的ssDNA。通过CJ236转化后富集的ssDNA，可用于Kunkel法进行定点突变。

■ 细胞浓度

1 – 2×109 Bacteria/ml

■ Genotype

E. coli CJ236 : dut1, ung1, thi-1, recA1 / pCJ105 (F’ camr)

■ 保存

-80℃。 注意：如果不在-80℃下保存，转化效率将会降低。此时，在使用前，请使用附带的pUC119对照质粒来验证细胞的转化效率。不能液氮保存。

■ 转化效率

转入1 ng 的pUC119，涂于含有Amp+ 的选择培养基进行筛选。 转化效率 : >1 x 107 cfu/μg pUC119

■ 注意事项

1. 将感受态细胞从-80℃冷冻取出后请立即置于干冰/乙醇中。使用前保存于干冰/乙醇中。

2. 可使用microcentrifuge tubes代替Falcon tubes (CORNING #352059或352057)，但效率可能会降低。

3. 当使用100 μl感受态细胞时，加入不超过10 ng的高纯度DNA样品。否则转化效率会降低。

4. 当改变感受态细胞数量或tubes类型时，适当调整反应条件。例如，当使用microcentrifuge tubes时，42℃放置60秒。

5. L-broth 或φb-broth可替代SOC培养基。此时，转化效率可能会降低。

·L-broth : Ingredient per liter water     Tryptone 10 g     Yeast extract 5 g     NaCl 5 g       用1 N NaOH调整pH到7.5并高压灭菌。    ·φ b-broth: Ingredient per liter water     Tryptone 20 g     Yeast extract 5 g     MgSO4·7H2O 5 g       用1 N KOH调整pH到7.5并高压灭菌。

6. 稀释时使用SOC培养基。

7. 建议在选择培养基中加入 Chloramphenicol (30 μg/ml) 以保证F’ 质粒稳定。

8. YT soft agar: Ingredient per 100 ml water     Tryptone 0.8 g     Yeast extract 0.5 g     NaCl 0.5 g       用1 N NaOH调整pH到7.6，加入agar至浓度为0.6%，并高压灭菌。 9. YT-plate: Ingredient per liter water     Tryptone 8 g     Yeast extract 5 g     NaCl 5 g       用1 N NaOH调整pH到7.5，加入agar至浓度为1.5%，并高压灭菌。

10. 制备感受态细胞。

11. 不建议将解冻的感受态细胞再次冷冻保存。但是，如果再次冻结不可避免，将细胞置于干冰/乙醇中迅速冷冻，置于-80℃保存。但是，转化效率可能会降低至少一个数量级。

页面更新：2024-01-31 15:19:49

E.coli蛋白质表达感受态细胞TaKaRa Competent Cells BL21酶试剂盒Takara Clontech

发表于2024年9月2日由上海金畔生物科技有限公司

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E.coli蛋白质表达感受态细胞TaKaRa Competent Cells BL21
品牌	Code No.	产品名称	包装量	价格（元）	说明书	数量
Takara	9126	TaKaRa Competent Cell BL21	100 μl x 10	￥357

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■ 制品内容

TaKaRa Competent Cells BL21 10 × 100 μl pUC19 DNA (0.1 ng/μl) 10 μl SOC Medium* 10 × 1 ml

*SOC Medium:          2%   Tryptone  0.5%   Yeast extract  10 mM   NaCl  2.5 mM   KCl  10 mM   MgSO4  10 mM   MgCl2  20 mM   Glucose

■ 制品说明

E.coli BL21来源于B株，为lon蛋白水解酶、ompT外膜蛋白水解酶缺陷型，因此表达的外源蛋白质在该体系中具有更高的稳定性。本制品有利于外源蛋白质的稳定表达。 本制品可用于pCold I-IV DNA 和pCold TF DNA的蛋白质表达，但不适合于启动子为T7的蛋白质表达体系，如pET系列，因为BL21宿主不表达T7 RNA聚合酶。另外，不建议使用此菌株构建或制备质粒，因为它不是recA基因缺失型菌株。 注意：本制品不可用于电击法转化。   ■ 保存 -80℃。 注意：如果不是-80℃保存，转化效率将会降低。可使用附带的pUC19 DNA确认保存细胞的转化效率。不能液氮保存。   ■ 质量控制 转入1 ng 的pUC19 DNA，涂于含有Amp+的选择培养基进行筛选。 转化效率 : ≥1×106 colonies /μg pUC19 DNA   ■ Genotype E.coli BL21: F–, ompT, hsdSB (rB–mB–), gal, dcm   ■ 注意事项 1. 将感受态细胞从-80℃冷冻取出后请立即置于干冰/乙醇中。使用前保存于干冰/乙醇中。 2. 当使用100 μl感受态细胞时，加入不超过10 ng的高纯度质粒DNA。否则转化效率会降低。 3. 当改变感受态细胞数量或tubes类型时，适当调整反应条件。 4. 使用TE buffer溶解纯化的质粒DNA。DNA溶液如果盐浓度高，可能会降低转化效率。 5. L-broth 或φb-broth可替代SOC培养基。此时，转化效率可能会降低。   ·L-broth : Ingredient per liter water     Tryptone 10 g     Yeast extract 5 g     NaCl 5 g     用1 N NaOH调整pH到7.5并高压灭菌。   ·φb-broth: Ingredient per liter water     Tryptone 20 g     Yeast extract 5 g     MgSO4·7H2O 5 g       用1 N KOH调整pH到7.5并高压灭菌。 6. 稀释时，使用SOC培养基。 7. 不建议将解冻的感受态细胞再次冷冻保存。但是，如果再次冻结不可避免，将细胞置于干冰/乙醇中迅速冷冻，置于-80℃保存。但是，转化效率可能会降低至少一个数量级。

页面更新：2023-12-21 14:55:12

大肠杆菌HB101感受态细胞E.coli HB101 Competent Cells酶试剂盒Takara Clontech

发表于2024年8月4日由上海金畔生物科技有限公司

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大肠杆菌HB101感受态细胞E.coli HB101 Competent Cells
品牌	Code No.	产品名称	包装量	价格（元）	说明书	数量
Takara	9051	E.coli HB101 Competent Cells	100 μl × 10	￥425

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■ 制品内容 E.coli HB101 Competent Cells 100 μl × 10 pBR322 plasmid ( 0.1 ng/μl) 10 μl SOC Medium* 1 ml × 10

*SOC Medium:         2%   Tryptone  0.5%   Yeast extract  10 mM   NaCl  2.5 mM   KCl   10 mM   MgSO4   10 mM   MgCl2  20 mM   Glucose

■ 制品说明

在Hanahan’s method基础上进行了改良，制备出Competent Cells，当1 ng pBR322转化100 μl 细胞时，转化效率>1×108 cfu/μg。 E.coli HB101 Competent Cells 可用来制作DNA文库或重组质粒的亚克隆。

■ 细胞浓度

1-2×109 bacteria/ml

■ Genotype

E. coli HB101: F-, hsd S 20(rB-, mB-), recA13, ara-14, proA2, lacY1, galK2, rpsL20 (str), xyl-5, mtl-1,supE44, leuB6, thi-1.

■ 保存

-80℃。 注意： 如果不在-80℃下保存，转化效率将会降低。此时，在使用前，请使用附带的pBR332对照质粒来确认细胞的转化效率。不能液氮保存。

■ 转化效率

转入1 ng 的pBR322，涂于含有Amp+ 的选择培养基进行筛选。 转化效率 : >1 x 108 cfu/μg pBR322

■ 注意事项

1. 将感受态细胞从-80℃冷冻取出后请立即置于干冰/乙醇中。使用前保存于干冰/乙醇中。

2. 对于转化，可以使用1.5 ml微量离心管代替14 ml圆底管（BD Code：352059或352057等），    但转化效率可能会降低。

3. 当使用100 μl感受态细胞时，加入不超过10 ng的高纯度DNA样品。否则转化效率会降低。

4. 当改变实验规模时，适当改变反应条件。

5. L-broth 或φb-broth可替代SOC培养基。此时，转化效率可能会降低。

·L-broth : Ingredient per liter water     Tryptone 10 g     Yyeast extract 5 g     NaCl 5 g       用1 N NaOH调整pH到7.5并高压灭菌。     ·φ b-broth : Ingredient per liter water     Ttryptone 20 g     Yeast extract 5 g     MgSO4·7H2O 5 g       用1 N KOH调整pH到7.5并高压灭菌。

6. 稀释转化混合物时，使用“使用方法”中步骤7中添加的培养基。

7. 一旦感受态细胞解冻，不建议重新冷冻储存。 如果不可避免，应用干冰/乙醇快速冷冻细胞，    并在-80℃下迅速保存。但是，转化效率将会降低 。

页面更新：2024-01-25 16:27:59

感受态细胞Takara Stable Competent Cells酶试剂盒Takara Clontech

发表于2024年3月14日由上海金畔生物科技有限公司

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感受态细胞Takara Stable Competent Cells
品牌	Code No.	产品名称	包装量	价格（元）	说明书	数量
Takara	9132	Takara Stable Competent Cells	100μl × 10	￥1,700

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■ 制品内容 Takara Stable Competent Cells 100 μl × 10 pUC19 DNA (0.1 ng/μl) 10 μl SOC media* 1 ml × 10

*SOC Media:     2%   Tryptone  0.5%   Yeast extract  10 mM   NaCl  2.5 mM   KCl   10 mM   MgSO4 10 mM   MgCl2  20 mM   Glucose

■ 制品说明

Takara Stable Competent Cells通过破坏同源重组相关的遗传基因，来提高DNA的稳定性。因此，它适用于克隆不稳定的DNA，包括poly(A)序列和重复序列等。此外，由于本产品缺失T1噬菌体感染所需的fhuA遗传基因，因此对该噬菌体具有抗性。 推荐使用In-Fusion Snap Assembly Master Mix（Code No. 638943/638944/638947～638949）进行克隆。使用pUC类载体时，可利用β-半乳糖苷酶的α-互补性，通过X-Gal＊分解，对菌落进行蓝白斑筛选。 ＊X-Gal：5-Bromo-4-Chloro-3-Indolyl-β-D-Galactoside

■ 细胞浓度

1-2×109 bacteria/ml

■ Genotype

F-,endA1,supE44,thi-1,recA1,relA1,gyrA96,p>hoA,ΔsbcCD,Φ80 dlacZΔM15,ΔfhuA,Δ(lacZYA-argF)U169,Δ(mrr-hsdRMS- mcrBC) ,ΔmcrA,λ-

■ 保存

-80℃。 注意：如果未在-80℃下保存，转化效率将会降低。请使用附带的 pUC19对照质粒来确认保存细胞的转化效率。不能液氮保存。

■ 注意事项

· 请按需取用感受态细胞。转移时，请放入干冰/乙醇中。 · 可使用1.5 ml microcentrifuge tubes代替14 ml圆底tubes (BD Code 352059或352057等)（详见使用方法步骤2），但效率可能会降低。 · 使用100μl的感受态细胞时，加入的高纯度DNA样品不要超过 10 ng。否则转化效率会降低。当改变感受态细胞数量或tube类型时，适当调整反应条件。例如，当使用1.5 ml microcentrifuge tubes时，42℃温育60秒（详见使用方法步骤5.）。 · 培养时，请根据所用载体，将抗生素添加至培养基中。 · 当加入X-Gal时，按照以下操作进行： 将20 mg/ml X-Gal（溶解于二甲基甲酰胺)按200-300 μl/100 ml的比例加入到琼脂培养基中。 · 不建议将解冻的感受态细胞再次冷冻保存。

页面更新：2024-01-31 15:19:42

感受态细胞E.coli JM109 Competent Cells酶试剂盒Takara Clontech

发表于2024年3月13日由上海金畔生物科技有限公司

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感受态细胞E.coli JM109 Competent Cells
品牌	Code No.	产品名称	包装量	价格（元）	说明书	数量
Takara	9052	E.coli JM109 Competent Cells	100 μl × 10	￥309

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■ 制品内容 E.coli JM109 Competent Cells 100 μl × 10 pBR322 plasmid ( 0.1 ng/μl) 10 μl SOC Medium* 1 ml × 10

*SOC Medium:     2%   Tryptone  0.5%   Yeast extract  10 mM   NaCl  2.5 mM   KCl   10 mM   MgSO4   10 mM   MgCl2  20 mM   Glucose

■ 制品说明

Takara在Hanahan's method基础上进行了改良，制备出E.coli JM109 Competent Cells。 由于E. coli JM109 Competent Cells含有F' 质粒，可以作为M13噬菌体载体的宿主细胞，也可用于制作DNA文库或进行亚克隆。当转化pUC载体或转染M13噬菌体载体DNA时，重组体可以利用感受态细胞的β-半乳糖苷酶的α-互补性，通过添加X-Gal和IPTG很容易地筛选出来。 X-Gal : 5-Bromo-4-Chloro-3-Indolyl-β-D-Galactoside IPTG : Isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside

■ 细胞浓度

1-2×109 bacteria/ml

■ Genotype

E. coli JM109： recA1 , endA1 , gyrA96 , thi-1 , hsdR17 (rk-mk+), e14-(mcrA- ) supE44 , relA1 , Δ(lac-proAB )/F'[traD36 , proAB+, lacIq, lacZΔM15]

■ 保存

-80℃。 注意： 如果不在-80℃下保存，转化效率将会降低。此时，在使用前，请使用附带的pBR332 对照质粒来确认细胞的转化效率。不能液氮保存。

■ 转化效率

转入1 ng 的pBR322，涂于含有Amp+ 的选择培养基进行筛选。 转化效率 : >1 x 108 transformants/μg pBR322

■ 注意事项

1. 将感受态细胞从-80℃冷冻取出后请立即置于干冰/乙醇中。使用前保存于干冰/乙醇中。

2. 可使用1.5 ml的microcentrifuge tubes代替14 ml的圆底tubes (BD company Code: 352059 或 352057等)，但效率可能会降低。

3. 当使用100 μl感受态细胞时，加入的高纯度DNA样品不超过10 ng。否则转化效率会降低。

4. 当改变感受态细胞数量或tubes类型时，适当调整反应条件。例如，当使用1.5 ml microcentrifuge tubes时，42℃放置60秒，而不是45秒。

5. L-broth 或φb-broth可替代SOC培养基。此时，转化效率可能会降低。

·L-broth : Ingredient per liter water     Tryptone 10 g     Yeast extract 5 g     NaCl 5 g       用1 N NaOH调整pH7.5并高压灭菌。     ·φ b-broth: Ingredient per liter water     Tryptone 20 g     Yeast extract 5 g     MgSO4·7H2O 5 g       用1 N KOH调整pH7.5并高压灭菌。

6. YT soft agar: Ingredient per 100 ml water     Tryptone 0.8 g     Yeast extract 0.5 g     NaCl 0.5 g       用1 N NaOH调整pH7.6，添加agar至浓度为0.6%，并高压灭菌。 7. 制备宿主细胞。 8. L-plate: Ingredient per liter water     Tryptone 10 g     Yeast extract 5 g     NaCl 5 g       用1 N NaOH调整pH到7.5，加入agar至浓度为1.5%，并高压灭菌。

9. 当加入X-Gal或IPTG时，按照以下方法操作：

·将100 mM IPTG按100-300 μl/100 ml的比例加入到agar medium 中，若使用soft agar，比例为 25 μl/3 ml。

·将20 mg /ml X-Gal（溶解于二甲基甲酰胺）按200-300 μl/100 ml的比例加入到agar medium中，若使用soft agar，比例为50 μl/3 ml。

10. 不建议将解冻的感受态细胞再次冷冻保存。但是，如果再次冻结不可避免，将细胞置于干冰/乙醇中快速冷冻，置于-80℃保存。但是，转化效率可能会降低至少一个数量级。

页面更新：2024-01-25 14:34:33

感受态细胞制备试剂盒Competent Cell Preparation Kit酶试剂盒Takara Clontech

发表于2024年3月13日由上海金畔生物科技有限公司

上海金畔生物科技有限公司代理Takara酶试剂盒全线产品，欢迎访问官网了解更多产品信息和订购。

感受态细胞制备试剂盒Competent Cell Preparation Kit
品牌	Code No.	产品名称	包装量	价格（元）	说明书	数量
Takara	9139	Competent Cell Preparation Kit	200 Rxns	￥196

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■ 制品内容 (200 次量)

Solution A 20 ml Solution B 20 ml

■ 制品说明

大肠杆菌经过处理后可以摄取外源DNA (Plasmid DNA、Phage DNA等)，处于这种状态的细胞称为感受态细胞 (Competent Cell)。在基因工程实验中，经常要使用各种感受态细胞进行DNA的转化操作。 实验使用的感受态细胞的来源大体可以分为两种：一种是购买商品化的感受态细胞，但商品化感受态细胞成本高、运输及保存有一定困难 (超低温)；另一种是自己制备感受态细胞，实验人员自己制作感受态细胞时，往往受到各种试剂及实验条件等限制，制备的感受态细胞效率低，达不到实验要求。 Competent Cell Preparation Kit是一种方便、高效、快速制备感受态细胞的试剂盒。使用本试剂盒制备的感受态细胞可以满足大多数实验的需要，并且适用于大多数常用的大肠杆菌，例如：E.coli DH5α、JM109、CJ236、HB101、MV1184、BMH71–18mutS等，转化效率均可以达到1×106 cfu/μg pUC19以上 (转化效率根据大肠杆菌细胞系及转化用DNA不同稍有差异)。使用本试剂盒制备的感受态细胞可以在-80℃保存一年。   ■ 保存 4℃。

■ 注意事项

1. 制作感受态细胞时应使用专用的玻璃器皿或塑料容器。洗刷这些玻璃器皿或塑料容器时应尽量洗净。由于微量的洗涤剂或污染物都可能降低感受态细胞的转化效率，因此在洗刷完用于制作感受态细胞的专用玻璃器皿或塑料容器后，建议用去离子水浸泡一晚，然后再充分洗净。 2. 制作感受态细胞时使用的菌种，不应使用4℃或常温保存的传代细菌。应使用-70℃保存的菌种，在LB/抗生素平板培养基上分级划线培养后，挑取单菌落。使用这种菌种制作的感受态细胞，能提高转化效率。 3. 培养感受态细胞制备用菌体时，OD600值的测定应随时进行，以使OD600值控制在0.35～0.5之间。如果OD600值超出此范围，可能降低感受态细胞的转化效率。 4. 用于感受态细胞制备的菌体培养停止后要立即处理，不要将培养液过长时间室温放置，在冰中放置时也不要时间过长。 5. 感受态细胞的制备操作过程中，离心后弃上清时要尽量弃尽，否则会降低感受态细胞的转化效率。 6. 使用Solution A、Solution B悬浮沉淀时要用手指轻轻弹动Microtube管壁，禁止剧烈振荡操作。 7. 为了有效确认感受态细胞的转化效率，建议制作一批高纯度的质粒DNA分装低温 (-20℃) 保存，用作阳性对照，以确认每批制作的感受态细胞的转化效率。

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