外泌体常见的提纯方式
外泌体是指包含了复杂 RNA 和蛋白质的小膜泡 (30-150nm),现今,其特指直径在40-100nm的盘状囊泡。1983年,外泌体首次于绵羊网织红细胞中被发现, 1987年Johnstone将其命名为“exosome”。多种细胞在正常及病理状态下均可分泌外泌体。其主要来源于细胞内溶酶体微粒内陷形成的多囊泡体,经多囊泡体外膜与细胞膜融合后释放到胞外基质中 。
外泌体的提取(提纯)主要包括以下几种方式:
一是超速离心法:这是外泌体提取最常用的方法 。此种方法得到的外泌体量多,但是纯度不足,电镜鉴定时发现外泌体聚集成块, 由于微泡和外泌体没有非常统一的鉴定标准,也有一些研究认为此种 方法得到的是微泡不是外泌体 ;
二是过滤离心:这种操作简单、省时,不影响外泌体的生物活性 ,但同样存在纯度不足的问题;
三是密度梯度离心法:用此种方法分离到的外泌体纯度高,但是前期准备工作繁杂,耗时,量少;
四是免疫磁珠法:这种方法可以保证外泌体形态 的完整,特异性高、操作简单、不需要昂贵的仪器设备,但是非中性pH和非生理性盐浓度会影响外泌体生物活性,不便进行下一步的实验;
五是PS亲和法:该方法将PS(磷脂酰丝氨酸)与磁珠结合,利用亲和原理捕获外泌体囊泡外的PS。该方法与免疫磁珠法相似,获得的外泌体形态完整,纯度最高。由于不使用变性剂,不影响外泌体的生物活性,外泌体可用于细胞共培养和体内注射。2016.9《Scientific Reports》杂志发表了该方法最新数据,表明PS法可提取相当高纯度的外泌体;
六是色谱法:这种方法分离到的外泌体在电镜下大小均一, 但是需要特殊的设备,应用不广泛 。
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