ECL化学发光底物(超敏）

货号：BL523B

规格：500ml

品牌：Biosharp

ECL化学发光底物（超敏）

产品简介：

 ECL超敏发光液用于检测直接或间接标记辣根过氧化物酶HRP的抗体及其关联的抗原。 

用途：用于HRP标记抗体的Western Blot和HRP标记探针的核酸杂交。

产品特点：

1、灵敏度高：可检测低皮克级的蛋白；

2、信号持续时间长：光信号持续时间长达5小时；

3、稳定试剂：工作液在24小时内保持稳定；

4、成像方法：适用于X射线胶片、CCD或激光凝胶成像仪；

5、价格经济：针对稀释的抗体浓度条件进行了优化,节省抗体：

一抗：以1 µg/mL储存液稀释1:1,000至1:4,000倍

二抗：以1 µg/mL储存液稀释1:2,000至1:5,000倍

6、简单易用：可替代其它公司的ECL发光底物,操作步骤无需进行特别优化；

使用方法:

1、执行常规SDS-PAGE、转膜和Western Blot步骤。注意用HRP标记IgG或用一抗-链亲和素-生物素-HRP夹法。

2、Western Blot最后一次洗膜的同时配制发光工作液：分别取等体积的A液和B液,放入干净容器中混合（注意吸取A液和B液的吸头一定要分开,避免试剂污染）。建议立即使用工作液,室温放置数小时后仍可使用但灵敏度略有降低。

3、Western Blot最后一次洗膜后,用镊子将膜取出,用滤纸吸去多余的洗涤液（切勿接触膜的蛋白面）,然后置于一洁净保鲜膜上或塑料容器内。

4、根据膜的大小,按比例滴加配置好的ECL工作液到膜上,确保工作液均匀覆盖在膜上,放置1-3分钟。

5、取膜,用滤纸吸去多余的液体,将膜放在两片保鲜膜中间,随后进行压片检测或化学发光成像仪检测。

6、压片检测：将膜固定于X光胶片暗盒内（注意蛋白面向上）。暗房内压X光胶片,分别曝光不同的时间如数秒到数分钟。显影冲洗。

7、化学发光成像仪检测：将膜放置到化学发光成像仪内,参考仪器说明书进行检测。

     注：建议第一次曝光 60 秒,之后可调整曝光时间以达到最佳结果。化学发光反应在底物孵育后的前 5-30 min期间是最强烈的。这一反应可以持续几个小时,但强度会随时间下降,如有底物孵育后较长时间后曝光,曝光时间可能需要延长以获得较强信号。

注意事项：

（1）步骤1～5可在日光灯下操作；但发光液曝露于强光下时间过久灵敏度可能略有降低,移到暗房操作可避免之。

（2）长时间曝光或蛋白过量,将加深背景并使条带强弱变化失去线性关系。曝光不足则条带模糊。

（3）发光工作液孵育约3分钟后膜上的条带发光。强条带发光在暗房中肉眼可见,低丰度蛋白条带发光较弱甚至肉眼不可见但可使X光胶片曝光。肉眼不可见的荧光实际上可持续数小时并使X光胶片感光,因而弱带可曝光1-10小时。如果曝光后条带不佳,可用洗膜缓冲液洗膜,重新孵育二抗,然后重新用ECL发光和曝光。

（4）由于超敏发光液极其灵敏,建议按照推荐比例稀释抗体。抗体浓度过高将造成高背景或没有条带,导致失败。

（5）某些保鲜膜包裹印迹膜时可能会淬灭荧光,应选择高质量保鲜膜。

（6）使用肉眼可见的预染色蛋白Marker和荧光–放射自显影曝光标签可精确确定胶片上条带的位置和大小。

（7）叠氮钠是 HRP 的抑制物,不要使用叠氮钠作为缓冲液的防腐剂。

保存条件：

  室温运输,4 ℃密封避光保存一年,短期可放置室温。