什么是转染？转染可以应用哪些领域？
通俗的来说，转染（Transfection）是将外源分子如DNA，RNA和Protein等导入真核细胞的技术，其目的在于基因调节及蛋白质的表达和功能等研究。
从生物学术语来说，转染(transfection)是细胞在一定条件下主动或被动导入外源DNA片段而获得新的表型的过程。 从本质上讲，和转化没有根本的区别。无论是转染还是转化，其关键因素都是用氯化钙处理大肠杆菌细胞，以提高细胞膜的通透性，从而使外源DNA分子能够容易进入细胞内部。所以在习惯上，人们往往也通称转染为广义的转化。常规转染技术可分为瞬时转染和稳定转染（永久转染）两大类。
转染方法一般有三种，即化学介导，物理介导，生物介导。
转染应用领域：
1.基因表达、沉默、编辑及基因功能研究及应用
2.细胞分析、癌症研究
3.蛋白及病毒生产
4.药物筛选研究
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Trilink定制mRNA应用：免疫治疗
mRNA合成定制
自2012年以来，Trilink在合成研究和临床应用的定制mRNA 领域一直处于行业领先地位。TriLink可对核苷酸进行很多不同的修饰，并借此调节先天免疫识别，可使定制RNA根据所需应用发挥最大的活性。Trilink的专利CleanCap®技术可实现高效经济的共转录Cap1型加帽，这种天然形式的加帽可以提高mRNA活性的同时低免疫原性。此外，Trilink还提供多种转录后修饰，包括DNase和磷酸酶处理、酶法加帽、聚腺苷酸化。纯化方案也可以根据需求进行选择，包括硅胶纯化、液相色谱分离和高效液相色谱。
近来，mRNA在医药研发领域获得越来越多的关注，Trilink可以根据客户临床需求提供GMP级别 mRNA的合成，全套的分析服务可以帮助客户彻底地研究目标mRNA。有经验的用户可以设计自己的mRNA，Trilink的技术人员也可以根据客户应用目的对产品进行优化设计。先进的cGMP级别生产车间，让Trilink可以帮客户完成从临床前到临床的mRNA合成。
个性化肿瘤疫苗
TriLink可合成基于信使RNA (mRNA)的个性化肿瘤疫苗。这是一种独特的个性化药物，专门针对个体患者的独特肿瘤中的新抗原设计。不同患者体内的肿瘤可能表达不同的特异性突变蛋白，这些蛋白被称为肿瘤新抗原。有研究显示，相同病理类型肿瘤的不同患者之间出现相同新抗原的可能性低于1%，针对不同的患者肿瘤的新抗原开发个性化疫苗，可以实现精准医疗的目的。在某些情况下，基于病毒(如甲病毒)的自我复制mRNA被用作表达新抗原的载体。
CAR T细胞治疗
CAR-T疗法，即嵌合抗原受体T（chimeric antigen receptor T, CAR-T）细胞疗法是通过基因编辑技术对T细胞进行基因改造，使其成为针对肿瘤特异性抗原的新型杀伤细胞，该疗法具有特异性强、效率高、非MHC限制等优点，在复发/难治性血液系统肿瘤和部分实体瘤中取得良好的治疗效果。
TriLink提供Cas9、锌指核酸酶（ZFN）和转录激活子样效应核酸酶(TALEN) mRNA，以用于嵌合抗原T细胞（CAR-T）疗法中对T细胞进行基因编辑。这些核酸酶在特定的基因组位置引起双链断裂。然后通过同源重组将编码嵌合抗原受体的供体模板插入剪切位点。
疫苗研发
除了上述的肿瘤疫苗，在传染性疾病疫苗研发的赛道上，mRNA疫苗也算是明星产品。2020年新冠肺炎的爆发，更是让越来越多的人认识了这一种新兴的疫苗。基于信使RNA (mRNA)的疫苗为传统的活疫苗和亚单位疫苗的提供了替代品。mRNA疫苗可编码一种或多种抗原，并由受体细胞表达。由于抗原是在受体细胞内表达的，它会引起与亚单位疫苗不同的MHC类型反应，而mRNA本身作为佐剂，可以增强接种后机体的免疫反应。
mRNA还可以用来引导树突状细胞呈递抗原。树突状细胞可以在体内或体外被转染，然后招募免疫细胞以上述抗原为靶点进行免疫反应。
此外，由病毒改良而来的可自复制RNA疫苗也受到越来越多的关注。病毒的结构基因被替换，一旦被转染到细胞中，自我复制的RNA表达病毒聚合酶并启动数轮RNA复制。然而，由于缺乏关键结构蛋白–衣壳蛋白，这种疫苗不会产生具有传染性病毒。而当RNA通过双链中间物进行自我复制时，会激活可识别双链RNA的模式识别受体，产生免疫辅助作用。此外，由于它可以自我复制，所以需要的免疫剂量非常低。
Trilink可根据客户需求，提供不同修饰、不同长度、不同规格的mRNA，甚至可以提供满足临床前及临床需求的cGMP级别的产品。
更多详情请联系TriLink中国代理商——上海金畔生物
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上海金畔生物科技有限公司代理Takara酶试剂盒全线产品，欢迎访问官网了解更多产品信息和订购。
| 体内应用 | ||||||
| 品牌 | Code No. | 产品名称 | 包装量 | 价格（元） | 说明书 | 数量 |
| Clontech | 635055 | A/C Heterodimerizer | 5 mg | ￥8,948 |  |
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| Clontech | 635058 | B/B Homodimerizer | 5 mg | ￥7,852 | |
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| Clontech | 635069 | B/B Homodimerizer | 25 mg | ￥28,334 | |
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| ■ 制品说明 |
| 化学诱导二聚化（chemical-induced dimerization, CID）的许多体外应用已发展到转基因动物领域。B/B同源二聚体是体内应用最广泛的药物，研究人员通常每次注射使用的剂量为0.5-10 mg/kg。在这个剂量下，5 mg二聚体足以给一只25克的小鼠注射20-400次。但是，每次实验的确切剂量和治疗必须根据经验来确定。 |
| 小鼠体内疾病模型实例 |
| · MaFIA小鼠模型 |
| 巨噬细胞被认为在肿瘤的发生和发展中起着重要的作用。MaFIA (Macrophage Fas-Induced Apoptosis) 小鼠是一种被广泛采用的小鼠模型，它允许通过细胞凋亡选择性地清除巨噬细胞（Burnett et al. 2004）。其机制涉及骨髓特异性启动子中fas-DmrB融合蛋白质的表达及其用B/B同源二聚体诱导的三聚化。fas死亡结构域三聚体可激活caspase 8通路，导致MaFIA小鼠巨噬细胞消融。 |
| · FGF受体亚型在前列腺癌中的作用研究 |
| 两种成纤维细胞生长因子受体亚型（FGFR-1和FGFR-2）的诱导型前列腺特异性表达结果表明，只有FGFR-1诱导前列腺瘤变/增生，这意味着它在早期前列腺癌的发展中发挥作用（Freeman et al. 2003）。这种小鼠模型可以用来测试阻断FGFR1二聚作用的候选药物。 |
| ■ 制品应用 |
| 用于激活由蛋白质-蛋白质相互作用控制的通路或事件。 |
| ■ 保存 |
| －20℃ |
| ■ 参考文献 |
| 1. Burnett, S. H. et al. Conditional macrophage ablation in transgenic mice expressing a Fas-based suicide gene. J. Leukoc. Biol. 75(4):612-623 (2004). 2. Freeman, K. W. et al. Inducible prostate intraepithelial neoplasia with reversible hyperplasia in conditional FGFR1-expressing mice. Cancer Res. 63(23):8256-8563 (2003). |
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页面更新：2021-06-21 15:35:38