心肌细胞乙酰胆-碱诱导试剂 SNPiP细胞培养-Wako富士胶片和光

心肌细胞乙酰胆-碱诱导试剂 SNPiP细胞培养-Wako富士胶片和光

供货周期 一个月以上 应用领域 生物产业

SNPiP是以一种被称为NO供体的SNAP基本骨架为基础所开发的一种新型NO供体,开发者为日本医科大学的柿沼教授和中村教授。这是一种能够提高心脏中非神经型胆-碱能系统(non-neuronal cardiac cholinergic system,NNCCS)活性的化合物(专-利申请 2020-549467),诱导心肌细胞(非神经元)产生乙酰胆-碱,已证实其能够改善心脏功能。

心肌细胞乙酰胆,碱诱导试剂心肌细胞乙酰胆-碱诱导试剂 SNPiP细胞培养-Wako富士胶片和光

SNPiP

,
,

SNPiP是以一种被称为NO供体的SNAP基本骨架为基础所开发的一种新型NO供体,开发者为日本医科大学的柿沼教授和中村教授。这是一种能够提高心脏中非神经型胆,碱能系统(non-neuronal cardiac cholinergic system,NNCCS)活性的化合物(专-利申请 2020-549467),诱导心肌细胞(非神经元)产生乙酰胆,碱,已证实其能够改善心脏功能。

心肌细胞乙酰胆-碱诱导试剂 SNPiP细胞培养-Wako富士胶片和光

◆产品数据

SNPiP给药后72 h对心脏功能的影响

心肌细胞乙酰胆-碱诱导试剂 SNPiP细胞培养-Wako富士胶片和光

图1. SNPiP给药后72 h对心脏功能的影响

(数据提供:日本医科大学 生物防治科学领域 柿沼由彦老师)


向雄性C57BL6/J小鼠(10周龄以后)腹腔给药1 nmol SNPiP(在DMSO中溶解),并在72 h后对其心脏功能进行评估。与给药1 nmol SNAP的小鼠进行对比后,发现舒张末期容积(EDV)、每搏输出量(SV)、心输出量(CO)以及射血分数(EF)的数值均有所上升,但心率则没有变化。因此,表明SNPiP能够增强心脏舒张功能。与给药后24 h后相比,对心脏功能的影响在给药后48~72 h更为明显。由SNPiP引起的心脏乙酰胆,碱(ACh)生成过程也与上述情况类似,即在48~72 h达到峰值。因此,SNPiP具有增强心脏舒张功能的特异性药理作用。

另一方面,在非神经型心脏ACh生成亢进小鼠(NNCCS功能亢进小鼠)中同样也观察到了SV、EDV、CO、EF的增加,推测NNCCS对SNPiP产生的效果也有所贡献。



SNPiP的药理作用

心肌细胞乙酰胆-碱诱导试剂 SNPiP细胞培养-Wako富士胶片和光

心肌细胞乙酰胆-碱诱导试剂 SNPiP细胞培养-Wako富士胶片和光

图2. 心脏心室肌内的ACh量(72 h)

(数据提供:日本医科大学 生物防治科学领域 柿沼由彦老师)

图3. SNPiP诱导的HEK293细胞产生的Ach量随时间发生的变化

向C57BL6/J雄性成年小鼠的腹腔或静脉给药1 nmol SNPiP溶液,可以观察到切除心脏的心室肌中的ChAT蛋白表达水平增加,且心脏心室肌内Ach的生成量增加(图2)。该应答缓慢,在给药后48~72 h反应明显,表明SNPiP可诱导NNCCS的功能亢进。

in vitro细胞中也可确认SNPiP这种特征效应。除了心肌细胞之外,在保留了ACh生成功能的细胞中(例如HEK293细胞),SNPiP给药后细胞内的ACh生成功能也有所增强,可在反应48 h后观察到峰值(图3)。

SNPiP对以心脏舒张功能障碍为主要病理特征的小鼠心脏功能障碍的作用

心肌细胞乙酰胆-碱诱导试剂 SNPiP细胞培养-Wako富士胶片和光

图4. SNPiP对db/db小鼠心脏功能的影响

(数据提供:日本医科大学 生物防治科学领域 柿沼由彦老师)

针对SNPiP对以心脏舒张功能障碍为主要病理特征的db/db小鼠心脏功能障碍是否有效进行了探讨。结果表明,即使在肥胖、高血糖且伴随心脏舒张功能下降的db/db小鼠中,SNPiP仍能调整其心脏舒张功能,并增加心输出量(图4)。

物理特性

外观:微浅蓝绿色~暗绿色,结晶型粉末~粉末

溶解度:溶于乙醇、丙-酮和二甲亚砜,难溶于水。

◆别名一览

S-亚硝基-N-新戊酰基-D-青,霉胺

T-亚硝基-N-新戊酰基-D-青,霉胺

◆产品列表


产品编号 产品名称 产品规格 产品等级
197-19151 SNPiP 10 mg 细胞生物学用

内胚层监测试剂盒细胞培养-Wako富士胶片和光

内胚层监测试剂盒细胞培养-Wako富士胶片和光

供货周期 一个月以上 应用领域 生物产业

内胚层监测试剂盒
本品使用ELISA(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay)法检测培养上清中的Marker蛋白质,因此可以在不损坏细胞的情况下,继续培养细胞并监测其分化状态。另外,本品可用于多检体测定,因此认为可用于分化诱导剂等药物筛选。

内胚层监测试剂盒

 

  本品使用ELISA(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay)法检测培养上清中的Marker蛋白质,因此可以在不损坏细胞的情况下,继续培养细胞并监测其分化状态。另外,本品可用于多检体测定,因此认为可用于分化诱导剂等药物筛选。

 

◆特点

● 特异性检测ES/iPS细胞分化内胚层

● 在不损坏细胞的情况下,继续培养细胞并监测其分化状态

● 可短时间检测多检体

 

◆试剂盒组成

● Coated 96-well Strip Plate ……… 1个

● Standard…………………………………..1支

● Reagent A………………..……………….1支

● Reagent B……………………..…………..1支

● Washing Buffer……..…………….…..1支

● Storage……………..……….…0.5mL×1支

● Substrate Solution……..…10m1支

● Plate Seal……………………………..…..3片

 

  胚胎干细胞或多能性干细胞经由三胚层(内胚层、中胚层、外胚层)可分化所有细胞,因此在实现再生医疗方面备受瞩目。三胚层中内胚层细胞是分化成人类重要机能器官如胰脏、肝脏的细胞,为了确保处于正确的分歧点,有效率的细胞分化诱导和分化度的确认是*的。我们通过测定mRNA或细胞内蛋白质的表达量确认细胞分化程度。为了能判断上述物质的表达量,需破坏一部分的培养细胞。

  本品通过检测培养上清中的Marker蛋白质,可检测ES/iPS细胞到内胚层细胞的分化程度。这些Marker蛋白与内胚层Marker Sox17、Foxa2双阳性细胞率相关。

内胚层监测试剂盒细胞培养-Wako富士胶片和光

图1.人iPS细胞分化为内胚层的培养上清中Marker蛋白每天的量及内胚层比例(Sox17,Foxa2双阳性细胞)的关系。

A)培养上清中Marker蛋白每天的分化量

B) 内胚层细胞每天分化的比例

 

◆产品列表

产品编号 产品名称 包装
342-91701 内胚层监测试剂盒 96 test

eppendorf 艾本德细胞培养离心机套装

eppendorf 艾本德细胞培养离心机套装

eppendorf 艾本德细胞培养离心机套装

产品编号:
市场价:¥0.00
会员价:¥0.00
品牌:EPPENDORF 艾本德
生产厂家:eppendorf 艾本德

  • 产品概览
  • 技术参数
  • 订购信息
  • 相关资料
  • 相关产品

如果您需要可以离心不同样品通量的冷冻或非冷冻型离心机,以下 Eppendorf 离心机套装必有一款能满足您的需求:

细胞培养离心机套装具有完美的水平转子,适用于离心标准 15 ml和 50 ml Falcon® 管。

 

细胞培养离心机套装包括:

  • 5702、5804/5804 R 或 5810/5810 R 离心机
  • 水平转子含吊篮
  • 4 个适配 15 ml Falcon 管的适配器
    (2 套,每套 2 个)
  • 4 个适配 50 ml Falcon 管的适配器
    (2 套,每套 2 个
细胞培养离心机套装
每个适配器 / 每个转子的试管数量
15 ml Falcon 管 50 ml Falcon 管
5702 适配水平转子 A-4-38 和圆形吊篮 2 / 8 1 / 4
5804/5804 R 适配水平转子 A-4-44 和矩形吊篮 4 / 16 1 / 4
5810/5810 R 适配水平转子 A-4-62 和矩形吊篮 9 / 36 4 / 16
5810/5810 R 适配水平转子 A-4-81 和矩形吊篮 12 / 48 5 / 20

LabAssay™ 肌酐检测试剂盒细胞培养-Wako富士胶片和光

LabAssay™ 肌酐检测试剂盒细胞培养-Wako富士胶片和光

供货周期 一个月以上 应用领域 生物产业

LabAssay™ 肌酐检测试剂盒
肌酐是在肌肉和神经中由磷酸肌酸直接产生或通过肌酸脱水产生的物质。肌酐作为代谢废物,被肾小球过滤并排出体外。本产品为通过Jaffé 反应的高特异性肌酐检测试剂盒,可通过微孔板法检测小鼠血清和尿液中的肌酐。

LabAssay™ Creatinine LabAssay™ 肌酐检测试剂盒细胞培养-Wako富士胶片和光

LabAssay™ 肌检测试剂盒


 

肌酐是在肌肉和神经中由磷酸肌酸直接产生或通过肌酸脱水产生的物质。肌酐作为代谢废物,被肾小球过滤并排出体外。本产品为通过Jaffé 反应的高特异性肌酐检测试剂盒,可通过微孔板法检测小鼠血清和尿液中的肌酐。

检测原理

向样品中加入去蛋白试剂并沉淀后,取上清。当 kǔ wèi 酸作用于该上清时,样品中的肌酐在碱性溶液中与 kǔ wèi 酸反应产生橙红色的缩合物(即Jaffé反应)。通过测定这种橙红色的吸光度,可计算样品中肌酐的含量。

LabAssay™ 肌酐检测试剂盒细胞培养-Wako富士胶片和光

◆试剂盒组成

1.去蛋白试剂——150 mL×1瓶  

2. kǔ wèi 酸试剂( kǔ wèi 酸 22 mmol/L)——50 mL×1瓶  

3.0.75 mol/L氢氧化钠溶液——50 mL×1瓶  

4.10 mg/dL肌酐标准溶液——15 mL×1瓶 

◆试剂盒性能

● 标准曲线范围:2.5~10 mg/dL(mg/100mL)

● 检测时间:约40 min

● 样品:血清、血浆(小鼠、大鼠、人)
● 所需样品量:50 μL
● 测定波长:520 nm

◆标准曲线示例

LabAssay™ 肌酐检测试剂盒细胞培养-Wako富士胶片和光

◆检测操作方法

微孔板法

根据下表条件进行反应。

Tests

标准

空白

第一步操作在样品管内完成

样品

样品50 μL

标准溶液50 μL

蒸馏水50 μL

去蛋白试剂

300 μL

300 μL

300 μL

充分混合。在室温静置10 min。以大于2500 rpm的转速离心10 min。

后续操作在孔板中进行。

上 清

100 μL

100 μL

100 μL

在25℃~30℃下静置

kǔ wèi 酸试剂

50 μL

50 μL

50 μL

0.75mol/L氢氧化钠溶液

50 μL

50 μL

50 μL

在25℃~30℃下静置20 min。

以空白为对照,30 min内测定样品及标准溶液的吸光度(波长:520 nm)

◆数据

加标回收测试

肌酐的加标回收测试,将已知含量的标准品加标到人、小鼠、大鼠样品中,n=2。

人样品

人样品

添加量(mg/dL)

实测值(mg/dL)

回收量(mg/dL)

回收率 (%)

血清样品

3.68

2.71

6.37

2.7

99.6

3.55

7.1

3.42

96.3

4.21

7.55

3.87

91.9

血浆样品(EDTA)

3.43

3.3

6.47

3.04

95.2

4.33

7.39

3.96

91.5

5.13

7.69

4.26

83

血浆样品(肝素)

3.37

3.31

6.97

3.6

109

4.34

7.86

4.49

103

5.14

8.21

4.84

94.2

小鼠样品

小鼠样品

添加量(mg/dL)

实测值(mg/dL)

回收量(mg/dL)

回收率 (%)

血清样品

2.68

3

5.9

3.22

107

5.14

8.08

5.4

105

6.74

8.9

6.22

92.3

血浆样品(EDTA)

3.14

2.71

5.63

2.49

91.9

4.65

7.74

4.6

98.9

6.1

8.25

5.11

83.8

血浆样品(肝素)

3.01

2.85

5.48

2.47

86.7

4.88

7.74

4.73

96.9

6.41

8.6

5.59

87.2

大鼠样品

大鼠样品

添加量(mg/dL)

实测值(mg/dL)

回收量(mg/dL)

回收率 (%)

血清样品

2.86

3.27

5.61

2.75

84.1

5.6

8.13

5.27

94.1

7.35

9.34

6.48

88.2

血浆样品(EDTA)

2.78

2.79

5.22

2.44

87.5

4.78

8.3

5.52

115

6.27

9.22

6.44

103

血浆样品(肝素)

2.88

3.17

5.53

2.65

83.6

5.43

8.25

5.37

98.9

7.13

9.27

6.39

89.6

◆样品检测示例

人样品

测定值(mg/dL)

平均值

SD

CV(%)

人血清

3.69

3.67

3.68

0.012

0.33

人血浆(EDTA)

3.43

3.44

3.43

0.0071

0.21

大鼠血清

序号

测定值(mg/dL)

平均值

SD

CV(%)

备注

1

0.553

0.546

0.55

0.0049

0.9

参考值

2

0.716

0.824

0.77

0.076

9.9

参考值

3

1.12

1.26

1.19

0.095

8

参考值

4

1.22

1.29

1.25

0.05

4

参考值

5

1.04

0.994

1.01

0.029

2.9

参考值

大鼠血浆(EDTA)

序号

测定值(mg/dL)

平均值

SD

CV(%)

备注

1

0.319

0.288

0.304

0.022

7.2

参考值

2

0.638

0.627

0.633

0.0078

1.2

参考值

3

0.824

0.871

0.848

0.033

3.9

参考值

4

0.661

0.681

0.671

0.014

2.1

参考值

5

0.205

0.233

0.219

0.02

9

参考值

小鼠血清

序号

测定值(mg/dL)

平均值

SD

CV(%)

备注

1

0.199

0.205

0.202

0.0042

2.1

参考值

2

0.492

0.507

0.5

0.011

2.1

参考值

3

0.734

0.722

0.728

0.0085

1.2

参考值

4

0.641

0.716

0.679

0.053

7.8

参考值

5

0.192

0.219

0.206

0.019

9.3

参考值

小鼠血浆(EDTA)

序号

测定值(mg/dL)

平均值

SD

CV(%)

备注

1

0.095

0.103

0.099

0.0057

5.7

参考值

2

0.607

0.559

0.583

0.034

5.8

参考值

3

0.556

0.528

0.542

0.02

3.7

参考值

4

0.49

0.546

0.518

0.04

7.6

参考值

5

0.113

0.11

0.112

0.0021

1.9

参考值

◆稀释线性度测试

LabAssay™ 肌酐检测试剂盒细胞培养-Wako富士胶片和光

LabAssay™ 肌酐检测试剂盒细胞培养-Wako富士胶片和光

LabAssay™ 肌酐检测试剂盒细胞培养-Wako富士胶片和光

点击 http://labchem.fujifilm-wako.com.cn/product/show/31.html 了解LabAssay™系列试剂盒。

产品编号 产品名称 产品规格
636-51011 LabAssay™ Creatinine
LabAssay™ 肌酐检测试剂盒
500 tests

※ 产品已更新,旧编号为:290-65901



参考文献

1.

Kawamoto, T. et al. : Glycative Stress Res., 3, 15 (2016). Relationships between urinary melatonin metabolites and glycative stress and body functional age ※人尿


2.

Guan, Y. et al. : J. Pharmacol. Sci., 135, 81 (2017). A protease-activated receptor-1 antagonist protects against podocyte injury in a mouse model of nephropathy ※小鼠尿、血浆


3.

Ito, K. et al. : Biol. Pharm. Bull., 38, 1169 (2015). Increased Milk Protein Concentration in a Rehydration Drink Enhances Fluid Retention Caused by Water Reabsorption in Rats ※大鼠尿、血


4.

Ito, K. et al. : Biol. Pharm. Bull., 38, 1169 (2015). Increased Milk Protein Concentration in a Rehydration Drink Enhances Fluid Retention Caused by Water Reabsorption in Rats ※大鼠尿、血浆

5.

Ito, K. et al. : Biol. Pharm. Bull., 38, 1169 (2015). Increased Milk Protein Concentration in a Rehydration Drink Enhances Fluid Retention Caused by Water Reabsorption in Rats ※大鼠尿、血


6.

Toyama, K. et al. : Br. J. Pharmacol., 166, 1183 (2012). Loss of multidrug and toxin extrusion 1 (MATE1) is associated with metformin-induced lactic acidosis ※小鼠血


LabAssay™ 肌检测试剂盒

96孔细胞培养板(平底带盖,独立包装)黑底黑盖

96孔细胞培养板(平底带盖,独立包装)黑底黑盖

货号:BS-MP-96B

规格: 96孔/块

品牌:biosharp

商品详情:

 产品描述:

96孔平底细胞培养板,又称酶标板、发光板,主要是用于化学发光仪、酶标仪等仪器来进行荧光分析及化学分析等。

 

产品特性:

-尺寸:127.4×85.1×16.1 mm

-材料为高品质聚苯乙烯材料,超精密模具及全自动化生产工艺生产

-颜色有黑色/白色两款,黑色板具有低荧光背景,光散射降到了最低,最大限度的减少孔之间的干扰;白色板能够增强荧光信号,同时保证了低荧光背景

-底部为平底非透明,单孔体积为360ul,推荐工作体积为75-200ul,培养面积约0.34cm2

-板盖单方向盖合设计,并带有凝聚环,减少污染;盖子结合松紧适中,有助透气,防止培养基污染、耗损。

-表面经过TC处理,细胞贴壁效果更好

-孔缘具有突出设计,有效防止交叉污染;左侧和上侧标有字母和数字,方便定位

-层叠设计,占用空间更少,便于批量实验

-伽马射线灭菌,无DNA酶,无RNA酶,纸塑独立包装

 

规格:96孔/块 50块/箱

货号 BS-MP-96B
规格 96孔/块
品牌 biosharp

细胞培养基质 层粘连蛋白511细胞培养-Wako富士胶片和光

细胞培养基质 层粘连蛋白511细胞培养-Wako富士胶片和光

供货周期 一个月以上 应用领域 生物产业

细胞培养基质 层粘连蛋白511
◆什么是层粘连蛋白511?
层粘连蛋白是存在于动物基底膜的一种细胞外基质,已知其与细胞粘附和增殖息息相关。本产品是与层粘连蛋白511-E8片段有同一序列的重组蛋白,是可以促进各种细胞粘附和伸展的培养基质。
大阪大学和京都大学共同研究开发,本产品已证明在操作难度非常大的人iPS细胞和人ES细胞培养中,也可以安全且高效地进行细胞培养。

细胞培养基质 层粘连蛋白511细胞培养-Wako富士胶片和光细胞培养基质 层粘连蛋白511

iMatrix-511

 

 

细胞培养基质 层粘连蛋白511细胞培养-Wako富士胶片和光

 

细胞培养基质 层粘连蛋白511细胞培养-Wako富士胶片和光

 

 

◆什么是层粘连蛋白511?

 

细胞培养基质 层粘连蛋白511细胞培养-Wako富士胶片和光

  层粘连蛋白是存在于动物基底膜的一种细胞外基质,已知其与细胞粘附和增殖息息相关。本产品是与层粘连蛋白511-E8片段有同一序列的重组蛋白,是可以促进各种细胞粘附和伸展的培养基质。

  大阪大学和京都大学共同研究开发,本产品已证明在操作难度非常大的人iPS细胞和人ES细胞培养中,也可以安全且高效地进行细胞培养。

 

 

● 细胞培养的准备非常简单!

● 可用于多种类型的细胞培养!

● 无论分离细胞的状态如何,可实现细胞的高生存率和细胞增殖的高效性!

● 重组蛋白(CHO-S细胞来源),所以混入杂质的危险性低!

● 溶液型试剂,无需溶解,稀释后可直接使用

 

细胞培养基质 层粘连蛋白511细胞培养-Wako富士胶片和光

 

  层粘连蛋白511是由α5链、β1链和γ1链组成的层粘连蛋白。层粘连蛋白511-E8是层粘连蛋白片段,但其具有与层粘连蛋白全长分子相同的α6β1整合蛋白连接功能。

  本产品是Nippi根据大阪大学和京都大学的*技术生产商品化的。

 

 

使用方法

 

  用PBS(-)稀释本产品,按照0.1~0.5 μg/cm2加入细胞培养器皿中。

  ※由于细胞种类和细胞株的不同、使用的培养基种类不同,添加的最适剂量会有差异,

     初次使用时,按照0.5 μg/cm2添加培养容器中,逐渐调整至最.佳使用浓度。

         

  室温下孵育3小时,然后去掉溶液。

         

  添加细胞和培养液,进行细胞培养。

● 培养ES/iPS细胞时,可进行无饲养层和单细胞继代培养

 

 

使用案例

 

细胞培养基质 层粘连蛋白511细胞培养-Wako富士胶片和光

 

  使用本产品对表皮细胞培养0.5小时,对血管内皮细胞培养1小时。

  (a) 表皮细胞,培养0.5小时
          左(无涂层):大部分细胞未贴壁。
          右(iMatrix):多数细胞贴壁并成伸展状态。

  (b) 血管内皮细胞,培养1小时
          左(无涂层):有贴壁的细胞,但大部分多为圆形。
          右(iMatrix):较少观察到圆形细胞,几乎所有的细胞表现出了很好的伸展性。

          实验人员: (株)Nippi BioMatrix研究所 藤崎

 

 

iMatrix-511与iMatrix-511 silk的区别

 

 

iMatrix-511

iMatrix-511 silk

生产系统

转基因CHO-S细胞

转基因蚕生产系统

提纯材料

CHO-S细胞培养上清

蚕蛹蛋白

产品等级

实验研究用* *有临床用级别

实验研究用

导入基因

人层粘连蛋白511-E8片段

纯度

95%以上

浓度

0.5 mg/mL

解离常数

10 nM以下

使用期限

生产后2年内

iPS细胞培养能力

添加0.5 μg/cm2到培养容器中,可用于iPS细胞的维持培养

 

 

产品列表

 

产品编号

生产商编号

产品名称

包装

385-07361

892011

层粘连蛋白511-E8片段,

溶液(0.5 mg/mL)

175 µg×2(350 µL×2)

381-07363

892012

175 µg×6(350 µL×6)

 

 

需要计算实验中iMatrix-511使用量,请点击:iMatrix 计算器

产品的相关技术文章,请点击:使用层粘连蛋白的非包被法对人hPSC进行有效的贴壁培养

 

胰蛋白酶抑制剂,大豆源细胞培养-Wako富士胶片和光

胰蛋白酶抑制剂,大豆源细胞培养-Wako富士胶片和光

供货周期 一个月以上 应用领域 生物产业

胰蛋白酶抑制剂, 大豆源

本品是来源于大豆的胰蛋白酶活性抑制蛋白质。因此,可将其用于抑制胰蛋白酶参与的细胞分散和细胞剥离。

胰蛋白酶抑制剂,大豆源胰蛋白酶抑制剂,大豆源细胞培养-Wako富士胶片和光

 

 

  本品是来源于大豆的胰蛋白酶活性抑制蛋白质。因此,可将其用于抑制胰蛋白酶参与的细胞分散和细胞剥离。

 

 

◆产品介绍

 

胰蛋白酶抑制剂,大豆源细胞培养-Wako富士胶片和光

 

  • 外观:白色~浅褐色、结晶~结晶性粉末

  • 溶解性:可溶于水、磷酸缓冲液

  • 内毒素:7 EU/mg (*产品)

  • 活性:4,800 USP units/mg(*产品)

 

 

◆产品列表

 

产品编号 产品名称 规格
206-20121

胰蛋白酶抑制剂,大豆来源

100mg
202-20123 250mg

 

 

  富士胶片和光(广州)贸易有限公司是日本富士胶片和光纯药株式会社(FUJIFILM Wako Pure Chemical Corporation,以下称”富士胶片和光”)在中国的子公司,主营富士胶片和光品牌试剂产品,囊括合成与材料、分析、培养、生命科学、药品生产与品质管理领域。和光纯药工业株式会社(前武田药品工业株式会社)成立于1922年,2017年被富士胶片集团全面收购而成为集团成员之一。富士胶片和光是日本的试剂企业,也是优质的试剂供应商,在美国、欧洲和中国都设有分公司。自成立以来,一直致力于高品质的试剂生产与开发,并获得ISO9001,ISO/IEC17025,ISO14000等(部分)多项认证。

  通过对本次收购,富士胶片集团将充分发挥其在胶片领域积累的化学合成、纳米、生产等技术,在医疗健康事业、高性能材料事业两个核心业务中实现协同增效作用。尤其是医疗健康事业,在颇具市场潜力的再生医学、生物制药等领域都将产生巨大的协同增效作用。

  富士胶片和光所供应的FUJIFILM Wako品牌试剂产品超过50,000多种,涉及生命科学、分析化学、有机、无机化学、生物工程、高纯度及认证标准品、食品、医药、环境分析、疾病和有效治疗研究、再生医疗研究、天然提取物、中药研究等,从基础研究至关乎人类健康的前沿的生命科学研究都有相关产品。

  随着富士胶片集团对生命科学领域的更大重视和投入,今后富士胶片和光将继续为中国客户提供更多前沿、品质可靠的产品。

重组羧肽酶B(RCPB)细胞培养-wako富士胶片和光

重组羧肽酶B(RCPB)细胞培养-wako富士胶片和光

供货周期 一个月以上 应用领域 生物产业

重组羧肽酶B(RCPB)
◆概述
羧肽酶B(E.C 3.4.17.2)属金属羧肽酶A和羧肽酶B(CPA/CPB)家族,可选择性水解蛋白或多肽羧基端的Arg和Lys。不同于切割芳香族或脂肪类氨基酸残基的羧肽酶A,羧肽酶B优先切割碱性氨基酸※,同时也能切割一些非碱性氨基酸。重组CPB的活性受到典型的金属螯合剂如EDTA,及Cu2+,Hg2+抑制;而Zn2+,Mn2+等金属离子则能够不同程度提高酶活。

重组羧肽酶B(RCPB)重组羧肽酶B(RCPB)细胞培养-wako富士胶片和光

 

 

重组羧肽酶B(RCPB)细胞培养-wako富士胶片和光

 

 

◆概述

 

羧肽酶B(E.C 3.4.17.2)属金属羧肽酶A和羧肽酶B(CPA/CPB)家族,可选择性水解蛋白或多肽羧基端的Arg和Lys。不同于切割芳香族或脂肪类氨基酸残基的羧肽酶A,羧肽酶B优先切割碱性氨基酸,同时也能切割一些非碱性氨基酸。重组CPB的活性受到典型的金属螯合剂如EDTA,及Cu2+,Hg2+抑制;而Zn2+,Mn2+等金属离子则能够不同程度提高酶活。CPB的适pH为8.0,偏酸或偏碱均会造成活性下降,pH接近5.0时活性接近零,pH>12.0时活性*丧失。CPB在一定温度内(<60 ℃)活性随温度升高而上升。

 

※碱性氨基酸:水解生成的氢氧根负离子多于氢正离子的氨基酸,其特点是侧链常含有可质子化的碱性化学基团。包括以下三种:

 

中文名

英文名

缩写

符号

等电点

精氨酸

Arginine

Arg

R

10.76

赖氨酸

Lysine

Lys

K

9.74

组氨酸

Histidine

His

H

7.59

 

 

◆优势

 

 

● 单批次产量大,批间差小

● 高纯度,高比活性

● 无外源性病毒污染,无动物源生产原料

 

 

◆应用范围

 

生产工艺:重组胰岛素及其类似物的生产制备工艺,重组多肽类药物的生产制备工艺等。

质控与科研:单克隆抗体的质量检测,蛋白质C-末端氨基酸测定等。

 

 

◆纯度

 

SDS-PAGE显示纯度>90%。

 

 

◆使用方法

 

保存:25 mmol/L Tris-HCl, pH 7.6或无菌水;溶解后分装-15 ℃以下保存。

酶切体系:pH 7.5~9.0;

推荐使用量:蛋白酶:融合蛋白质量比1:50~1:1000

 

 

◆保存条件

 

储存稳定性:冻干粉存于-15 ℃以下,24个月稳定;25 mmol/L Tris-HCl,pH 7.6溶解后分装储存于-15 ℃以下,

储存稳定性:反复冻融5次,活性无损失;溶解后2~8 ℃保存建议不超过3 d。

运输稳定性:冰袋保温运输,活性稳定。

 

 

◆应用实例

 

RCPB特异性酶切合成短肽

合成多肽序列YGKRLWK,理论酶切位点酶切产物YGKRLW及K,蛋白酶:合成多肽质量比1:5000,37 ℃酶切反应10 min,LC-MS验证酶切反应特异性。

 

重组羧肽酶B(RCPB)细胞培养-wako富士胶片和光

 

Peak#

R.T.

M.W.

Sequence

Peak 1

7.06 min

950.15

YGKRLWK

Peak 2

8.27 min

821.98

YGKRLW

 

 

 

◆产品信息

 

产品编号

产品名称

规格

比活

RCPB0302

RCPB

10 mg

150 U/mg

RCPB0304

RCPB

10 μg

150 U/mg

 

 

◆相关产品

 

产品编号

产品名称

规格

储存条件

其他信息

MDRK0301

重组羧肽酶B检测试剂盒

96 孔

2~8 ℃

检测范围:
15.6~1000 ng/mL

 

特异性标记、纯化ER驻留蛋白的试剂盒细胞培养-Wako富士胶片和光

特异性标记、纯化ER驻留蛋白的试剂盒细胞培养-Wako富士胶片和光

供货周期 一个月以上 应用领域 生物产业

特异性标记、纯化ER驻留蛋白的试剂盒
ER-Protein Capture Kit
ER-Protein Capture kit是一款利用荧光标记物特异性标记ER驻留蛋白,再使用标签捕获抗体通过免疫沉淀法纯化标记蛋白的试剂盒。可用于ER相关蛋白的全面鉴定与定量分析有或无刺激(例如内质网应激)下靶蛋白的ER驻留量。

特异性标记、纯化ER驻留蛋白的试剂盒特异性标记、纯化ER驻留蛋白的试剂盒细胞培养-Wako富士胶片和光

ER-Protein Capture Kit

 

 

ER-Protein Capture kit是一款利用荧光标记物特异性标记ER驻留蛋白,再使用标签捕获抗体通过免疫沉淀法纯化标记蛋白的试剂盒。可用于ER相关蛋白的全面鉴定与定量分析有或无刺激(例如内质网应激)下靶蛋白的ER驻留量。

 

 本产品是funakoshi基于京都大学工学研究科浜地格教授、田村朋则讲师的研究成果商品化销售的产品。

 本产品仅供研究使用。研究以外不可使用。

 

◆ER蛋白的回收方法与问题点

ER (内质网;Endoplasmic Reticulum)是一种通常在细胞内占据约20%体积的细胞器,结构非常复杂且遍布整个细胞。ER是负责细胞内蛋白质生物合成的中央细胞器,在多肽链合成、通过伴侣蛋白适当折叠、排除异常蛋白等,从生物合成到品质管理中起着重要作用。ER还担任分泌路径的一部分,是细胞膜蛋白和细胞外分泌蛋白通过的细胞器。另外,它还被认为对于脂质代谢和脂肪滴形成十分重要,因此能够分离、鉴定并定量分析ER蛋白的方法备受期待。然而,不同于其他细胞器,特异性纯化ER的的技术十分贫乏,选择性回收ER蛋白并不容易。

ER Protein Capture Kit是由京都大学浜地格教授、田村朋则讲师等开发的基于ER驻留蛋白标记技术商品化的ER蛋白选择性标记、纯化试剂盒。通过使用ER驻留蛋白标记试剂ERM ER-localizable Reactive Molecule),可以利用荧光标记物标记ER驻留蛋白,然后通过针对该标记物的特异性抗体进行纯化,选择性回收ER蛋白。无需超速离心机等特殊的机器,仅需简单操作便可纯化ER蛋白。除了能够通过蛋白组学进行全面鉴定外,本产品还适用于相对定量分析各种刺激处理下的ER驻留量。

 

◆试剂盒内容

本试剂盒由两部分组成。

A:ER驻留蛋白标记试剂ERM

A:(本试剂与产品名称为ERseeing、产品编号FDV-0038为同一试剂。可单独购买,也可以用作ER成像试剂)

B:标签捕获抗体(纯化兔多克隆IgG抗体)

A:※ 产品不包含用于细胞裂解液制备用的溶解缓冲液或免疫沉淀所需的Protein A / G树脂等。请另行购买。

 

◆原理和实验流程

ER驻留蛋白标记试剂ERM是一种在ER驻留性绿色荧光色素(Rhodol衍生物)上缀合蛋白标记基团的化合物。将ERM添加到活细胞后,由于色素部分的特性,显示出较高的ER驻留性。在ER中迅速浓缩后,通过蛋白标记基团用荧光标记物标记ER蛋白物(Step-1)。标记反应后破碎细胞制备细胞裂解液(Step-2),然后通过使用标签捕获抗体(抗Rhodol抗体)进行免疫沉淀(Step-3),可以选择性地回收被ERM标记的ER蛋白。由于回收的蛋白上带有荧光基团,使用SDS-PAGE分离后,可以通过CBB/银染或荧光成像仪检测出来(Step-4)。进行SDS-PAGE分离后,可以通过LC / MS进行全面蛋白组学分析或使用任何抗体的蛋白印迹法鉴定ER蛋白。

 

特异性标记、纯化ER驻留蛋白的试剂盒细胞培养-Wako富士胶片和光

 

◆原著论文

Fujisawa et al., J. Am. Chem. Soc., 140, 17060~17070 (2018). Chemical Profiling of the Endoplasmic Reticulum Proteome Using Designer Labeling Reagents.

 

◆实验参考数据

特异性标记、纯化ER驻留蛋白的试剂盒细胞培养-Wako富士胶片和光

 

■ ERM的激发/发射光谱

■ 激发光谱(蓝)以及发射光谱(绿)

■ ※ 适用于普通的绿色荧光色素FITC观察条件

 

特异性标记、纯化ER驻留蛋白的试剂盒细胞培养-Wako富士胶片和光

 

■ ER特异性检验

■ 通过与各种细胞器标记共染色评价本试剂的ER特异性。观察到ERM(100 nM)与ER标记试剂高度共定位(皮尔逊相关系数>0.9)。另一方面,未观察到本试剂与溶酶体标记、线粒体标记的共定位。高尔基体标记观察到部分共定位,应该是因为本试剂所标记的蛋白通过Golgi体运输从ER转移至分泌路径。此外,添加ER-Golgi运输抑制剂的话,会减少与高尔基体的共定位(详细请参考原著论文)。

 

应用实例

通过蛋白组学全面分析回收蛋白

使用ERM (100 nM)处理HeLa细胞后,破碎细胞制备细胞裂解液。在裂解液中加入标签捕获抗体,使用Protein A磁珠进行免疫沉淀回收标记蛋白。将回收的蛋白通过SDS-PAGE分离后,切出每个条带,在凝胶中用胰蛋白酶/ Lys-C消化制备LC/MS样品。通过MS分析鉴定出共146种蛋白,其中63种蛋白是数据库上的ER蛋白,或是个别论文中确认了ER驻留的蛋白。73种蛋白作为细胞膜、细胞外分泌蛋白以及高尔基体蛋白被鉴定出来,它们都是存在于细胞外分泌路径的蛋白。由于存在于细胞外分泌途径的蛋白会途经ER,当这些蛋白在ER的时候便会被标记。因此,检测出来的蛋白中ER蛋白与途经ER的蛋白约占93%。本实验中检测出与ER无关的蛋白有10种,约占7%。

 

特异性标记、纯化ER驻留蛋白的试剂盒细胞培养-Wako富士胶片和光

 

R应激引起的ER驻留蛋白变动量的定量评价

通过SILAC定量分析法分析ER应激诱导的ER驻留蛋白的变动量。准备两份细胞,一份在SILAC Heavy标记培养基中培养,另一份在Light标记培养基中培养。在Heavy标记培养基的细胞中添加ER应激诱导试剂Tunicamycin培养4 h。而Light标记培养基无需任何处理培养4 h。之后,使用ERM(100 nM)处理1 h,分别制备细胞裂解液,再以1:1的比例混合。通过免疫沉淀法回收混合裂解液中的标记蛋白,然后与上述实验一样,制备LC/MS用样品。检测出了87种可相对定量的蛋白,再通过SILAC法算出由ER应激引起的变动量。其中6种蛋白因ER应激在ER上的存在量增加了两倍以上。

 

特异性标记、纯化ER驻留蛋白的试剂盒细胞培养-Wako富士胶片和光

 

 产品列表 

产品编号 产品名称 包装
 FDV-0039  ER-Protein Capture Kit  1 Kit

 

 特异性标记、纯化ER驻留蛋白的试剂盒