Annexin V-PE/7-AAD细胞凋亡检测试剂盒

Annexin V-PE/7-AAD细胞凋亡检测试剂盒货号: JP50007

产品描述
描述

Annexin V (or Annexin A5) is a member of the annexin family of intracellular proteins that binds to phosphatidylserine (PS) in a calcium-dependent manner. PS is normally only found on the intracellular leaflet of the plasma membrane in healthy cells, but during early apoptosis, membrane asymmetry is lost and PS translocates to the external leaflet. Fluorochrome-labeled Annexin V can then be used to specifically target and identify apoptotic cells. Annexin V Binding Buffer is recommended for use with Annexin V staining.

Products List:

  25T 100T
Annexin V-PE 150ul 500ul
7-AAD 300ul 1ml
5×Binding buffer 5ml 15ml
Apoptosis Positive Control Solution 5ml 5ml
应用
Each lot of this reagent is quality control tested by immunofluorescent staining with flow cytometric analysis (The amount of the reagent is suggested to be used 5 µl/10^5 cells). Since applications vary, the appropriate dilutions must be determined for individual use.
使用方法
Suggested Staining Protocol:
A.Parameters regulation
1. Harvest cell(1×106-3×106cells), then sepatate the cells in two parts. Wash cells with cold PBS, then centrifuge the cells and disgard the supernatant.
2. Suspend one part of cells in 200μL 1× binding buffer, store at 4℃ for use.
3. Suspend the other part of cells in 500μL Apoptosis Positive Control Solution, and incubate for 10 minutes in room temperature. Wash cells with more than 3.0 mL cold PBS, blot the supernatant, then suspend the cells in 200μL 1× binding buffer.
4. Mix the two parts cells together, then separate the cells in three tubes, and add 100 μL of cells in each tube.
5. The first tube is Blank Control, the second one adds 5μL of Annexin V-PE, and the third one adds 5 μL 7-AAD solution.
6. Gently vortex each tube and incubate for 5 minutes in room temperature, protected from light.
7. Before analyzing by flow cytometry, using the blank control and single dye sample to regulate voltage and compensation.
B.Sample detection
1. Dilute 6 mL 5× binding buffer with 24 mL distilled water for 10 tests.
2. Harvest cell(about 1×106cells per test)then wash with cold PBS.
3. Suspend cells in 1 mL 1× Binding Buffer, 300×g centrifugation for 10 minutes, then remove the Binding Buffer from the cell pellet.
4. Resuspend cells in 1 mL 1×Binding Buffer , adjust cell concentration to 1×106cells/mL.
5. Add 100 μL of cells (1×105cells) to each labeled tube.
6. Add 5 μL of Annexin V-PE to appropriate tubes.
7. Gently vortex each tube and incubate for 10 minutes in room temperature, protected from light.
8. Add 5 μL 7-AAD solution incubation for 5min in room temperature, protected from light.
9. Add PBS to 500μL and vortex gently.
10. Analyze by flow cytometry in 1 hour.
基本信息
别名
Annexin V-PE/7-AAD Apoptosis Analysis Kit
储存/保存方法
Keep as concentrated solution. Store at 4°C and protected from prolonged exposure to light. Do not freeze.The validity period is 6 months.

Annexin V-APC 偶联物 货号: A6080S/A6080L 规格: 0.1 mL/1 mL

Annexin V-APC 偶联物

产品货号: A6080S/A6080L

产品规格: 0.1 mL/1 mL

目录价(元):389/2947

推荐仪器:流式细胞仪

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产品概述:

储存条件
4℃避光冷藏,请勿冻存。有效期见外包装。

光谱特性
Annexin V-APC:Ex/Em = 650/660 nm

产品介绍
细胞凋亡早期改变发生在细胞膜表面,这些细胞膜表面的改变之一是磷脂酰丝氨酸(PS)从细胞膜内转移到细胞膜外,使 PS 暴露在细胞膜外表面。Annexin V具有易于结合到磷脂类如 PS 的特性,对 PS 有高度的亲和性。因此,该蛋白可作为敏感的探针检测暴露在细胞膜表面的PS。
Annexin V-APC可以与7-AAD/PI等联合使用,来检测细胞凋亡情况。7-AAD/PI可被排除在活细胞和早期凋亡细胞之外,而晚期凋亡细胞和坏死细胞可以同时被Annexin V-APC和7-AAD结合染色呈现双阳性,从而来区分活细胞、早凋细胞与晚凋细胞。

注意事项
1. 荧光染料均存在淬灭问题,保存和使用过程中请尽量注意避光,以减缓荧光淬灭。
2. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
说明书:

Annexin V-APC 偶联物 货号:               A6080S/A6080L  规格:               0.1 mL/1 mL UE-A6080S/A6080L    
MSDS:

MSDS A6080 Annexin V-APC

YF®488-Annexin V/RedNucleus Ⅱ 细胞凋亡试剂盒 货号: Y6102S/Y6102M/Y6102L 规格: 10T/50T/100T

YF®488-Annexin V/RedNucleus Ⅱ 细胞凋亡试剂盒

产品货号: Y6102S/Y6102M/Y6102L

产品规格: 10T/50T/100T

目录价(元):264/995/1474

推荐仪器:流式细胞仪(主推)、荧光显微镜

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产品概述:

产品内容

组分 Y6102S (10T) Y6102M(50T) Y6102L (100T)
A. 1 × Annexin V 结合缓冲液 10 mL 50 mL 50 mL×2
B. YF®488-Annexin V 50 μL 250 μL 500 μL
C. RedNucleus II 100 μL 500 μL 1 mL


储存条件
4℃ 避光冷藏,请勿冻存。有效期见外包装。

光谱特性
YF®488-Annexin V:Abs/Em=490/515 nm
RedNucleus II:Ex/Em=635/695 nm

产品介绍
YF®488-Annexin V 和 RedNucleus II 凋亡试剂盒提供了一种快速简便的方法,通过标记早期凋亡细胞(绿色)和晚期凋亡细胞(红色),用于检测细胞凋亡水平。产品可以使用流式细胞仪或其它荧光检测设备进行检测。
YF®488-Annexin V 可以标记早期凋亡细胞。Annexin V 选择性结合磷酯酰丝氨酸(phosphatidylserine,简称 PS)。在细胞发生早期凋亡时,PS 会外翻到细胞膜外侧。用绿色荧光探针 YF®488 标记的 Annexin V,即 YF®488-Annexin V,可以结合外翻的磷酯酰丝氨酸,从而检测细胞凋亡的重要特征。YF®488 染料与 FITC 相比,荧光亮度更高,且不受环境中 pH 的影响,光稳定性好。
RedNucleus II 是一种非渗透性的远红光 DNA 结合染料,不能透过活细胞和早期凋亡细胞完整的细胞膜,但是可以快速染色晚凋和死亡细胞中的细胞核 /dsDNA 。与 YF®488-Annexin V 联用时,RedNucleus II 被排除在活细胞和 早期凋亡细胞外,而晚期凋亡细胞则同时被 YF®488-Annexin V 和 RedNucleus II 结合染色呈现双阳性。
YF®488 与 RedNucleus II 之间光谱无交叉,对于无自发荧光、自带 RFP 或阿霉素诱导凋亡的细胞,都无需补偿调节。

注意事项
1. 荧光染料均存在淬灭问题,保存和使用过程中请尽量注 意避光,以减缓荧光淬灭。
2. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
说明书:

YF®488-Annexin V/RedNucleus Ⅱ 细胞凋亡试剂盒 货号:               Y6102S/Y6102M/Y6102L  规格:               10T/50T/100T UE-Y6102S/Y6102M/Y6102L    
MSDS:

MSDS Y6102 YF®488-Annexin V and RedNucleus Ⅱ Apoptosis Kit
常见问题解答:

为何染色结果显示细胞凋亡率过高?

1. 凋亡时间处理过长,使细胞全部死亡。建议重新摸索细胞凋亡条件,使细胞处于不同的凋亡状态。
2. 对于贴壁细胞,胰蛋白酶消化时间过长或机械刮擦细胞会暂时破坏质膜,使Annexin V能够与细胞膜胞内面上的磷脂酰丝氨酸结合,导致假阳性染色。建议在胰蛋白酶消化或机械刮擦细胞后,让细胞在最佳细胞培养条件和培养基中培养约30分钟,以恢复其膜完整性。

实验结果使用什么仪器观察?
实验结果可以通过流式细胞仪和荧光显微镜进行观察,但更推荐使用流式细胞仪。因为正常的细胞和凋亡的细胞膜上都有磷脂酰丝氨酸(PS),只是凋亡细胞膜外更多,可以结合更多的Annexin V,流式细胞仪更灵敏,可以区分出微小差异,将正常细胞与凋亡细胞分成不同的两群,但如果用荧光显微镜,可能观察不到这一差别,尤其是贴壁细胞。若要在成像测定中检测细胞凋亡,推荐使用SuperView™ 488 Caspase-3 Assay Kit for Live Cells。

流式细胞仪检测细胞凋亡,结果图中的各个象限代表什么状态的细胞?
左上角:Annexin V-/PI+,机械损伤细胞;右上角: AnnexinV+/PI+,晚期凋亡细胞或坏死;右下角:AnnexinV+/PI-,早期凋亡细胞;左下角:AnnexinV-/PI-,正常细胞。

这款试剂盒可同时检测出凋亡率和细胞周期分布吗?
不可以。检测细胞凋亡时PI结合的是核酸,包括DNA和RNA。而PI用于检测细胞周期时需要只结合DNA,由于RNA的干扰,用细胞凋亡检测试剂盒测出来的细胞周期不准。同时,凋亡检测与周期检测时PI的工作浓度以及样本处理都不一样。 如果需要进行细胞周期检测,推荐Cell Cycle and Apoptosis Kit(C6031)

各象限代表的细胞状态问题?
Q1:(AnnexinV-染料)-/PI+,此区域的细胞为坏死细胞。也可能有少数的晚期凋亡细胞在其中,甚至机械损伤的细胞也包含其中。Annexin V-/PI+越多,实验结果越不可信,建议实验中尽量控制这一象限细胞比例。
Q2: (AnnexinV+染料)+/PI+,此区域的细胞为晚期凋亡细胞或坏死。
Q3:(AnnexinV-染料)+/PI-,此区域的细胞为早期凋亡细胞。
Q4:(AnnexinV-染料)-/PI-,此区域的细胞为活细胞。

YF®488-Annexin V/RedNucleus Ⅱ 细胞凋亡试剂盒 货号:               Y6102S/Y6102M/Y6102L  规格:               10T/50T/100T


假阳性问题?

1. 消化液中含有EDTA或消化时间过长引起的假阳性。Annexin V和PS的结合需要Ca2+,而EDTA是Ca2+螯合剂,使用含有EDTA的胰酶会造成假阴性。其次消化时间不宜过长,吹打细胞要轻柔,因为胰酶的过度消化和机械损伤都会引起细胞膜的损伤,造成假阳性。细胞消化下来后,建议在培养箱中在孵育30min,使细胞膜恢复完整性,避免假阳性,或者将细胞报讯在含2% BSA的PBS中,防止进一步的损伤。
2. 如果样品来源于血液,必须去除血液中的血小板,因为血小板含有PS,能与Annexin V结合,干扰实验结果。建议:可以含有EDTA的缓冲液200g离心去除血小板, 最后细胞多洗几遍,减小EDTA螯合钙离子产生的影响。
3. 神经细胞膜容易破坏外翻,导致假阳性,所以Annexin V/PI 双染法流式检测细胞凋亡不适用于神经细胞。
4. 诱导时间过长。一般情况下诱导几个小时就可以出现早期凋亡,因此通常不需要处理大于48小时以上,诱导时间过长会使营养物质耗尽,导致细胞状态差,假阳性结果偏高。

荧光染料选择的问题?
1. 实验样本是否带荧光,因为感染病毒或质粒转染的细胞往往带GFP荧光,GFP与YF488/FITC通道重叠,不能选择YF488/FITC标记的Annexin V,此时如果只有488 nm一根激光管可以用PE标记Annexin V,用7-AAD代替PI,若有633 nm激光管,可以改用YF647 Annexin V代替YF488。
2. 如果流式细胞仪带有488 nm和633 nm两个或以上激光管,首先考虑用APC或YF647标记 Annexin V,因为它和PI通道几乎不用考虑光重叠问题,可以减少调节补偿的烦恼,如果只有488 nm激光管则可选择YF488/FITC标记的Annexin V。
3. 处理因素是否带有荧光,本实验室就碰到过一个促凋亡药物Doxorubicin本身发红色荧光,对PI通道的检测造成严重干扰,而且浓度越大干扰越明显。这时建议选用A6079或Y6102 。

圈门问题?
1.要特别注意在FSC/SSC圈门时,所选细胞范围会对结果造成较大影响,所以在分析数据时,要把所有细胞都圈进FSC/SSC的门内,这样实验结果才会更可信。如图,使细胞群大概位于对角线上,并且细胞群较集中,群内细胞比例要在80%以上,如果细胞全部圈入,细胞比例才50%或者更低,说明细胞被压在了坐标轴上,这时要重新调节FSC和SSC。
2.贴壁细胞做Annexin V凋亡检测,通常分群不太规则,这时我们可以根据不加药细胞来画不规则的十字门。如上面图形的设门方式:
YF®488-Annexin V/RedNucleus Ⅱ 细胞凋亡试剂盒 货号:               Y6102S/Y6102M/Y6102L  规格:               10T/50T/100TYF®488-Annexin V/RedNucleus Ⅱ 细胞凋亡试剂盒 货号:               Y6102S/Y6102M/Y6102L  规格:               10T/50T/100T

免疫染色与凋亡染色顺序问题?
Annexin V凋亡染色可以和抗体一起对细胞进行染色吗?
可以,但建议Annexin V和其它抗体分开染色。例如Annexin V、PI和CD3、CD8同时标记淋巴细胞,可以先在PBS中标记CD3/CD8后洗去,再在Binding buffer(含钙离子)中标记Annexin V。

这款试剂盒可同时检测出凋亡率和细胞周期分布吗?
不可以。检测细胞凋亡时PI结合的是核酸,包括DNA和RNA。而PI用于检测细胞周期时需要只结合DNA,由于RNA的干扰,用细胞凋亡检测试剂盒测出来的细胞周期不准。同时,凋亡检测与周期检测时PI的工作浓度以及样本处理都不一样。 若果需要进行细胞周期检测,推荐Cell Cycle and Apoptosis Kit(C6031)

固定、冷冻、切片或解离的组织,还可以做流式细胞分析吗?
不建议做流式细胞分析。因为流式细胞分析要求细胞分散、单个,活性好,这些状态下的样本外膜上的PS及膜的完整性都受到了影响,因此无法依赖膜的完整性区分健康细胞和凋亡细胞。组织在冻存、复温的过程中会有大量的细胞死亡,同时经过这一过程的组织在分离成单个细胞的时候会形成许多细胞碎片,不宜上流式检测,所以用于流式检测的标本最好是新鲜标本,即取材后立即检测,效果最好。 液氮保存的组织块,可以将组织标本进行切片,然后做原位染色,观察组织细胞的凋亡。

Annexin V可以用在植物和细菌中吗?
Annexin V也可以用在植物和细菌中检测凋亡,具体实验步骤可参考相关文献。

Annexin V-PE 偶联物 货号: A6065S/A6065L 规格: 0.1 mL/1 mL

Annexin V-PE 偶联物

产品货号: A6065S/A6065L

产品规格: 0.1 mL/1 mL

目录价(元):389/2947

推荐仪器:流式细胞仪

大包装询价


产品概述:

储存条件
4℃避光冷藏,请勿冻存。有效期见外包装。

光谱特性
Annexin V-PE:Ex/Em = 488/578 nm

产品介绍
细胞凋亡早期改变发生在细胞膜表面,这些细胞膜表面的改变之一是磷脂酰丝氨酸(PS)从细胞膜内转移到细胞膜外,使 PS 暴露在细胞膜外表面。Annexin V 具有易于结合到磷脂类如 PS 的特性,对 PS 有高度的亲和性。因此,该蛋白可充当一敏感的探针检测暴露在细胞膜表面的 PS。
Annexin V-PE 可以与 7-AAD/PI 等联合使用,来检测细胞凋亡情况。7-AAD/PI 可被排除在活细胞和早期凋亡细胞之外,而晚期凋亡细胞和坏死细胞可以同时被 Annexin V-PE 和 7-AAD 结合染色呈现双阳性,从而来区分活细胞、早调细胞与晚凋细胞。

注意事项
1. 荧光染料均存在淬灭问题,保存和使用过程中请尽量注意避光,以减缓荧光淬灭。
2. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
说明书:

Annexin V-PE 偶联物 货号:               A6065S/A6065L  规格:               0.1 mL/1 mL UE-A6065S/A6065L    
MSDS:

MSDS A6065 Annexin V-PE

Annexin I,Rabbit IgG anti-Mouse/Rat/Human,WB/IP/

2nnexin I,Rabbit IgG anti-Mouse/Rat/Human,WB/IP/

产品编号: sc-11387     
产品名称: Annexin I,Rabbit IgG anti-Mouse/Rat/Human,WB/IP/  
供应商: Santa
规格: 200ug
目录价: ¥:2980
库存状态:
CAS编号:
应用范围:
种属来源:
相关信息:
保存条件:
说明书地址: 点击查看详细

Annexin VII,Rabbit IgG anti-Mouse/Rat/Human,WB/IP/

2nnexin VII,Rabbit IgG anti-Mouse/Rat/Human,WB/IP/

产品编号: sc-11389     
产品名称: Annexin VII,Rabbit IgG anti-Mouse/Rat/Human,WB/IP/  
供应商: Santa
规格: 200ug
目录价: ¥:2980
库存状态:
CAS编号:
应用范围:
种属来源:
相关信息:
保存条件:
说明书地址: 点击查看详细

APC-Annexin V/PI 细胞凋亡试剂盒 货号: A6030S/A6030M/A6030L 规格: 10T/50T/100T

APC-Annexin V/PI 细胞凋亡试剂盒

产品货号: A6030S/A6030M/A6030L

产品规格: 10T/50T/100T

目录价(元):264/995/1474

推荐仪器:流式细胞仪(主推)、荧光显微镜

大包装询价


产品概述:

储存条件
4℃ 避光冷藏,请勿冻存。有效期见外包装。

组分  

规格

 A6030S10T

 A6030M50T

 A6030L100T

A. 1×Annexin V 结合缓冲液

10 mL

50 mL

50 mL×2

B. Annexin V-APC

50 μL

250 μL

500 μL

C. PI

100 μL

500 μL

1 mL

储存条件
4℃ 避光冷藏,请勿冻存。有效期见外包装。

光谱特性
Annexin V-APC: Ex/Em = 650/660 nm
PI: Ex/Em=535 nm/617 nm (with DNA)

产品介绍
Annexin V(膜联蛋白-V)是一种分子量为35-36KD的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白,可于磷脂酰丝氨酸(PS)选择性结合。磷脂酰丝氨酸(PS)主要分布在细胞膜内侧,即与细胞浆相邻的一侧。在细胞发生凋亡的早期,不同类型的细胞都会把磷脂酰丝氨酸外翻到细胞表面,暴露在细胞外环境中。此时,使用远红外荧光蛋白APC标记的Annexin V,即Annexin V-APC,与外翻的磷脂酰丝氨酸(PS)结合,就可用流式细胞仪或荧光显微镜直接检测到磷脂酰丝氨酸的外翻这一细胞凋亡的重要特征。对于坏死或晚期凋亡的细胞,由于细胞完整性已经被破坏,Annexin V-APC则可以进入胞浆与处于磷脂层内侧的 PS 结合,从而也使坏死细胞呈现远红外荧光。
碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)是一种 DNA 结合染料,它可以染色坏死细胞或凋亡晚期丧失细胞膜完整性的细胞的细胞核。PI可以由488,532或546 nm的激光激发,呈现红色荧光。


注意事项
1. 使用前请将产品瞬时离心至管底,再进行后续实验。
2. 为降低细胞凋亡进程,孵育过程可在冰上操作,但孵育时间至少延长至30 min。
3. 由于细胞凋亡是一个快速的过程,建议样品在染色后 1 h之内进行分析。
4. 对于贴壁细胞,消化是一个关键步骤。贴壁细胞诱导细胞凋亡时如有漂浮细胞,需收集漂浮细胞和贴壁细胞后合并染色。处理贴壁细胞时要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。胰酶消化时间过短,细胞需要用力吹打才能脱落,容易造成细胞膜的损伤,PI 摄入过多;消化时间过长,细胞膜同样易造成损伤,甚至会影响细胞膜上磷脂酰丝氨酸与 Annexin V-APC的结合。消化时将胰酶铺满孔板底后,轻摇时胰酶与细胞充分接触,然后倒掉大部分胰酶,利用剩余的少量胰酶再消化一段时间,待细胞间空隙增大,瓶底呈花斑状即可终止。在消化液中尽量不用 EDTA,EDTA 会影响 Annexin V 与 PS 的结合。
5. 贴壁细胞用胰蛋白酶消化后,建议在最佳培养条件和培养基中恢复约30 min后染色,避免假阳性。
6. 为了避免洗涤细胞时损失细胞,在吸液时可以用大的 Tip 头套上小的 Tip 头吸液。
7. 染料的最佳使用浓度由具体实验要求确定。
8. 荧光染料均存在淬灭问题,保存和使用过程中请尽量注意避光,以减缓荧光淬灭。
9. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。


说明书:

APC-Annexin V/PI 细胞凋亡试剂盒 货号:               A6030S/A6030M/A6030L  规格:               10T/50T/100T UE-A6030S/A6030M/A6030L    
MSDS:

MSDS A6030 Annexin V-APC&PI
常见问题解答:

为何染色结果显示细胞凋亡率过高?

1. 凋亡时间处理过长,使细胞全部死亡。建议重新摸索细胞凋亡条件,使细胞处于不同的凋亡状态。
2. 对于贴壁细胞,胰蛋白酶消化时间过长或机械刮擦细胞会暂时破坏质膜,使Annexin V能够与细胞膜胞内面上的磷脂酰丝氨酸结合,导致假阳性染色。建议在胰蛋白酶消化或机械刮擦细胞后,让细胞在最佳细胞培养条件和培养基中培养约30分钟,以恢复其膜完整性。

实验结果使用什么仪器观察?
实验结果可以通过流式细胞仪和荧光显微镜进行观察,但更推荐使用流式细胞仪。因为正常的细胞和凋亡的细胞膜上都有磷脂酰丝氨酸(PS),只是凋亡细胞膜外更多,可以结合更多的Annexin V,流式细胞仪更灵敏,可以区分出微小差异,将正常细胞与凋亡细胞分成不同的两群,但如果用荧光显微镜,可能观察不到这一差别,尤其是贴壁细胞。若要在成像测定中检测细胞凋亡,推荐使用SuperView™ 488 Caspase-3 Assay Kit for Live Cells。

流式细胞仪检测细胞凋亡,结果图中的各个象限代表什么状态的细胞?
左上角:Annexin V-/PI+,机械损伤细胞;右上角: AnnexinV+/PI+,晚期凋亡细胞或坏死;右下角:AnnexinV+/PI-,早期凋亡细胞;左下角:AnnexinV-/PI-,正常细胞。

这款试剂盒可同时检测出凋亡率和细胞周期分布吗?
不可以。检测细胞凋亡时PI结合的是核酸,包括DNA和RNA。而PI用于检测细胞周期时需要只结合DNA,由于RNA的干扰,用细胞凋亡检测试剂盒测出来的细胞周期不准。同时,凋亡检测与周期检测时PI的工作浓度以及样本处理都不一样。 如果需要进行细胞周期检测,推荐Cell Cycle and Apoptosis Kit(C6031)

各象限代表的细胞状态问题?
Q1:(AnnexinV-染料)-/PI+,此区域的细胞为坏死细胞。也可能有少数的晚期凋亡细胞在其中,甚至机械损伤的细胞也包含其中。Annexin V-/PI+越多,实验结果越不可信,建议实验中尽量控制这一象限细胞比例。
Q2: (AnnexinV+染料)+/PI+,此区域的细胞为晚期凋亡细胞或坏死。
Q3:(AnnexinV-染料)+/PI-,此区域的细胞为早期凋亡细胞。
Q4:(AnnexinV-染料)-/PI-,此区域的细胞为活细胞。

APC-Annexin V/PI 细胞凋亡试剂盒 货号:               A6030S/A6030M/A6030L  规格:               10T/50T/100T


假阳性问题?

1. 消化液中含有EDTA或消化时间过长引起的假阳性。Annexin V和PS的结合需要Ca2+,而EDTA是Ca2+螯合剂,使用含有EDTA的胰酶会造成假阴性。其次消化时间不宜过长,吹打细胞要轻柔,因为胰酶的过度消化和机械损伤都会引起细胞膜的损伤,造成假阳性。细胞消化下来后,建议在培养箱中在孵育30min,使细胞膜恢复完整性,避免假阳性,或者将细胞报讯在含2% BSA的PBS中,防止进一步的损伤。
2. 如果样品来源于血液,必须去除血液中的血小板,因为血小板含有PS,能与Annexin V结合,干扰实验结果。建议:可以含有EDTA的缓冲液200g离心去除血小板, 最后细胞多洗几遍,减小EDTA螯合钙离子产生的影响。
3. 神经细胞膜容易破坏外翻,导致假阳性,所以Annexin V/PI 双染法流式检测细胞凋亡不适用于神经细胞。
4. 诱导时间过长。一般情况下诱导几个小时就可以出现早期凋亡,因此通常不需要处理大于48小时以上,诱导时间过长会使营养物质耗尽,导致细胞状态差,假阳性结果偏高。

荧光染料选择的问题?
1. 实验样本是否带荧光,因为感染病毒或质粒转染的细胞往往带GFP荧光,GFP与YF488/FITC通道重叠,不能选择YF488/FITC标记的Annexin V,此时如果只有488 nm一根激光管可以用PE标记Annexin V,用7-AAD代替PI,若有633 nm激光管,可以改用YF647 Annexin V代替YF488。
2. 如果流式细胞仪带有488 nm和633 nm两个或以上激光管,首先考虑用APC或YF647标记 Annexin V,因为它和PI通道几乎不用考虑光重叠问题,可以减少调节补偿的烦恼,如果只有488 nm激光管则可选择YF488/FITC标记的Annexin V。
3. 处理因素是否带有荧光,本实验室就碰到过一个促凋亡药物Doxorubicin本身发红色荧光,对PI通道的检测造成严重干扰,而且浓度越大干扰越明显。这时建议选用A6079或Y6102 。

圈门问题?
1.要特别注意在FSC/SSC圈门时,所选细胞范围会对结果造成较大影响,所以在分析数据时,要把所有细胞都圈进FSC/SSC的门内,这样实验结果才会更可信。如图,使细胞群大概位于对角线上,并且细胞群较集中,群内细胞比例要在80%以上,如果细胞全部圈入,细胞比例才50%或者更低,说明细胞被压在了坐标轴上,这时要重新调节FSC和SSC。
2.贴壁细胞做Annexin V凋亡检测,通常分群不太规则,这时我们可以根据不加药细胞来画不规则的十字门。如上面图形的设门方式:
APC-Annexin V/PI 细胞凋亡试剂盒 货号:               A6030S/A6030M/A6030L  规格:               10T/50T/100TAPC-Annexin V/PI 细胞凋亡试剂盒 货号:               A6030S/A6030M/A6030L  规格:               10T/50T/100T


免疫染色与凋亡染色顺序问题?

Annexin V凋亡染色可以和抗体一起对细胞进行染色吗?
可以,但建议Annexin V和其它抗体分开染色。例如Annexin V、PI和CD3、CD8同时标记淋巴细胞,可以先在PBS中标记CD3/CD8后洗去,再在Binding buffer(含钙离子)中标记Annexin V。

这款试剂盒可同时检测出凋亡率和细胞周期分布吗?
不可以。检测细胞凋亡时PI结合的是核酸,包括DNA和RNA。而PI用于检测细胞周期时需要只结合DNA,由于RNA的干扰,用细胞凋亡检测试剂盒测出来的细胞周期不准。同时,凋亡检测与周期检测时PI的工作浓度以及样本处理都不一样。 若果需要进行细胞周期检测,推荐Cell Cycle and Apoptosis Kit(C6031)

固定、冷冻、切片或解离的组织,还可以做流式细胞分析吗?
不建议做流式细胞分析。因为流式细胞分析要求细胞分散、单个,活性好,这些状态下的样本外膜上的PS及膜的完整性都受到了影响,因此无法依赖膜的完整性区分健康细胞和凋亡细胞。组织在冻存、复温的过程中会有大量的细胞死亡,同时经过这一过程的组织在分离成单个细胞的时候会形成许多细胞碎片,不宜上流式检测,所以用于流式检测的标本最好是新鲜标本,即取材后立即检测,效果最好。 液氮保存的组织块,可以将组织标本进行切片,然后做原位染色,观察组织细胞的凋亡。

Annexin V可以用在植物和细菌中吗?
Annexin V也可以用在植物和细菌中检测凋亡,具体实验步骤可参考相关文献。
使用本产品的文献:

参考文献
1.Terminating the criminal collaboration in pancreatic cancer: Nanoparticle-based synergistic therapy for overcoming fibroblast-induced drug resistance.
应用方向:检测胰腺导管腺癌(PDAC)细胞的凋亡

2.Ribosomal protein L23 negatively regulates cellular apoptosis via the RPL23/Miz-1/c-Myc circuit in higher-risk myelodysplastic syndrome.
应用方向:检测高危骨髓增生异常综合征(MDS)患者CD34+细胞的凋亡

3.Chlamydia trachomatis plasmid-encoded protein Pgp3 inhibits apoptosis via the PI3K-AKT-mediated MDM2-p53 axis.
应用方向:检测Hela细胞的凋亡

Annexin V-FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒

Annexin V-FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒货号: JP50001

产品描述
描述

在正常细胞中,磷脂酰丝氨酸只分布在细胞膜脂质双层的内侧,细胞发生凋亡最早期,膜磷脂酰丝氨酸(PS)由脂膜内侧翻向外侧,这一变化早于细胞皱缩、染色质浓缩、DNA片断化和细胞膜的通透性增加等凋亡现象。Annexin V是一种磷脂结合蛋白,与磷脂酰丝氨酸有高度亲和力,故可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。因此Annexin V被作为检测细胞早期凋亡的灵敏指标之一。碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)是一种核酸染料, 它不能透过完整的细胞膜,但凋亡中晚期的细胞和死细胞由于细胞膜通透性的增加,PI 能够透过细胞膜而使细胞核染红。因此将Annexin V 与PI 匹配使用,就可以将处于不同凋亡时期的细胞区分开来。

产品组分
25 Tests 50 Tests 100 Tests
AnnexinV-FITC 125μl 250μl 500μl
10×Binding Buffer 1.5ml 2.5ml 6.5ml
Propidium Iodide 125μl 250μl 500μl
操作步骤
贴壁细胞需用 0.25%的胰酶消化。注意过度消化可损伤细胞。在消化时可加 2%的BSA可防止消化过度。如果用含EDTA的胰酶消化时,注意必须彻底清除EDTA:在标记前用 1×PBS或 1×binding buffer洗涤,清除EDTA,以免残余的EDTA与Ca2+螯合,影响Annexin V的结合。
(1) 用去离子水将 10×Binding Buffer 稀释成 1×Binding Buffer;
(2) 细胞收集:悬浮细胞收集:离心 5 分钟;贴壁细胞:用不含EDTA的胰酶消化收集后( 注:胰酶消化时间不宜过长,否则会影响细胞膜上磷脂酰丝氨酸与Annexin V-FITC 的结合),在室温中,2000rpm 离心 5~10 分钟,收集细胞;
(3) 细胞洗涤:用预冷 1×PBS(4℃)重悬细胞一次,2000rpm 离心 5~10分钟,弃上清洗涤细胞;
(4) 加入 300μL 的 1×Binding Buffer 悬浮细胞;
(5) Annexin V-FITC 标记:加入 5μL 的 Annexin V-FITC 混匀后,避光,室温孵育 15 分钟;
(6) PI 标记:上机前 5 分钟再加入 5μL 的 PI 染色。
(7) 上机前,补加 200μL 的 1×Binding Buffer。
注意:每个反应体系建议细胞数为1×104至1×106
操作说明
(1) 使用前低速离心,以免液体积存管盖和管壁;
(2) 本试剂只适用于实验,不适用于临床检测;
(3) PI(propidium iodide,溴化丙锭)有毒性,能通过皮肤吸收,对眼睛有刺激作用,使用时需戴手套;
(4) Annexin V-FITC 和 PI 是光敏物质,在操作时请注意避光。在处理和标记时,尽可能在暗处进行。在孵育阶段,用铝箔包裹容器或置于抽屉中。细胞标记后,在暗室内用显微镜观察;
(5) 整个操作过程动作要尽量轻柔,勿用力吹打细胞,尽量在 4℃下操作,以免影响细胞状态。
(6) 在细胞洗涤的最后一步,请尽量将上清弃净,以免 PBS 残留,有可能会影响实验结果。
(7) 为防止荧光衰变,宜在 1 小时内进行流式检测。
(8) PI 染色时间过长有可能造成检测的凋亡率偏高,建议首先进行Annexin V-FITC 染色,最短可在上机前 5 分钟再加入 PI 染色。
基本信息
别名
Annexin V-FITC apoptosis assay kit
储存/保存方法
4℃保存6个月;避免反复冻融。

Annexin VI,Rabbit IgG anti-Mouse/Rat/Human,WB/IP/

2nnexin VI,Rabbit IgG anti-Mouse/Rat/Human,WB/IP/

产品编号: sc-11388     
产品名称: Annexin VI,Rabbit IgG anti-Mouse/Rat/Human,WB/IP/  
供应商: Santa
规格: 200ug
目录价: ¥:2980
库存状态:
CAS编号:
应用范围:
种属来源:
相关信息:
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YF®647A-Annexin V/PI 细胞凋亡试剂盒 货号: Y6026S/Y6026M/Y6026L 规格: 10T/50T/100T

YF®647A-Annexin V/PI 细胞凋亡试剂盒

产品货号: Y6026S/Y6026M/Y6026L

产品规格: 10T/50T/100T

目录价(元):264/995/1474

推荐仪器:流式细胞仪(主推)、荧光显微镜

大包装询价


产品概述:

储存条件
4℃ 避光冷藏,请勿冻存。有效期见外包装。 

组分                   

规格

 Y6026S10T

 Y6026M50T

 Y6026L100T

A. 1×Annexin V 结合缓冲液

10 mL

50 mL

50 mL×2

B. YF®647A-Annexin V

50 μL

250 μL

500 μL

C. PI

100 μL

500 μL

1 mL


储存条件
4℃避光冷藏,请勿冻存。有效期见外包装。

光谱特性
YF®647A-Annexin V:Ex/Em = 650/665 nm
PI:Ex/Em = 535/617 nm (with DNA)

产品介绍

YF®647A-Annexin V和PI凋亡试剂盒提供了一种快速简便的方法,通过标记早期凋亡细胞(远红)和坏死或晚期凋亡的细胞(红色),用于检测细胞凋亡水平。产品可以使用流式细胞仪或其它荧光检测设备进行检测。
Annexin V(膜联蛋白-V)是一种分子量为35-36KD的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白,可于磷脂酰丝氨酸(PS)选择性结合。磷脂酰丝氨酸(PS)主要分布在细胞膜内侧,即与细胞浆相邻的一侧。在细胞发生凋亡的早期,不同类型的细胞都会把磷脂酰丝氨酸外翻到细胞表面,暴露在细胞外环境中。此时,使用远红荧光探针YF®647A标记的Annexin V,即YF®647A-Annexin V,与外翻的磷脂酰丝氨酸(PS)结合,就可用流式细胞仪或荧光显微镜直接检测到磷脂酰丝氨酸的外翻这一细胞凋亡的重要特征。对于坏死或晚期凋亡的细胞,由于细胞完整性已经被破坏,YF®647A-Annexin V则可以进入胞浆与处于磷脂层内侧的PS结合,从而也使坏死细胞呈现远红外荧光。
碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)是一种DNA结合染料,它可以染色坏死细胞或凋亡晚期丧失细胞膜完整性的细胞的细胞核。PI可以由488,532或546 nm的激光激发,呈现红色荧光。

注意事项
1. 使用前请将产品瞬时离心至管底,再进行后续实验。
2. 为降低细胞凋亡进程,孵育过程可在冰上操作,但孵育时间至少延长至30 min。
3. 由于细胞凋亡是一个快速的过程,建议样品在染色后 1 h之内进行分析。
4. 对于贴壁细胞,消化是一个关键步骤。贴壁细胞诱导细胞凋亡时如有漂浮细胞,需收集漂浮细胞和贴壁细胞后合并染色。处理贴壁细胞时要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。胰酶消化时间过短,细胞需要用力吹打才能脱落,容易造成细胞膜的损伤,PI 摄入过多;消化时间过长,细胞膜同样易造成损伤,甚至会影响细胞膜上磷脂酰丝氨酸与 YF®647A-Annexin V的结合。消化时将胰酶铺满孔板底后,轻摇时胰酶与细胞充分接触,然后倒掉大部分胰酶,利用剩余的少量胰酶再消化一段时间,待细胞间空隙增大,瓶底呈花斑状即可终止。在消化液中尽量不用 EDTA,EDTA 会影响 Annexin V 与 PS 的结合。
5. 贴壁细胞用胰蛋白酶消化后,建议在最佳培养条件和培养基中恢复约30 min后染色,避免假阳性。
6. 为了避免洗涤细胞时损失细胞,在吸液时可以用大的 Tip 头套上小的 Tip 头吸液。
7. 染料的最佳使用浓度由具体实验要求确定。
8. 荧光染料均存在淬灭问题,保存和使用过程中请尽量注意避光,以减缓荧光淬灭。
9. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。


说明书:

YF®647A-Annexin V/PI 细胞凋亡试剂盒 货号:               Y6026S/Y6026M/Y6026L  规格:               10T/50T/100T UE-Y6026S/Y6026M/Y6026L    
MSDS:

MSDS Y6026 YF®647A-Annexin V and PI Apoptosis Kit
常见问题解答:

为何染色结果显示细胞凋亡率过高?

1. 凋亡时间处理过长,使细胞全部死亡。建议重新摸索细胞凋亡条件,使细胞处于不同的凋亡状态。
2. 对于贴壁细胞,胰蛋白酶消化时间过长或机械刮擦细胞会暂时破坏质膜,使Annexin V能够与细胞膜胞内面上的磷脂酰丝氨酸结合,导致假阳性染色。建议在胰蛋白酶消化或机械刮擦细胞后,让细胞在最佳细胞培养条件和培养基中培养约30分钟,以恢复其膜完整性。

实验结果使用什么仪器观察?
实验结果可以通过流式细胞仪和荧光显微镜进行观察,但更推荐使用流式细胞仪。因为正常的细胞和凋亡的细胞膜上都有磷脂酰丝氨酸(PS),只是凋亡细胞膜外更多,可以结合更多的Annexin V,流式细胞仪更灵敏,可以区分出微小差异,将正常细胞与凋亡细胞分成不同的两群,但如果用荧光显微镜,可能观察不到这一差别,尤其是贴壁细胞。若要在成像测定中检测细胞凋亡,推荐使用SuperView™ 488 Caspase-3 Assay Kit for Live Cells。

流式细胞仪检测细胞凋亡,结果图中的各个象限代表什么状态的细胞?
左上角:Annexin V-/PI+,机械损伤细胞;右上角: AnnexinV+/PI+,晚期凋亡细胞或坏死;右下角:AnnexinV+/PI-,早期凋亡细胞;左下角:AnnexinV-/PI-,正常细胞。

这款试剂盒可同时检测出凋亡率和细胞周期分布吗?
不可以。检测细胞凋亡时PI结合的是核酸,包括DNA和RNA。而PI用于检测细胞周期时需要只结合DNA,由于RNA的干扰,用细胞凋亡检测试剂盒测出来的细胞周期不准。同时,凋亡检测与周期检测时PI的工作浓度以及样本处理都不一样。 如果需要进行细胞周期检测,推荐Cell Cycle and Apoptosis Kit(C6031)

各象限代表的细胞状态问题?
Q1:(AnnexinV-染料)-/PI+,此区域的细胞为坏死细胞。也可能有少数的晚期凋亡细胞在其中,甚至机械损伤的细胞也包含其中。Annexin V-/PI+越多,实验结果越不可信,建议实验中尽量控制这一象限细胞比例。
Q2: (AnnexinV+染料)+/PI+,此区域的细胞为晚期凋亡细胞或坏死。
Q3:(AnnexinV-染料)+/PI-,此区域的细胞为早期凋亡细胞。
Q4:(AnnexinV-染料)-/PI-,此区域的细胞为活细胞。

YF®647A-Annexin V/PI 细胞凋亡试剂盒 货号:               Y6026S/Y6026M/Y6026L  规格:               10T/50T/100T


假阳性问题?

1. 消化液中含有EDTA或消化时间过长引起的假阳性。Annexin V和PS的结合需要Ca2+,而EDTA是Ca2+螯合剂,使用含有EDTA的胰酶会造成假阴性。其次消化时间不宜过长,吹打细胞要轻柔,因为胰酶的过度消化和机械损伤都会引起细胞膜的损伤,造成假阳性。细胞消化下来后,建议在培养箱中在孵育30min,使细胞膜恢复完整性,避免假阳性,或者将细胞报讯在含2% BSA的PBS中,防止进一步的损伤。
2. 如果样品来源于血液,必须去除血液中的血小板,因为血小板含有PS,能与Annexin V结合,干扰实验结果。建议:可以含有EDTA的缓冲液200g离心去除血小板, 最后细胞多洗几遍,减小EDTA螯合钙离子产生的影响。
3. 神经细胞膜容易破坏外翻,导致假阳性,所以Annexin V/PI 双染法流式检测细胞凋亡不适用于神经细胞。
4. 诱导时间过长。一般情况下诱导几个小时就可以出现早期凋亡,因此通常不需要处理大于48小时以上,诱导时间过长会使营养物质耗尽,导致细胞状态差,假阳性结果偏高。

荧光染料选择的问题?
1. 实验样本是否带荧光,因为感染病毒或质粒转染的细胞往往带GFP荧光,GFP与YF488/FITC通道重叠,不能选择YF488/FITC标记的Annexin V,此时如果只有488 nm一根激光管可以用PE标记Annexin V,用7-AAD代替PI,若有633 nm激光管,可以改用YF647 Annexin V代替YF488。
2. 如果流式细胞仪带有488 nm和633 nm两个或以上激光管,首先考虑用APC或YF647标记 Annexin V,因为它和PI通道几乎不用考虑光重叠问题,可以减少调节补偿的烦恼,如果只有488 nm激光管则可选择YF488/FITC标记的Annexin V。
3. 处理因素是否带有荧光,本实验室就碰到过一个促凋亡药物Doxorubicin本身发红色荧光,对PI通道的检测造成严重干扰,而且浓度越大干扰越明显。这时建议选用A6079或Y6102 。

圈门问题?
1.要特别注意在FSC/SSC圈门时,所选细胞范围会对结果造成较大影响,所以在分析数据时,要把所有细胞都圈进FSC/SSC的门内,这样实验结果才会更可信。如图,使细胞群大概位于对角线上,并且细胞群较集中,群内细胞比例要在80%以上,如果细胞全部圈入,细胞比例才50%或者更低,说明细胞被压在了坐标轴上,这时要重新调节FSC和SSC。
2.贴壁细胞做Annexin V凋亡检测,通常分群不太规则,这时我们可以根据不加药细胞来画不规则的十字门。如上面图形的设门方式:
YF®647A-Annexin V/PI 细胞凋亡试剂盒 货号:               Y6026S/Y6026M/Y6026L  规格:               10T/50T/100TYF®647A-Annexin V/PI 细胞凋亡试剂盒 货号:               Y6026S/Y6026M/Y6026L  规格:               10T/50T/100T

免疫染色与凋亡染色顺序问题?
Annexin V凋亡染色可以和抗体一起对细胞进行染色吗?
可以,但建议Annexin V和其它抗体分开染色。例如Annexin V、PI和CD3、CD8同时标记淋巴细胞,可以先在PBS中标记CD3/CD8后洗去,再在Binding buffer(含钙离子)中标记Annexin V。

这款试剂盒可同时检测出凋亡率和细胞周期分布吗?
不可以。检测细胞凋亡时PI结合的是核酸,包括DNA和RNA。而PI用于检测细胞周期时需要只结合DNA,由于RNA的干扰,用细胞凋亡检测试剂盒测出来的细胞周期不准。同时,凋亡检测与周期检测时PI的工作浓度以及样本处理都不一样。 若果需要进行细胞周期检测,推荐Cell Cycle and Apoptosis Kit(C6031)

固定、冷冻、切片或解离的组织,还可以做流式细胞分析吗?
不建议做流式细胞分析。因为流式细胞分析要求细胞分散、单个,活性好,这些状态下的样本外膜上的PS及膜的完整性都受到了影响,因此无法依赖膜的完整性区分健康细胞和凋亡细胞。组织在冻存、复温的过程中会有大量的细胞死亡,同时经过这一过程的组织在分离成单个细胞的时候会形成许多细胞碎片,不宜上流式检测,所以用于流式检测的标本最好是新鲜标本,即取材后立即检测,效果最好。 液氮保存的组织块,可以将组织标本进行切片,然后做原位染色,观察组织细胞的凋亡。

Annexin V可以用在植物和细菌中吗?
Annexin V也可以用在植物和细菌中检测凋亡,具体实验步骤可参考相关文献。