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前病毒拷贝数测定Provirus Copy Number Detection Primer Set,Human (for Real Time PCR)酶试剂盒Takara Clontech

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上海金畔生物科技有限公司代理Takara酶试剂盒全线产品，欢迎访问官网了解更多产品信息和订购。

前病毒拷贝数测定Provirus Copy Number Detection Primer Set,Human (for Real Time PCR)
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格（元） 说明书 数量
Takara 6167 Provirus Copy Number Detection Primer Set,Human (for Real Time PCR) 100 Rxns ￥959 前病毒拷贝数测定Provirus Copy Number Detection Primer Set,Human (for Real Time PCR) 前病毒拷贝数测定Provirus Copy Number Detection Primer Set,Human (for Real Time PCR) 前病毒拷贝数测定Provirus Copy Number Detection Primer Set,Human (for Real Time PCR)
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■ 制品内容 (25 μl反应×100 次量)
Retrovirus Primer Mix for Provirus, Human (10 pmol/μl each) 50 μl
Retrovirus Probe for Provirus, Human (10 pmol/μl)* 50 μl
hIFNγ Primer Mix for Provirus (10 pmol/μl each) 50 μl
hIFNγ Probe for Provirus (10 pmol/μl)* 50 μl
DNA Control Template for Provirus, Human (200 pg/μl) 15 μl
EASY Dilution (for Real Time PCR) 1 ml × 4
 
* 荧光标记探针应避光保存。
 
 
■ 制品说明
本制品是利用Real Time PCR方法对以MLV(murine leulcemia Virus: 鼠白血病病毒) 为基础的逆转录病毒 (Retrovirus) 载体向人体正常细胞中导入基因时，测定前病毒拷贝数的试剂盒。前病毒 (Provirus) 是指逆转录病毒基因组整合至宿主DNA中的状态，此状态称为前病毒。
本制品与CycleavePCR Core Kit (Code No.: CY501) 组合使用，通过测定导入基因的人体正常细胞基因组DNA来测定前病毒拷贝数。另外，本制品扩增的区域为MLV的包装信号区，因此，可以测定大部分以MLV为基础的逆转录病毒载体导入人体正常细胞后的前病毒拷贝数。
传统的前病毒测定方法是把导入基因的宿主细胞克隆后，通过Southern blotting方法进行测定，计算出前病毒的平均拷贝数。计算平均拷贝数需要大量克隆进行Southern blotting，此方法耗时、费力。使用本制品不需要进行细胞的克隆即可简单地计算出前病毒的拷贝数。
与本制品组合使用的CycleavePCR Core Kit是采用Cycling探针法进行Real Time PCR反应的专用试剂盒，具有检出特异性高的优势，能够抑制背景基因组DNA的影响，从而简单、准确地对目的基因进行定量分析。
 
■ 保存
-20℃。
 
■ 注意事项
1. 应先配制各种试剂的混合液，将dH2O、buffer 、酶等配制成Master Mix，可以减少试剂的损失及分装、混合的次数，使反应试剂体积更准确，防止实验结果之间产生误差。
2. 使用前将CycleavePCR Core Kit (Code No.: CY501) 中含有的TaKaRa Ex Taq HS和Tli RNase H II轻离心至Tube底部后再使用；由于酶保存液中含有50%的甘油，粘度高，分取时应慢慢吸取；酶类制品应在实验前从-20℃中取出，使用后立即放入-20℃保存。
3. CycleavePCR Core Kit (Code No.: CY501) 中含有的10×CycleavePCR Buffer在保存过程中有时会产生沉淀物，溶解后不影响使用。Vortex使其完全溶解后再使用。
4. 分装试剂时务必使用新的枪头 (Tip)，以防止样品间污染。
 
 

页面更新：2024-02-29 10:22:00

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■ 制品内容 (25 μl反应×100 次量)
Retrovirus Primer Mix for Provirus, Human (10 pmol/μl each) 50 μl
Retrovirus Probe for Provirus, Human (10 pmol/μl)* 50 μl
hIFNγ Primer Mix for Provirus (10 pmol/μl each) 50 μl
hIFNγ Probe for Provirus (10 pmol/μl)* 50 μl
DNA Control Template for Provirus, Human (200 pg/μl) 15 μl
EASY Dilution (for Real Time PCR) 1 ml × 4
 
* 荧光标记探针应避光保存。
 
 
■ 制品说明
本制品是利用Real Time PCR方法对以MLV(murine leulcemia Virus: 鼠白血病病毒) 为基础的逆转录病毒 (Retrovirus) 载体向人体正常细胞中导入基因时，测定前病毒拷贝数的试剂盒。前病毒 (Provirus) 是指逆转录病毒基因组整合至宿主DNA中的状态，此状态称为前病毒。
本制品与CycleavePCR Core Kit (Code No.: CY501) 组合使用，通过测定导入基因的人体正常细胞基因组DNA来测定前病毒拷贝数。另外，本制品扩增的区域为MLV的包装信号区，因此，可以测定大部分以MLV为基础的逆转录病毒载体导入人体正常细胞后的前病毒拷贝数。
传统的前病毒测定方法是把导入基因的宿主细胞克隆后，通过Southern blotting方法进行测定，计算出前病毒的平均拷贝数。计算平均拷贝数需要大量克隆进行Southern blotting，此方法耗时、费力。使用本制品不需要进行细胞的克隆即可简单地计算出前病毒的拷贝数。
与本制品组合使用的CycleavePCR Core Kit是采用Cycling探针法进行Real Time PCR反应的专用试剂盒，具有检出特异性高的优势，能够抑制背景基因组DNA的影响，从而简单、准确地对目的基因进行定量分析。
 
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■ 注意事项
1. 应先配制各种试剂的混合液，将dH2O、buffer 、酶等配制成Master Mix，可以减少试剂的损失及分装、混合的次数，使反应试剂体积更准确，防止实验结果之间产生误差。
2. 使用前将CycleavePCR Core Kit (Code No.: CY501) 中含有的TaKaRa Ex Taq HS和Tli RNase H II轻离心至Tube底部后再使用；由于酶保存液中含有50%的甘油，粘度高，分取时应慢慢吸取；酶类制品应在实验前从-20℃中取出，使用后立即放入-20℃保存。
3. CycleavePCR Core Kit (Code No.: CY501) 中含有的10×CycleavePCR Buffer在保存过程中有时会产生沉淀物，溶解后不影响使用。Vortex使其完全溶解后再使用。
4. 分装试剂时务必使用新的枪头 (Tip)，以防止样品间污染。
 
 

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整合的慢病毒拷贝数测定酶试剂盒Takara Clontech

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整合的慢病毒拷贝数测定
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格（元） 说明书 数量
Clontech 631239 Lenti-X Provirus Quantitation Kit 200 Rxns ￥6,994 整合的慢病毒拷贝数测定 整合的慢病毒拷贝数测定 整合的慢病毒拷贝数测定
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整合的慢病毒拷贝数测定 → 整合的慢病毒拷贝数测定 → 整合的慢病毒拷贝数测定 → 整合的慢病毒拷贝数测定 → 整合的慢病毒拷贝数测定 → 整合的慢病毒拷贝数测定 → 整合的慢病毒拷贝数测定
 
 
Lenti-X Provirus Quantitation Kit可以让您快速确定转导细胞混合或克隆群体中存在的整合慢病毒(前病毒)的拷贝数。该试剂盒包括用于测定前病毒拷贝数的引物、基因组DNA纯化试剂盒、制备标准曲线的对照DNA，以及基于TB Green检测的qPCR试剂（可检测200次）。
 
正确确定慢病毒的有效滴度
通过量化已整合到靶细胞核DNA中的慢病毒的数量，您可以正确确定慢病毒上清液原液的真实滴度（即有效滴度）。利用这个信息，可以用正确的MOI（感染复数）去感染细胞，让您能够预测将有多少病毒基因组会整合到细胞中。您也可以使用此方法来校准其他滴定方法，那些方法可以测量包装细胞上清液中的病毒含量，但不能测定靶细胞中的功能性整合滴度。
 
一致并且可预测的慢病毒转基因表达
当使用慢病毒载体将基因导入至靶细胞时，表达水平会随着MOI的增加而增加，因为更多的慢病毒拷贝会整合到细胞核DNA中。同样，对于给定的病毒制剂，在不同目标细胞系中的有效MOI可能会因各个细胞系对慢病毒感染的敏感度不同而不同。Lenti-X Provirus Quantitation Kit可让您评估任何细胞系中的转导结果，而不受表达水平的影响，并且可确保不同细胞系间或使用不同病毒制剂间转导水平一致。
 
■ 概述/特点
· 预测不同实验间一致的转基因表达水平
· 比较多个细胞系的转导数据
· 确保不同实验或不同细胞系之间的拷贝数一致
· 包含纯化10种基因组DNA和进行200 次TB Green qPCR反应试剂*
* 此试剂盒中包含的引物旨在扩增HIV-1基因组包装信号附近的的保守区域。这些引物与Takara Bio销售的所有慢病毒载体和常用的慢病毒载体相兼容。如果不能确定该试剂盒是否与您的载体相兼容，请将您的载体序列发送至service，我们的技术支持团队将很乐意为您确认引物的兼容性。
 
■ 实验例
整合的慢病毒拷贝数测定
图1. 测定靶细胞中整合的慢病毒拷贝数。使用快速qPCR方法确定前病毒含量。
 
整合的慢病毒拷贝数测定
图2. 慢病毒前病毒拷贝数会影响转导细胞中转基因的表达水平。使用AcGFP1慢病毒表达载体分别以高或低MOI感染HT1080细胞。感染后72小时，对细胞进行嘌呤霉素药物选择。一周后，选择稳定转导的细胞克隆进行扩增和表达分析。使用流式细胞术确定AcGFP1的表达水平，并使用Lenti-X Provirus Quantitation Kit确定基因组DNA中的前病毒含量。该图所示数据为低拷贝数（> 3; n = 8）和高拷贝数（> 9; n = 7）实验组两组合并数据。结果表明，前病毒含量越高，表达水平也就越高。
 
整合的慢病毒拷贝数测定
图3. 等量病毒感染细胞时，不同类型细胞获得的前病毒（整合的慢病毒）拷贝数不同。 用等量的单一慢病毒原液（100 μl）感染HT1080、HeLa和HEK 293细胞。感染后72小时，使用嘌呤霉素对细胞进行药物选择。一周后，使用Lenti-X Provirus Quantitation Kit确定稳定转导细胞群的前病毒拷贝数。
 
 
产品详情请点击：整合的慢病毒拷贝数测定
 
 

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