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牛痘病毒加帽系统 收藏
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小鼠 RNase 抑制剂
特性
体内或体外翻译前 mRNA 的加帽
标记 mRNA 5´ 末端
概述
牛痘病毒加帽体系利用牛痘病毒加帽酶及其它组份，将 7-甲基鸟苷帽结构（Cap 0）加到 RNA 的 5´ 末端。在真核生物中，该类末端帽结构影响到 mRNA 的稳定、转运和翻译。使用酶促反应为 RNA 加帽是一种简单有效的方法，对用于体外转录、转染和显微注射的 RNA，能改善其稳定性和翻译能力。另外，反应中所用到的标记 GTP 还能提供一种便捷的标记方法，将 5´ 末端带有三磷酸的任何 RNA 进行标记。
牛痘病毒加帽酶由两个亚基（D1 和 D12）组成，具有三种酶活性（D1 亚基具有 RNA 三磷酸酶和鸟苷转移酶活性；D12 亚基具有鸟嘌呤甲基转移酶活性），所有这些活性都是添加一个完整的 Cap 0 结构，即 m7Gppp (5´ ) N 所必需的。加帽反应不仅高效而且方向正确，不像共转录会添加上一些帽类似物。
来源
携带牛痘病毒（WR）加帽酶基因的 E. coli 菌株。
反应条件
1X 加帽反应缓冲液
[50 mM Tris-HCl（pH 8.0 @ 25℃），5 mM KCl，1 mM DTT，1 mM MgCl2]，37℃ 温育。
提供的试剂
牛痘病毒加帽酶
加帽缓冲液（10X）
GTP 溶液（10 mM）
SAM 溶液（32 mM）
SAM 溶液（32 mM）
质保声明
无单链或双链 DNA 核酸外切酶、核酸内切酶和 RNase 污染。
单位定义
1 单位指 37℃ 条件下，1 小时内将 10 pmol (α-32P) GTP 掺入到一条 80 个核苷酸的转录产物上所需要的酶量。
浓度
10,000 units/ml。