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Afu UDG #M0279S 200 units-NEB酶试剂 New England Biolabs

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上海金畔生物科技有限公司代理New England Biolabs（NEB）酶试剂全线产品，欢迎访问官网了解更多产品信息和订购。

产品资料 – DNA修饰酶与克隆技术 – DNA 修复蛋白

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特性

 热稳定
 从双链或单链 DNA 上切下尿嘧啶 

概述

Afu 尿嘧啶-DNA 糖基化酶（Afu UDG）是 E.coli 尿嘧啶-DNA 糖基化酶（UDG）热稳定的同源蛋白，来源于闪烁古生球菌（Archaeoglobus fulgidus）。该酶从含尿嘧啶的 DNA 上催化释放尿嘧啶，能有效地水解双链和单链 DNA 上的尿嘧啶。 

来源

克隆自闪烁古生球菌（Archaeoglobus fulgidus）UDG 基因的 E. coli 菌株。 

反应条件

1X ThermoPol II（不含 Mg2+）反应缓冲液
[10 mM KCl，10 mM (NH4)2SO4，20 mM Tris-HCl，0.1% Triton X-100（pH 8.8 @ 25℃）]，65℃ 温育。 

质保声明

Afu UDG 经过严格的质控检测，确保该产品具有最高的活性和纯度。详情请联系我们。  

单位定义

1 单位指每分钟从含尿嘧啶双链 DNA 上催化释放 60 pmol 尿嘧啶所需要的酶量。通过检测 65℃ 30 分钟内，从 50 μl 含 0.2 μg DNA（104～105 cpm/μg）的反应体系中释放 [3H]-尿嘧啶的量来确定活性。活性检测条件请联系我们。 

浓度

2,000 units/ml。

注意事项

Afu UDG 在 150 mM NaCl 存在条件下，仍有 50% 的活性。Afu UDG 煮沸 30 分钟之后在标准反应条件下仅存少于 1% 的活性。在标准反应条件下，尿嘧啶糖苷酶抑制剂（UGI）不能抑制 Afu UDG 的活性。 

参考文献

关于该酶性质和产品应用的参考文献，请联系我们。  

WarmStart® Afu 尿嘧啶-DNA 糖基酶 (UDG) #M1282S 200 units-NEB酶试剂 New England Biolabs

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产品特点

 WarmStart® Afu 尿嘧啶-DNA 糖基酶 (UDG) #M1282S 200 units

·   闪烁古生球菌（Archaeoglobus fulgidus）尿嘧啶-DNA 糖基酶

·   该酶为耐热单功能 DNA 糖基酶，从含尿嘧啶的 DNA 上催化释放尿嘧啶，能有效地水解双链和单 DNA 上的尿嘧啶

·   WarmStart 技术抑制酶在42°C以下的活性，可用于在等温扩增反应后消除产物污染

·   从双链或单链 DNA 上切下尿嘧啶

概述

WarmStart Afu 尿嘧啶-DNA 糖基酶（UDG）来源于闪烁古生球菌（Archaeoglobus fulgidus），配方中加入了能够可逆结合的适配体，在低于 42℃ 条件下抑制酶活性。在 42℃ 以上具有活性，能有效地水解双链和单链 DNA 上的尿嘧啶。

产品描述

 图1.  WarmStart Afu 尿嘧啶-DNA 糖基酶（UDG）在低于 42℃ 的温度下未检测到活性。

 WarmStart® Afu 尿嘧啶-DNA 糖基酶 (UDG) #M1282S 200 units

（A）Afu 尿嘧啶-DNA 糖基酶（UDG）（NEB #M0279）和WarmStart Afu 尿嘧啶-DNA 糖基酶（UDG）（NEB #M1282）的 UDG 酶活性温度曲线比较，结果显示 WarmStart在42ºC以下抑制 UDG 酶活性。在25-65ºC 的温度梯度下，分别用0.002 U Afu 尿嘧啶-DNA 糖基酶（UDG）或WarmStart Afu 尿嘧啶-DNA 糖基酶（UDG），与1.8 pmol 含有单个尿嘧啶且带有荧光标记的 47-mer 单链DNA孵育30分钟。尿嘧啶被水解后，生成的碱基缺失片段经碱裂解（1M NaOH, 85°C 10分钟）处理，再通过Applied Biosystems 3730xl Genetic Analyzer ( 96 capillary array ) 进行电泳分析。结果显示，在 65°C 时 WarmStart Afu 尿嘧啶-DNA 糖基酶（UDG）与Afu 尿嘧啶-DNA 糖基酶（UDG）活性相当，但在 25°C  时未检测到酶活性。 

(B) 在 30-45ºC 温度范围通过链置换反应技术（SDA），对 500bp 长度 λDNA
进行含有 dUTP 的扩增反应，分别在有 WarmStart Afu 尿嘧啶-DNA 糖基酶（UDG）（上图）、 Afu 尿嘧啶-DNA 糖基酶（UDG）（中图）和无 UDG（下图）的情况下进行。在没有 UDG的情况下（下图），SDA 在整个温度范围内均产生了 500 bp 的扩增条带。在含有 Afu 尿嘧啶-DNA 糖基酶（UDG）的反应中（中图），高于 31℃ 的温度时，SDA 反应被Afu 尿嘧啶-DNA 糖基酶（UDG）完全抑制。抑制的产生是由于Afu 尿嘧啶-DNA 糖基酶（UDG）在低温下的固有活性，将扩增子中的尿嘧啶水解产生碱基缺失位点，从而阻止其进一步扩增。然而，在 WarmStart Afu Uracil-DNA 糖基酶（UDG）存在时（上图），除了在 45℃ 左右的产物产量略有下降外，对其他温度条件下扩增几乎没有影响，这表明 WarmStart Afu Uracil-DNA 糖基酶（UDG）在 42℃ 以上才具有活性。
 
图2.  WarmStart Afu 尿嘧啶-DNA 糖基酶（UDG）在 65℃ 有效地消化含尿嘧啶的扩增产物。
 
WarmStart® Afu 尿嘧啶-DNA 糖基酶 (UDG) #M1282S 200 units
 
（A）使用 WarmStart Afu 尿嘧啶-DNA 糖基酶（UDG）在 SDA 反应扩增后消除产物污染示意图。在不含 UDG 或者含有 WarmStart Afu 尿嘧啶-DNA 糖基酶（UDG）情况下，对 500bp 片段进行SDA 等温扩增，反应中含有 dUTP 底物，反应温度 34℃，在此温度下 WarmStart Afu 尿嘧啶-DNA 糖基酶（UDG）不发挥活性。SDA 反应后，将产物在 65℃ 孵育 20 分钟以消化产物中的尿嘧啶。含有碱基缺失的 DNA 链在碱性条件下 85ºC 孵育 10 分钟会被降解。

（B）在 65ºC 下处理 20 分钟后，不含UDG和含有 WarmStart Afu 尿嘧啶-DNA 糖基酶（UDG）样品的凝胶电泳结果显示，其 500 bp 扩增产物的产量相似。然后 85℃ 碱性条件下孵育 10 分钟，降解含有碱基缺失的 DNA 产物。经过处理，500 bp 的产物在不含 UDG 的反应中保持完整，而在含有 WarmStart Afu Uracil-DNA 糖基酶（UDG）的反应中变成较弱的条带或者弥散状产物。