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protein G原理的抗体快速纯化柱—Capturem™ 膜技术
品牌	Code No.	产品名称	包装量	价格（元）	说明书	数量
Clontech	635725	Capturem™ Protein G Miniprep(库存销售完毕即终卖)	10 Columns	￥2,728
Clontech	635726	Capturem™ Protein G 96-Well Plate(库存销售完毕即终卖)	1 × 96-well plate	￥5,873
Clontech	635732	Capturem™ Protein G 24-Well Plate(库存销售完毕即终卖)	1 × 24-well plate	￥6,169
Clontech	635745	Capturem™ Protein G 24-Well Plate – HC(库存销售完毕即终卖)	1 × 24-well plate	￥8,300

■ 产品简介 Capturem™ Protein G 系列产品是基于Protein G* 原理，结合新型膜技术的一次性抗体纯化柱，特别适用于单克隆抗体和多克隆抗体的小量快速纯化和筛选。室温下操作即可，小量纯化仅需5 min，因此无须担心抗体的降解或失活。Capturem™ 系列产品以高性能的尼龙膜为介质并对其进行改造，增加了膜孔表面积，对抗体的结合能力≥75 mg/cm3。产品最突出的特点是柱床体积小，可在室温下操作，纯化简单快速，可实现抗体的高浓度、高纯度纯化。产品有小量（miniprep）以及高通量（24 well、96 well）四种规格可供选择。 *Protein G是来源于Staphylococcus aureus的细胞壁蛋白质，与许多物种（人、大小鼠等）的单克隆或多克隆IgG型抗体分子的Fc段有高亲和性。本制品使用的是重组protein G，去掉了白蛋白结合结构域、细胞壁和细胞膜结合结构域，从而提高了与抗体Fc片段的结合特异性。   ■ 产品特点 · 快速方便：从上样到洗脱，室温下操作小量纯化仅需5 min，无需上样后孵育 · 结合力强：膜与抗体的结合能力≥75 mg/cm3 · 高质量：样品停留时间短，从而有效地防止了抗体降解及失活，保障了下游应用的成功率 · 高纯度、高浓度：柱床体积小，带入污染少，可实现大体积洗涤，小体积洗脱 · 高灵活性：可从广泛来源的样品中纯化多种类型的抗体，如动物血清、腹水、细胞培养基等 · 一次性使用：有效减少样品间的交叉污染，单孔的纯化产量因样品类型、物种以及抗体同种型的不同而有所差别。 注：Capturem™ Protein G 24-Well Plate-HC（Code No. 635745）经过优化，与旧版本产品（Code No. 635732）相比，收量更高   ■ Capturem™ 膜原理   ■ 操作流程   ■ 产品主要参数     Capturem™ Protein G Miniprep Capturem™Protein G 24-Well Plate-HC Capturem™Protein G 96-Well Plate 包装量 10次 24 well 96 well 样品上样量*1 100～800 μl 0.5～4.3 ml/well 200～1,000 μl/well 操作时长 5 min 15 min 15 min 收量*2 60 μg protein/column 600 μg*3 protein/well 60 μg protein/well 洗脱液使用量 100-300 μl 1.8 ml 100-300 μl   *1. 样品与binding buffer的稀释比例为1:2～1:15。建议杂交瘤样品1:2～1:4稀释，血清样品1:15稀释。 *2. 收量多少取决于样品的类型、物种以及抗体同种型（isotype）。 *3. 这是在HEK293细胞上清液中添加1 mg小鼠IgG1时获得的收量。   ■ Protein A和Protein G对于不同来源和亚型抗体的亲和性 Species Antibody subtype Protein A Protein G Protein A/G Human Total lgG +++ +++ +++ lgG1 +++ +++ +++ lgG2 +++ +++ +++ lgG3 + +++ +++ lgG4 +++ +++ +++ lgM + – + lgD – – – lgA1 + – + lgA2 + – + Fab + + + scFv + – + Mouse Total lgG +++ +++ +++ lgM – – – lgG1 + ++ ++ lgG2a +++ +++ +++ lgG2b +++ +++ +++ lgG3 +++ +++ +++ Rat Total lgG + ++ ++ lgG1 + ++ ++ lgG2a – +++ +++ lgG2b – + + lgG2c +++ +++ +++ Rabbit Total lgG +++ +++ +++ +++ strong binding ++ medium binding + weak binding – no binding   ■ 各试剂盒组成   Capturem™ Protein G Miniprep（635725） Miniprep Column      10个   Capturem™ Protein G 96-Well Plate（635726） 96 well plate          1块   Capturem™ Protein G 24-Well Plate（635732） 24 well plate          1块   Capturem™ Protein G 24-Well Plate-HC（635745） 24 well plate          1块   【注】由于Capturem Protein G系列产品不包含buffer和收集管，请按以下建议配制buffer和准备材料。 1. 纯化buffer 本制品可搭配使用磷酸盐、柠檬酸盐缓冲液等抗体纯化常用试剂。标准的buffer配方请参考说明书中内容，需要注意的是，buffer的盐浓度和pH值对纯化抗体的收量和纯度的影响会因抗体的同种型不同而不同。 2. 收集tube/plate 使用Miniprep产品进行1次纯化，需要额外准备4个2 ml tube 使用96 well产品进行1次纯化，需要额外准备4个96 well collection plate 使用24 well产品进行1次纯化，需要额外准备4个24 well collection plate

页面更新：2023-12-25 09:23:35

上海金畔生物科技有限公司代理Takara酶试剂盒全线产品，欢迎访问官网了解更多产品信息和订购。

protein A原理的抗体快速纯化柱—Capturem™ 膜技术
品牌	Code No.	产品名称	包装量	价格（元）	说明书	数量
Clontech	635731	Capturem™ Protein A 24-Well Plate	1 × 24-well plate	￥5,932
Clontech	635746	Capturem™ Protein A Buffer	100 ml	￥1,002

■ 产品简介

Capturem™ Protein A 系列产品是基于Protein A* 原理，结合新型膜技术的一次性抗体纯化柱，特别适用于单克隆抗体和多克隆抗体的小量快速纯化和筛选。室温下操作即可，小量纯化仅需5 min，因此无须担心抗体的降解或失活。Capturem™ 系列产品以高性能的尼龙膜为介质并对其进行改造，增加了膜孔表面积，对抗体的结合能力≥75 mg/cm3。产品最突出的特点是柱床体积小，可在室温下操作，纯化简单快速，可实现抗体的高浓度、高纯度纯化。

*Protein A是金黄色葡萄球菌的表面蛋白质，对许多物种（如人、大小鼠）的IgG型抗体的Fc片段有很强的亲和力。ProteinA与抗体的结合能力根据抗体同种型（isotype）的不同而不同。

■ 产品特点

· 快速方便：从上样到洗脱，室温下操作小量纯化仅需5 min，无需孵育 · 一次性使用：有效减少样品间的交叉污染，受protein A性质影响，纯化抗体的产量因物种    和抗体同种型的不同而有所差别 · 高质量：样品停留时间短，从而有效地防止了抗体降解及失活，保障了下游应用的成功率 · 高纯度、高浓度：柱床体积小，带入污染少，可实现大体积洗涤，小体积洗脱 · 高灵活性：可从广泛来源的样品中纯化抗体，如动物血清、腹水、细胞培养基等

注：Capturem™ Protein A 24-Well Plate-HC（Code No. 635743）经过优化，与旧版本产品（Code No. 635731）相比，收量更高。

■ Capturem™ 膜原理

■ 产品主要参数

* 注：Maxiprep需要50 ml tube使用的离心机，24 well、96 well 需要24孔板、96孔板适用的离心机或真空过滤装置。(以下产品：Capturem Protein A Maxiprep、Capturem Protein A Miniprep、Capturem Protein A 96-well Plate已停止售卖)

Capturem Protein A Miniprep与不同物种来源的抗体的结合能力

物种 亲和力 (μg/column)* Goat 100-150 Horse >150 Human >150 Mouse 100-150 Rabbit 50-100 Rat >150 Sheep >150

*使用磷酸盐结合缓冲液(pH8.0)对不同物种来源的总血清进行稀释然后经Capturem Protein A Miniprep 纯化，产物的量通过测定其在280 nm处的吸光度进行计算。

■ Protein A和Protein G对于不同来源和亚型抗体的亲和性

Species Antibody subtype Protein A Protein G Protein A/G Human Total lgG +++ +++ +++ lgG1 +++ +++ +++ lgG2 +++ +++ +++ lgG3 + +++ +++ lgG4 +++ +++ +++ lgM + – + lgD – – – lgA1 + – + lgA2 + – + Fab + + + scFv + – + Mouse Total lgG +++ +++ +++ lgM – – – lgG1 + ++ ++ lgG2a +++ +++ +++ lgG2b +++ +++ +++ lgG3 +++ +++ +++ Rat Total lgG + ++ ++ lgG1 + ++ ++ lgG2a – +++ +++ lgG2b – + + lgG2c +++ +++ +++ Rabbit Total lgG +++ +++ +++

+++ strong binding ++ medium binding + weak binding – no binding

■ 操作流程

■ 产品性能

■ 实验例

从杂交瘤培养上清液中筛选Cas9的单克隆抗体。所有克隆均是小鼠IgG1同种型，所以使用高盐法进行纯化。选择Capturem™ Protein A Maxiprep，使用6 ml buffer (配方10 mM sodium borate, pH 8.9, 3 M NaCl)进行平衡，2,000 x g 离心3 min。向抗体上清原液中加入1/10体积的1 M sodium borate（pH8.9）将NaCl浓度调节至3.3 M。取20 ml上清液上样，2,000 x g 离心3 min，流出液重复上样一次，尽可能多的结合抗体。然后使用10 ml wash buffer（配方3 M NaCl, 10 mM sodium borate, pH8.9）洗涤，最后用0.5 ml的elution buffer(配方100 mM glycine, pH3.0)洗脱，收集管中需预先添加有50 μl 的中性buffer（配方1 M tris, pH8.5），使用少量elution buffer洗脱以便获得高浓度抗体产物。图A，SDS-PAGE 凝胶电泳检测纯化产物。图B，将Cas9表达量低(lane #1)和高(lane #2)的细胞裂解液分别进行凝胶电泳并转膜，再使用Capturem™ Protein A Maxiprep纯化得到的抗体对其进行免疫印迹反应。图C，使用筛选到的抗体，对不同比例稀释(从左至右: 20 ng, 10 ng, 5 ng, 2.5 ng, 1.25 ng, 0.625 ng)的Cas9 蛋白质进行免疫印迹反应

实验操作视频：

https://www.takarabio.com/learning-centers/protein-research/his-tag-purification/protocols/video-capturem-his-miniprep

页面更新：2023-04-23 10:45:28