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调节性T细胞( Tregs )常见问题解答

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调节性T细胞( Tregs )常见问题解答

1、天然Tregs和诱导性Tregs的区别是什么？

天然T细胞来源于胸腺CD4+细胞中高表达CD25并表达转录因子Foxp3的细胞，不受环境中细胞因子的影响(属于细胞因子非依赖型）。天然Tregs大约占CD4+细胞5-10% 可以在T淋巴细胞发育的单阳性阶段首先出现，并由于具有与自身抗原的高亲和力而被阳性选择。此信号传递是通过T细胞受体和胸腺基质细胞上的带有自身抗原肤的MHC 复合体相互作用完成。

另一方面，诱导性Tregs (iTregs) 来源于胸腺CD4单阳性细胞，当有足够的同源抗原刺激或者特异性免疫调节细胞因子如TGF-β，IL-10 and IL-4存在时，可以分化成CD25+，并表达FoxP3 的Tregs一 因此称为“适应性”或“诱导性”Tregs。 根据调节因子的不同，适应性或诱导性Tregs又被进一步分为Tr1，Tr2，或Tr3细胞。

2、小鼠和人CD4+Tregs有区别吗？

有的。在小鼠中，CD4+Tregs是一组同源性细胞群，所有的CD4+及CD25+细胞均为调节性T细胞。人类的Tregs是异质性细胞群，并不是所有的CD25+细胞都是Tregs。这一研究最早是由哈佛大学、the Royal Free and University College Medical School的科研人员通过对人CD4+CD25+细胞进行详细分析时观察到的。

研究结果显示，只有体外高表达CD25 (约占总CD4 T细胞2-3%) 的CD4+T细胞在体外才有抑制活性，这是相对与把表达CD25的细胞都当做Tregs的小鼠细胞而言，而且表达低到中等水平CD25的细胞在体外没有抑制活性。

3、Tregs在CD4+细胞中的比例是多少？ 此比例是否随着人年龄的增长而发生改变？

此数据也是4-9% (未经发表的内部统计数据)。然而即使在健康的捐赠者中，此数据也会有一定程度的改变。CD4+CD127loCD25+ Tregs的平均百分比在人的一生中只会发生轻微的增长（在人成年之后的20岁到25岁期间，其比例会从脐带血的6.10%增加到PBMCs的7.22%；到人类60岁时，PBMCs中的比例会达到7.5%）。研究显示，在健康的人及小鼠，CD4+/CD25+Tregs比值都会随着年龄的增加发生轻度增长。然而增长的Tregs数量与棉衣衰老质检确切的联系尚不明确

4、为什么把CD127作为人Tregs的标志至关重要？

来自Barbara Fazekas de St. Groth (Centenary Institute of Cancer Medicine and Cell Biotogy, Sydney, Australia) and Jeffrey Bluestone (UCSF Diabetes Center,San Francisco,CA)实验室的数据显示低表达CD127可以区别鉴定人Tregs。其低表达与FoxP3密切相关，并且显示CD127loCD25int/hi的CD4+T淋巴细胞就是Tregs。CD127low优于胞内表达的FoxP3的地方在于检测时不需要固定和破膜，细胞仍然存活，所以随后可用于培养或其他的体外实验。当用CD25的高表达判定Tregs时，研究人员可从正常的细胞群体中获得0.6%-7.9%的Tregs。而用CD127的低表达 (结合CD25) 作为新的圈门标准通常会得到单独用CD25high圈门而丢失的细胞。 此方法分选的CD25int/high Treg细胞比单独用CD25high圈门方式分选的Treg细胞的回收率增加了2-4倍，而且减少了CD25-/int效应细胞的污染。

5、哪些表面标志可分别用来鉴定人及小鼠CD4+T细胞？

目前推荐的判定人CD4 Tregs细胞的表面标志包括GITR，CTLA4 (细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白) ，CD39，CD62L，CDl27，CDl03以及结合CD45RA+表达的 LAG3(淋巴细胞活化基因 ) 。在小鼠中，FR4hiCD25+为n Tregs，FRloCD25+为效应T细胞，FR4hiCD25-为记忆T细胞，CD2S-CD4+为初始T细胞 。

6、什么是Foxp3？如何与CD4+T调节性T细胞相结合？

Foxp3 ((forkhead box P3) 是种胞内转录因子，是Tregs的特异性标志。在小鼠淋巴细胞增生性疾病的研究中被发现，而且在小鼠自发性基因突变“scurfy ”中可被检测到。在人类，由于FoxP3基因缺失可导致IPEX，所以Foxp3可有助于恶性自身免疫病IPEX (immunedysregulation polyendocrinopathy enteropathy X-linked)的研究。

7、除了CD4细胞，是否还有其他类型的细胞也可表达Foxp3？

是的。有研究显示CD8细胞也可表达FoxP3，而且天然状态下也具有调节功能 。

8、人Foxp3是否存在多种异构体？BD Biosciences Foxp3 clone 259D/C7可识别哪种异构体？

有的。Foxp3有两种异构体：全长形式和缺乏外显子2的剪接变体。CD4+/CD25+细胞均可表达这两种异构体。

9、做抗人的Foxp3染色之前，样本可保存多久？

样本染色之前，-80℃保存人的PBMCs于人FoxP3缓冲液中24-72小时都是可行的。

10、小鼠Foxp3抗体可用于人Foxp3缓冲液吗？反过来是否可行？

不行。我们不建议互换人与小鼠的Foxp3缓冲液体系。要想得到小鼠或人FoxP3克隆最好的染色结果，我们建议参照不同克隆推荐的最适缓冲体系进行试验。

11、Foxp3染色是否可应用于人全血细胞样本？

可以。选择pBMCs作为高速细胞计数样本的首要原因，就是需要溶解/固定/破膜大量的全血以得到实验所需的足够的细胞数量。例如1ml全血含有大约1×10^6个淋巴细胞，而只有少于4-9%的CD4+细胞是Tregs。

12、如何检测Tregs功能？

Tregs可根据其对靶细胞功能的抑制能力进行检测，例如：

抑制靶细胞增殖或者

抑制靶细胞的细胞因子分泌

抑制标志物的活化

本文来源于网络，如需了解相关产品，请咨询上海金畔生物

Stressmarp试剂盒常见问题解答

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Stressmarp试剂盒常见问题解答

本篇为大家带来的是Stressmarp试剂盒常见问题解答，如大家想购买Stressmarp品牌的试剂盒产品，或咨询更多关于Stressmarp产品的问题，技术方面的支持，都可以联系Stressmarp代理商上海金畔生物。

1.该ELISA酶标板是用什么抗体包被的？

答：由于找到合适免疫测定的匹配抗体需要大量的时间和精力，所以我们不能提供制作试剂盒所用抗体的详细信息。

2.在样品孵育时加入预处理缓冲液的目的是什么？

答：某些ELISA试剂盒内的预处理液是为了将目标蛋白与其他可能的相关结合蛋白分离开。

3.怎样计算ELISA试剂盒的灵敏度？

答：ELISA 试剂盒灵敏度计算方法如下： {2(空白对照标准差) (空白对照以上的最低标准品浓度平均值)} / (空白对照以上最低标准品OD值的平均值—空白对照OD值的平均值). 需要10-20 个样品完成这个计算 。

4.怎样计算ELISA试剂盒的定量极限？

答：试剂盒的定量极限等于标准曲线中用的最低蛋白浓度。

5.不小心把其中一个试剂洒了，可以替换吗？

答：请与我们的技术支持团队联系 (1.250.294.9065 或 techsupport@stressmarq.com)。有的试剂盒中可能有另一个试剂可以作为替代品。如果没有，我们可以寄一个替代品给您 (费用需要您自己承担)。  

更多详情请咨询Stressmarp代理商 – 上海金畔生物

凝集素的常见四大分类

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凝集素的常见四大分类

很多刚开始接触凝集素的朋友，可能对于凝集素的产品名词还不是很清楚，那利用好本篇，今天就来给大家说一下什么是凝集素及凝集素的常见四大分类，希望能够帮助到各位有需要的朋友们。

什么是凝集素？

凝集素（Lectin）是指从各种植物，无脊椎动物和高等动物中提纯的糖蛋白或结合糖的蛋白，因其能凝集红血球（含血型物质），故名凝集素。常用的为植物凝集素（Phytoagglutin, PNA），通常以其被提取的植物命名，如刀豆素A（Conconvalina,ConA）、麦胚素（Wheat germ agglutinin, WGA）、花生凝集素（Peanut agglutinin, PNA）和大豆凝集素（Soybean agglutinin, SBA）等，凝集素是它们的总称。凝集素不是来源或参与免疫反应的产物，凝集素具有的某些“亲合”特性，能被免疫细胞化学技术方法所应用。因此，Ponder（1983）提出应称“凝集素组织化学”而不能称为“凝集素免疫组织化学”。

凝集素的常见分类有哪些？

按照凝集素的亚基特征分类会把凝集素大致分成四类：部分凝集素(merolectins)，只含1个糖结合结构域，它们不能沉积复合糖和凝集细胞；全凝集素(hololectins)，含至少2个相同或非常相似的糖结合结构域，它们可以凝集细胞和沉淀复合糖，绝大多数具凝集功能的植物凝集素属于此类；嵌合凝集素(chimmerolectins)是一类融合蛋白，由1个或多个糖结合结构域及1个具有酶活性或其他生物活性的结构域共同组成；超凝集素(superlectins)，至少含2个以上不同的糖结合结构域。

血球全凝集现象一般有两种情况,一是由于血浆蛋白紊乱而造成的非特异性凝集,此种情形临床较为多见.另一种是由于细菌感染而引起的特异性凝集。在C3D/C3b存在时直接抗球蛋白试验阳性，在IgG存在时为阴性。血清与患者自身红细胞呈全凝集反应，37℃凝集素效价为32，4℃不发生反应，血清与5mmol/LDTT孵育后反应消失。

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凝集素产品名称 中文名称 货号
Aleuria aurantia      橙黄网孢盘菌凝集素       L-1390-2 /FL-1391-1/B-1395-1/AL-1393-2
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Concanavalin A 刀豆蛋白A凝集素  L-1000-500/FL-1001-25 B-1005/AL-1003/RL-1002-25/CL-1003-1
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实验室常见的六种微生物污染源

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实验室常见的六种微生物污染源

在进行细胞或生物实验的时候，通常有六种比较常见的微生物污染源，本文就针对这些微生物污染源，来给大家详细的介绍一下。

1. 基础设施:

通风柜、排风装置和实验室设备可以容纳表面微生物并传播空气微生物。每天用酒精清洁工作区和每月用漂白剂清洁工作区。定期更换所有空气过滤器，并至少每周清空所有真空吸液器。

2. 操作员：

实验室工作人员可以将皮肤、衣服和身体上带有的微生物和灰尘传播到培养细胞中。穿上合适的安全服，使用无菌技术。

3. 移液枪、枪头、注射器、真空泵：

受污染的移液枪可以污染多个细胞。使用无菌移液枪、针头注射器，不要重复使用一次性器具。确保定期清空和清洁真空泵储液罐和管路。

4. 设备： 

玻璃器皿、培养箱和水浴锅很容易被污染。保持所有设备无菌，经常更换水浴锅中的水（真菌的温床）。定期对所有培养箱进行消毒。

5. 安全服：

实验袍和手套必须保持清洁干净，只能在实验室穿上跟戴上。不重复使用一次性防护服，用后立即丢弃。

6. 培养基、试剂和细胞：

使用任何培养基、试剂或细胞之前，确认它们是无菌的。小心密封所有容器。

InvivoGen提供一套微生物检测工具和清除试剂，以及预防污染的小提示。如需了解相关产品或更多知识，请联系上海金畔生物。

外泌体常见的提纯方式

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外泌体常见的提纯方式

外泌体是指包含了复杂 RNA 和蛋白质的小膜泡 (30-150nm)，现今，其特指直径在40-100nm的盘状囊泡。1983年，外泌体首次于绵羊网织红细胞中被发现， 1987年Johnstone将其命名为“exosome”。多种细胞在正常及病理状态下均可分泌外泌体。其主要来源于细胞内溶酶体微粒内陷形成的多囊泡体，经多囊泡体外膜与细胞膜融合后释放到胞外基质中 。

外泌体的提取（提纯）主要包括以下几种方式：

一是超速离心法：这是外泌体提取最常用的方法 。此种方法得到的外泌体量多，但是纯度不足，电镜鉴定时发现外泌体聚集成块， 由于微泡和外泌体没有非常统一的鉴定标准，也有一些研究认为此种 方法得到的是微泡不是外泌体 ；

二是过滤离心：这种操作简单、省时，不影响外泌体的生物活性 ，但同样存在纯度不足的问题；

三是密度梯度离心法：用此种方法分离到的外泌体纯度高，但是前期准备工作繁杂，耗时，量少；

四是免疫磁珠法：这种方法可以保证外泌体形态 的完整，特异性高、操作简单、不需要昂贵的仪器设备，但是非中性pH和非生理性盐浓度会影响外泌体生物活性，不便进行下一步的实验；

五是PS亲和法：该方法将PS（磷脂酰丝氨酸）与磁珠结合，利用亲和原理捕获外泌体囊泡外的PS。该方法与免疫磁珠法相似，获得的外泌体形态完整，纯度最高。由于不使用变性剂，不影响外泌体的生物活性，外泌体可用于细胞共培养和体内注射。2016.9《Scientific Reports》杂志发表了该方法最新数据，表明PS法可提取相当高纯度的外泌体;

六是色谱法：这种方法分离到的外泌体在电镜下大小均一， 但是需要特殊的设备，应用不广泛 。

更多详情请咨询上海金畔生物

VectaPlex常见问题解答

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VectaPlex常见问题解答

VectaPlex常见问题解答


VectaPlex™ Antibody Removal Kit (VRK-1000)


Q: VectaPlex™可用于冰冻切片吗?

A: No. During development, VectaPlex™ was optimized for FFPE tissues, where the power to remove antibodies at room temperature was balanced with the need to preserve tissue morphology. For frozen tissues, VectaPlex™ will remove the tissue from the slide.


Q: VectaPlex™ 可以去除免疫组化 (IHC) 实验应用中的抗体染色（酶显色）吗？

A: VectaPlex™ Antibody Removal Kit is designed to be used in fluorescent workflows such as immunofluorescence or TSA. It has not been validated or confirmed for immunohistochemistry (IHC) applications. VectaPlex™ may remove substrates already deposited on tissue samples.


Q: 我有使用TrueView试剂盒去除组织的自发荧光, 请问TrueVIEW会被VectaPlex™试剂去除吗?

A: We used TrueView in our VectaPlex™ IF workflow to suppress autofluorescence. Application of VectaPlex™ removes some, but not all, of the TrueView reagent. Since some TrueView remained after VectaPlex™ application, we did not add TrueView in every cycle, but only as needed to suppress autofluorescence.


Q: 请问将VectaPlex™试剂盒放置到4℃冰箱一段时间，还可以使用吗?

A: Yes. VectaPlex™can withstand a freeze-thaw cycle and still perform as expected, but the recommended storage is at ambient temperature (15-25 °C). Additionally, the kit will still perform properly if placed at 4 °C.


Q: 在同一张切片上使用 VectaPlex™,是否有最大次数限制呢？

A: VectaPlex™ has been tested for up to 6 cycles with no ill effects. We don’t expect there to be issues with increasing the number of cycles, but we suggest testing with controls for adequate comparisons. We recommend running experiments to confirm that the use of more cycles does not impact the antigenicity or tissue morphology.


Q: VectaPlex™可用于自动化染色平台吗?

A: We have not tested this product on automated systems and cannot guarantee instrument compatibility at this time.


Q: VectaPlex™ 是否适用于所有种属来源的抗体?

A: VectaPlex™ has been tested with mouse and rabbit primaries, and with horse and goat secondaries. We expect it to work well with other species of antibodies as well. 


Q: VectaPlex™ 是否适用于不同类型的组织样本?

A: VectaPlex™ has been tested on and works well with various FFPE tissues, including FFPE breast and lung tissue which are very fragile.


Q: VectaPlex™ 是否与所有抗体相兼容?

A: VectaPlex™ has been tested on more than 30 common antibodies and has worked on them without issue.


Q: 在IF实验中, VectaPlex™ 抗体去除试剂是否也可以去除组织的自发荧光呢？

A: VectaPlex™ does not appear to reduce autofluorescence background.


Q: 是否可以提供使用VectaPlex™操作过程中移去盖玻片的操作流程呢?

A: We recommend using VectaShield® Plus Antifade Mounting Media with DAPI (H-2000), which is an aqueous non-hardening mounting medium. After each imaging cycle, the coverslip can be easily removed by incubating in PBS and the residual VectaShield® removed with a PBS wash.



详情请咨询 Vectorlabs代理商 -上海金畔生物科技 

Vector产品经理：15221999938 微信同号


常见的疫苗佐剂产品列表–InvivoGen

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常见的疫苗佐剂产品列表–InvivoGen

在做科研实验时，很多老师对免疫佐剂，疫苗佐剂会有比较大的需求，本文给大家整理的是Invivogen品牌常见的一下疫苗佐剂，疫苗佐剂产品。如大家想要查看该疫苗佐剂的详细信息，可以在金畔网站上的搜索框，搜索相关的产品货号，或者是产品名称，即可查看该产品的详细信息了。

疫苗佐剂产品列表：

产品编号

产品名称

规格

vac-1585-1

ODN 1585 VacciGrade™

1 mg

vac-1826-1

ODN 1826 VacciGrade™

1 mg

vac-2006-1

ODN 2006 VacciGrade™

1 mg

vac-2395-1

ODN 2395 VacciGrade™

1 mg

vac-3pelps

LPS-EB VacciGrade™

5 x 10e6 EU

vac-adx-10

AddaVax™

10 ml

vac-alu-250

Alhydrogel® adjuvant 2%

250 ml

vac-as03-10

AddaS03™

10 mL

vac-c401-5

CL401 VacciGrade™

5 mg

vac-c413-5

CL413 VacciGrade™

5 mg

vac-c429

CL429 VacciGrade™

5 mg

vac-cfa-10

CFA

10 ml

vac-cfa-60

CFA

6 x 10 ml

vac-fla

Flagellin FliC VacciGrade™

50 µg

vac-ifa-10

IFA

10 ml

vac-ifa-60

IFA

6 x 10 ml

vac-imq

Imiquimod VacciGrade™

5 mg

vac-isq

OVA 323-339

1 mg

vac-mpla

MPLA-SM VacciGrade™

1 mg

vac-mpls

MPLAs Vaccigrade™

1 mg

vac-phos-250

Adju-Phos® adjuvant

250 ml

vac-pic

Poly(I:C) (HMW) VacciGrade™

10 mg

vac-pms

Pam3CSK4 VacciGrade™

1 mg

vac-pova

Ovalbumin EndoFit™

10 mg

vac-pova-100

Ovalbumin EndoFit™

100 mg

vac-quil

Quil-A® adjuvant

1 g

vac-r848

R848 VacciGrade™

5 mg

vac-sin

OVA 257-264

1 mg

vac-stova

Ovalbumin

1 g

vac-tdb

TDB VacciGrade™

2 mg

更多详情请咨询Invivogen代理商-上海金畔生物

StressMarq标记抗体常见问题解答

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StressMarq标记抗体常见问题解答

当您在使用StressMarq生产的标记抗体产品时，可能对产品或者是在实验时有遇到一些问题。本篇就是针对我们的标记抗体客户常见的一些问题解答，希望可以帮助到大家。如果里面列举的问题没有您所关注的，可以咨询我们的代理商上海金畔生物，协助您处理这些问题。

一、我怎么选择合适的荧光标记?

答：当选择荧光标记时，需要自问以下问题：

您显微镜上的滤光片/激光源是什么?

首先您需要知道您显微镜上的滤光片/激光源。他们将会决定您可以使用什么样的荧光蛋白或染料用来激发和显现。

您计划在一个样品上应用几个荧光素？

如果您在样品上使用一个以上的荧光素，那么您需要仔细挑选其他的荧光染料来最小化光谱重叠。您可以通过查看激发和发射光谱来决定使用哪一对染料，以降低他们的激发和发射光谱重叠。

如果您使用激光来激发荧光素，您只要确保您的激光 (ie. 488 nm) 不会同时激发两种以上的染料即可。如果该激光可触发到第二个荧光染料的激发光谱，那么在激发第一个染料时您可能会少量地激发到了第二个染料，而如果这时您的滤光片也能接受第二个染料的发射光，您就会得到不准确的信号。

然而如果您用来接收发射光谱的滤光片刚好不能接收到第二个染料发射的光，那么您拍得的图片就看不到这段重叠光谱，就没有问题。

二、抗体标记是怎么与抗体结合的？

答：标记与抗体是共价键结合的，非常稳定。

三、每个抗体可以结合几个标记？

答：根据被标记抗体和标记的不同，一个抗体可以结合1~10个标记。

四、抗体标记结合在抗体的什么位置？

答：抗体标记是结合在抗体游离的氨基基团上的。由于抗体Fc区域的游离氨基基团较多，所以标记通常是结合在抗体的Fc区域。然而标签很可能会与抗体决定簇结合从而使抗体与抗原的结合受阻。虽然这个可能性较低，但是还是会影响该抗体在某种应用中与抗原的结合能力。 • [indent]由于我们没办法控制标签与抗体的结合过程，所以我们不可能完全确定他们结合的位置。

五、标记抗体怎样保存？

答：所有保存在含50%甘油的缓冲液中的标记一抗都可以储存在-20℃。缓冲液中不含50%甘油的标记抗体应储存在4℃。

六、标记一抗稳定吗？

答：储存在4℃的标记一抗保质期18个月，-20℃保存的标记一抗保质期可达2年。请参见“标记抗体怎样保存？”了解更多储存信息。

七、为什么标记了的抗体和未标记的实验效果不同？

答：在罕见情况下，标记标签可能会阻挡了抗体结合部位，因此限制了抗体与抗原结合的能力。虽然这种情况罕见，但是确实有可能影响抗体在各种应用中结合抗原的效果。由于我们没办法控制标签与抗体的结合过程，所以我们不可能完全确定他们结合的位置。

更多常见问题及产品请咨询Stressmarq代理商上海金畔生物

ELISA不常见痰液样本的处理方法

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ELISA不常见痰液样本的处理方法

ELISA（酶联免疫吸附剂测定）是一种快速、灵敏、准确可靠的一种定量分析方法，样本的处理对于ELISA实验的成功有着举足轻重的作用。 利用ELISA进行检测的样本类型包括常见的血液（血清、血浆），组织匀浆、细胞裂解液、细胞培养上清以及不常见的皮肤组织、尿液、粪便、肺泡灌洗液、唾液、脑脊液、胸腹水、前列腺液、精液、阴道分泌物等，这些样本收集的时间、处理方法和保存都会影响到ELISA实验的结果。

下面小欣就整理了ELISA不常见痰液样本的处理方法，希望对您有所帮助。如果您需要选购相关的ELISA试剂盒，也可以联系我们上海金畔生物。

1）选择痰液中较为粘稠部分称重， 加两倍于痰量的 0.1% DTT(二硫苏糖醇)。DTT 的主要作用是溶解粘液，用吸管反复吹打，漩涡器振荡 15s，37 度恒温水浴振荡 5 分钟；

2）加入两倍于痰量的 PBS 缓冲液继续振荡 15-20 分钟，150 目的金属丝网过滤，1500 rpm 离心 10 分钟吸取上清液检测。

处理样本的过程就是收集目标蛋白的过程，由于蛋白容易变性，降解，故该过程应尽量温和。样本处理之后的储存也非常重要，尤其注意不要反复冻融，样本处理之后可分装密封保存，4 度保存应小于 1 周，-20 度不应超过 1 个月，-80 度不应超过 2 个月。在标本使用前应缓慢均衡至室温，不应加热使之融解。样本的处理是实验成功的第一步， 以上就是关于ELISA特殊样本痰液样本处理方法的简述，供研究者参考。

更多详情请上海金畔生物~

ELISA几种不常见液体样本处理方法

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ELISA几种不常见液体样本处理方法

一、唾 液


在唾液样本采集之前，受试者被建议不要吃东西、抽烟或喝饮料。用盐水彻底漱口后，采集唾液3 mL。立即以4000 rpm的速度离心15分钟，以除去任何颗粒或沉积物。将上清液分装并在−70°C下储存备用。

• 参考文献：

Aydin, S., I. Halifeoglu, I. H. Ozercan, F. Erman, N. Kilic, S. Aydin, N. Ilhan, N. Ilhan, Y. Ozkan, N. Akpolat, L. Sert and E. Caylak (Aydin, Halifeoglu et al.). ‘A comparison of leptin and ghrelin

levels in plasma and saliva of young healthy subjects.’ Peptides 26(4): 647-652.

二、痰 液


根据标准方案收集并制备诱导痰：1）分离粘液，2）测量粘液，3）添加与粘液相同体积的二硫苏糖醇（0.1%），4）涡流，5）使用滤纸并收集过滤液，6）300 g离心30 min，7） 分离上清液并保持在−20°C。

• 参考文献：

Majd, A. M. M., S. Faghihzadeh, S. Pourfarzam, M. Eghtedardoost, D. Jamali, E. S. Mirsharif, R. Dilmaghanian and T. Ghazanfari (2019). ‘Serum and sputum levels of IL-17, IL-21, TNFalpha and mRNA expression of IL-17 in sulfur mustard lung tissue with long term pulmonary complications (28years after sulfur mustard exposure).’ Int Immunopharmacol 76: 105828.

三、尿 液


早上7点到8点，用无菌管收集第一次晨尿，存于-80°C备用。离心20分钟左右（2000-3000 rpm）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

• 参考文献：

Wasilewska, A., K. Taranta-Janusz, W. Debek, W. Zoch-Zwierz and E. Kuroczycka-Saniutycz. ‘KIM-1 and NGAL: new markers of obstructive nephropathy.’ Pediatr Nephrol 26(4): 579-586.

四、精 液


应在禁欲至少2天和最多7天之后收集样本。如果需要额外的样本，每次访视时禁欲天数应尽可能恒定。样本应在实验室附近的房间内收集，以限制精液的温度波动，并控制采集和分析之间的时间间隔（例外情况见第2.2.5节和第2.2.6节）。

应通过手淫获得样本，并将其射入一个无菌并确认对精子无毒的广口玻璃或塑料容器中。样本容器应保持在20°C到37°C之间的环境温度，以避免温度发生较大变化，这可能会影响精子射入后的情况。

正常精液射出体外呈稠厚的胶冻状，射出体外后需在室温或37°C水浴箱中使其在前列腺分泌的纤维蛋白溶解酶的作用下液化，变的稀薄。待精液完全液化后，将精液 4000 rpm 离心 10 分钟分离精浆进行检测。

• 参考文献：

 ¤   World Health Organization. WHO laboratory manual for the examination and processing of human semen. 5th ed. WHO Press; 2010.

 ¤  Zupin, L., V. Polesello, M. Martinelli, S. Luppi, E. Giolo, G. Zito, F. Romano, L. Segat, S. Crovella and G. Ricci (2019). ‘Human beta-defensin 1 in follicular fluid and semen: impact on fertility.’ J Assist Reprod Genet 36(4): 787-797.

五、肺 泡 灌 洗 液


1. 在纤支镜下，按常规方法行支气管肺泡灌洗。每次注入无菌生理盐水20 ml，然后缓慢洗出，每例注入总量约200 ml，其回收率50-60%。回收肺泡灌洗液，1000 rpm离心10分钟，取上清分装-80°C冻存备用。

•  参考文献：

李固本，Peter; B. Bitterman （1990）.“支气管肺泡灌洗液白蛋白含量的ELISA测定”《湖南医科大学学报》第3期

2. BALF样本从进行呼吸道症状常规调查的患者身上采集。对样本进行离心和无菌过滤，以去除细胞碎片和结核分枝杆菌

• 参考文献：

Singh, S., G. Maniakis-Grivas, U. K. Singh, R. M. Asher, F. Mauri, P. T. Elkington and J. S. Friedland (2018). ‘Interleukin-17 regulates matrix metalloproteinase activity in human pulmonary tuberculosis.’ J Pathol 244(3): 311-322.

六、脑 脊 液


脑脊液的研究文献中，很多对如何取脑脊液没有详细描述。可能是因为属于行业常规操作，不必赘述。可对于新学者，往往很是疑惑。我们百度了一下，结果如下，仅供参考：

人脑脊液的抽取：临床上都用的是腰椎穿刺术。具体的方法是将患者左侧卧位，屈颈、屈髋、屈膝，取腰3、4为穿刺点，经过常规的消毒铺巾以后，在腰3、4的位置局部浸润麻醉，将腰穿针插入，当腰穿针进入蛛网膜下腔以后，把腰穿针中间的针芯抽出，即可流出澄清或者是有颜色、有病变的脑脊液。但是在抽取脑脊液之前需要测量脑脊液的压力，然后再留取脑脊液，脑脊液留取的过程中要注意速度要缓慢，并且量要根据颅内压的状况进行具体的调节，不宜过多也不宜过少。样本收集后于 1000g 离心 20 分钟，离心后收集上清，并将标本保存于-20度，且应避免反复冻融。

大小鼠的脑脊液量都不多，尤其是小鼠的，通常只能有几微升。我们实验室的做法是用一根胰岛素注射器前面再连接一根比较细的透明管子，管子的另一端与折下的胰岛素注射器针头连接。准备好工具，深麻老鼠后，我们只需要找到老鼠的枕骨大孔，让针头垂直于枕骨的角度插入枕骨大孔。不要插入太深，当手指有破空感的时候就停止，然后用胰岛素注射器缓慢回抽（由于大小鼠的脑脊液很少，回抽的力度应很小，速度不应快，防止脑内压增大）。脑脊液是无色透明的液体，如果透明管子里的液体是红色的，或者谈红色的，那说明你出错了，重新再来。当大小鼠的脑脊液抽完后，你就可以在透明管子中看到清澈的脑脊液从某一段突然变红了。这个时候用止血钳夹住红色段的上缘，接着用剪刀沿剪去红色的部分。这样就可以取到没受血液污染的脑脊液了。样本收集后于 1000g 离心 20 分钟，离心后收集上清，并将标本保存于-20度，且应避免反复冻融。

七、胸 水


患者经胸腔穿刺取胸腔积液10 mL于无菌管内。3000 g下离心10分钟，上清液在−80°C下冻存备用。

• 参考文献：

Hong, J. Y., S. Y. Park, Y. Kim, C. Y. Lee and M. G. Lee (2018). ‘Calpain and spectrin breakdown products as potential biomarkers in tuberculous pleural effusion.’ J Thorac Dis 10(5): 2558-2566.

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