细胞自噬染色检测试剂盒(MDC法)
货号:BL1139A
规格:100T
品牌:Biosharp
商城信息
产品简介:
自噬(autophagy)是细胞受到刺激后吞噬自身的细胞质或细胞器,最终将吞噬物在溶酶体内降解的过程,自噬体(autophagosome)为双层膜包被的圆形或椭圆形结构,内含细胞质、长寿蛋白质和异常蛋白聚集物、损伤或多余细胞器如线粒体、粗面内质网和微体、病毒和细菌等。自噬是一种进化上保守的降解过程,通过溶酶体途径将长寿命蛋白、细胞器及其他细胞质等组分进行降解,自噬通路的激活对多种细胞功能都是必需的,包括饥饿状态下的存活、细胞内组分清除、发育及免疫等过程。
细胞自噬染色检测试剂盒(MDC法),即Autophagy Staining Assay Kit with MDC,是一种使用丹酰尸胺,也称单丹磺酰尸胺或丹酰戊二胺(monodansylcadaverine, MDC)作为荧光探针快速便捷地检测细胞自噬的试剂盒。丹酰尸胺(Dansylcadaverine, MDC)是一种嗜酸性的荧光色素,是细胞自噬检测最常用的荧光探针之一,通常被用于检测自噬体形成的特异性标记染色剂,其检测激发滤光片波长355~380nmnm,阻断滤光片波长512~530nm。细胞自噬染色检测试剂盒(MDC法)适用于培养细胞的荧光自噬染色观察,又可用FACS检测细胞自噬发生的比例,又称为MDC染色液,可与EB合用双染。
产品组分:
产品编号
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产品名称
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规格
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储存条件
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BL1139A -1
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MDC Stain(10×)
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1ml
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-20℃ 避光
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BL1139A -2
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Stain Buffer
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50ml
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4℃
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BL1139A -3
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Wash Buffer
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100ml
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4℃
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使用方法:(仅供参考)
(一)玻片法
1. 收集细胞,用300~500μl的Wash Buffer清洗细胞1次,800~1000g离心5min,弃上清,加入适量的Stain Buffer重悬细胞,计数并调节细胞浓度至106/ml。
2. 取90μl细胞悬液至新的1.5ml离心管中,加入10μl的MDC Stain(10×),轻轻混匀。
3. 37℃或室温避光染色15~60min。
4. 800~1000g离心5min,弃上清,收集细胞,用300~500μl的Wash Buffer清洗细胞2次,800~1000g离心5min,弃上清。
5. 加入100μl的Wash Buffer重悬细胞,滴加于载玻片上并加盖玻片。
6. 荧光显微镜观察计数并拍照,也可用流式细胞仪检测药物干预组MDC阳性细胞百分比。
(二)96孔板法
1. 轻轻吸除96孔板中的培养液,各孔加入10μl MDC Stain(10×)和90μl的Stain Buffer,37℃ 5%CO2条件下避光孵育15~60min。
2. 各孔加入100μl Wash Buffer清洗2~3次,荧光显微镜或流式细胞仪检测观察。
(三) MDC与EB双染法
1. 收集细胞,用300~500μl的Wash Buffer清洗细胞1次,800~1000g离心5min,弃上清,加入适量的Stain Buffer重悬细胞,计数并调节细胞浓度至106/ml。
2. 取90μl细胞悬液至新的1.5ml离心管中,加入10μl MDC Stain(10×)和0.2uM EB染色液,轻轻混匀,滴加于载玻片上,室温避光染色15~60min,加盖玻片。
3. 荧光显微镜或流式细胞仪检测观察。
染色结果:
荧光染色结果:药物干预组细胞呈现了更高的荧光强度和更多的亮绿色MDC标记颗粒;
FACS检测结果:药物干预组MDC阳性细胞百分比高于对照组。
注意事项:
1. MDC Stain和EB对人体有一定害处,请小心操作。
2. 收集细胞前可在培养液中加入不同浓度的药物培养一定时间,诱导细胞自噬。
3. 操作过程中应注意减少试剂暴露于强光下的时间。
4. Wash Buffer可用PBS代替。
5. 本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
6. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
保存条件:
MDC Stain(10×)需-20℃避光保存,其他成分保存于4℃,12个月有效。
货号 |
BL1139A |
规格 |
100T |
品牌 |
Biosharp |
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