怎么选择合适的荧光标记？

怎么选择合适的荧光标记？当选择荧光标记时，需要自问以下问题：

一、您显微镜上的滤光片/激光源是什么?

首先您需要知道您显微镜上的滤光片/激光源。他们将会决定您可以使用什么样的荧光蛋白或染料用来激发和显现。

二、您计划在一个样品上应用几个荧光素？

如果您在样品上使用一个以上的荧光素，那么您需要仔细挑选其他的荧光染料来最小化光谱重叠。您可以通过查看激发和发射光谱来决定使用哪一对染料，以降低他们的激发和发射光谱重叠。

如果您使用激光来激发荧光素，您只要确保您的激光 (ie. 488 nm) 不会同时激发两种以上的染料即可。如果该激光可触发到第二个荧光染料的激发光谱，那么在激发第一个染料时您可能会少量地激发到了第二个染料，而如果这时您 的滤光片也能接受第二个染料的发射光，您就会得到不准确的信号。

然而如果您用来接收发射光谱的滤光片刚好不能接收到第二个染料发射的光，那么您拍得的图片就看不到这段重叠光谱，就没有问题。

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什么是支原体污染？支原体污染怎么检测？

支原体是最小和最简单的自我复制生命体。由于支原体体积小（100 nm），缺乏刚性的细胞壁，因此肉眼无

法检测到支原体，它们可以透过一般过滤膜，并对很多抗生素都具有抵抗力。支原体污染是细胞培养中的一

个主要问题，不止影响实验结果的有效性，更会影响细胞工程制药的质量和安全性。

支原体的特征

支原体属于柔膜菌纲，其成员特征为缺乏细胞壁以及拥有多变的形态。支原体对包括原代细胞在内的所有真核细胞类型具有高度传染性。成百上千的支原体可以附着在一个细胞上，与细胞膜融合、繁殖，最终数量可以超过培养细胞1000倍。支原体可以彻底改变细胞特性和扭曲研究结果。而支原体脂蛋白可被Toll样受体2（TLR2）识别并激活免疫细胞3。支原体没有细胞壁的特点使它们对常用的抗生素（如青霉素和链霉素）产生抗性。此外，它们的尺寸微小（~100nm），能够穿透过0.2μm的标准过滤膜。因此，我们需要采取预防措施来防止细胞培养物受到污染。

支原体污染对细胞功能的主要影响

支原体与宿主细胞竞争营养素和代谢物前体。因此，它们能改变许多细胞功能，影响到细胞代谢和细胞生长，最终导致细胞死亡。通过对受污染的人源细胞进行微阵列分析，科学家发现支原体严重影响数百个基因的表达，当中包括受体、离子通道、生长因子和致癌基因4。一旦与宿主细胞膜粘附或融合，支原体可以通过干扰信号级联和细胞因子产生，进一步损害细胞5。这些有害效应会强烈干扰实验数据，导致研究结果无

效，特别是当涉及表达TLR2的免疫细胞时，如巨噬细胞。

支原体污染的检测

InvivoGen提供两种支原体检测方法，令您能够及时抵御细胞污染。两种试剂均可快速和准确地检测出最常污染细胞培养的支原体物种。

MycoStrip™是一种能够“即时”（〜1小时）检测支原体基因组的免疫层析试纸，而PlasmoTest™是基于检测支原体脂蛋白的比色细胞分析法。

基因检测试纸条

MycoStrip™

• 适合用于即时测试

• 简单：无需特殊设备

• 快速：实际操作时间<15分钟，总时长约1小时

• 清晰：一条条带 – 支原体阴性 

 两条条带 – 支原体阳性

MycoStrip™基于等温PCR的技术，在加入我们专有的反应混合物后，靶向扩增细胞培养中，最常见（占95％）支原体物种的16S rRNA基因。在5分钟内免疫层析试纸条的显示区上就会出现检测结果的条带。

细胞比色分析法

PlasmoTest™

• 适合常规测试使用

• 简单：使用细胞培养上清液进行比色检测

• 快速：操作时间<1小时。过夜培养后可见结果

• 灵敏：培养上清液中检测限为 5.10（2次方） – 5.10（5次方） CFU/ml

InvivoGen拥有专利的HEK-Blue™-2细胞，稳定表达人源TLR2（支原体脂蛋白的主要识别受体1

）,以及一个NF-κB诱导的分泌型胚胎碱性磷酸酶（SEAP）报告基因。HEK-Blue™-2细胞可直接在HEK-Blue™检测培养基中培养，便于检测，是常规检测的理想选择。简单向这些细胞添加测试样品则可以得到比色结果，其灵敏度与基于生物化学发光的分析法相近。培养上清液样品中SEAP报告基因的活性可使用分光光度计在620-655nm下测量。而吸光度与污染物的量成正比。为了您的方便，HEK-Blue™-2细胞会附送Normocin™。Normocin™是一种抗生素混合物，能够防止细胞培养受到支原体、细菌和真菌的污染。

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