Normal saline；生理盐水（0.75%，无菌）
| 有效期 | 2年 |
| CAS | 7647-14-5 |
| 分子式 | NaCl |
| 分子量 | 58.44 |
| 储存条件 | RT |
| 外观（性状） | colorless liquid |
| 单位 | 瓶 |
| 规格 | 100ml 500ml |
是常用的渗透压与动物或人体血浆的渗透压基本相等的氯化钠水溶液，可用于多种生理学实验，是常用的溶剂之一。0.9%生理盐水为哺乳类常用浓度; 0.85%生理盐水为常规实验常用浓度; 0.75%生理盐水为鸟类常用浓度; 0.65%生理盐水为两栖类常用浓度。
Normal saline；生理盐水（0.75%，非无菌）
| 有效期 | 2年 |
| CAS | 7647-14-5 |
| 分子式 | NaCl |
| 分子量 | 58.44 |
| 储存条件 | RT |
| 外观（性状） | colorless liquid |
| 单位 | 瓶 |
| 规格 | 100ml 500ml |
Normal saline；生理盐水（0.85%，无菌）
| 有效期 | 2年 |
| CAS | 7647-14-5 |
| 分子式 | NaCl |
| 分子量 | 58.44 |
| 储存条件 | RT |
| 外观（性状） | colorless liquid |
| 单位 | 瓶 |
| 规格 | 100ml 500ml |
是常用的渗透压与动物或人体血浆的渗透压基本相等的氯化钠水溶液，可用于多种生理学实验，是常用的溶剂之一。0.9%生理盐水为哺乳类常用浓度; 0.85%生理盐水为常规实验常用浓度; 0.75%生理盐水为鸟类常用浓度; 0.65%生理盐水为两栖类常用浓度。
外泌体(Exosome)及其五种常用纯化方式介绍
外泌体(Exosome)是发现于1986年，一种直径约30~150nm的双层膜囊泡状结构小体，可由机体内多种细胞如免疫细胞、干细胞、心血管细胞、网织红细胞、血小板、神经细胞和肿瘤细胞等主动分泌产生，广泛分布于外周血、尿液、唾液、乳汁、腹水、羊水等体液中。
外泌体携带大量特异性的蛋白质（如细胞因子、生长因子）以及功能性的mRNAs、miRNAs等生物活性物质，在体内参与细胞通讯、细胞迁移、促血管新生和抗肿瘤免疫等生理过程，与多种疾病的发生和进程密切相关。由于外泌体的特殊结构和功能，使得它具有潜在的应用价值，一方面可以作为诊断多种疾病的生物指标，另一方面也可以作为治疗手段，未来有可能作为药物的天然载体用于临床治疗。
外泌体的研究日益活跃并令人瞩目。但是，由于外泌体的纳米尺寸，同其它类型的胞外囊泡在理化和生化特征上部分重叠，以及自身在大小、组成和功能方面存在异质性，其分离纯化也面临挑战。下面小欣给大家从文献中总结出了目前几大主流外泌体纯化方法，供大家参考。
1、差速离心法（UC）
通过差速超速离心分离外来体通常包括一系列不同离心力和持续时间的离心循环，以根据外来体与样品中其他成分的密度和大小差异来分离外来体，是目前最常用的分析方法。
优势：降低了使用分离试剂造成的污染和成本；样本处理量大，产量高。
缺点：仪器成本投入高，笨重，运行时间长，耗人力，不便携；超速离心可能破坏外泌体而影响下游分析；经常存在杂蛋白和脂蛋白污染。
2、基于大小的分离技术
超滤离心法也是目前很常用的纯化方法之一，其采用不同膜大小和截留分子量（MWCO）的膜过滤器，使大于MWCO的颗粒留下，而小于MWCO的颗粒被丢弃，超滤法作为一种有效的浓缩方法经常与其他外泌体分离方法联合应用。
分子排阻层析(SEC)也常被报道用于外泌体制备，使用具有化学惰性和稳定性的多孔填料，采用非吸附的层析方法，按照不同大小分子流经的路径长短不同来进行样品分离。外泌体在填料的排阻极限之外，无法进入填料的孔隙中，而紧跟着外水体积最先排出；蛋白等其它杂质由于分子量小，可以进入填料孔隙中，经过较长的路径而晚出峰，由此分离。
优势：超滤：快速，不需要特殊仪器，便携。将RNA提取液流经膜可直接用于RNA抽提。SEC：较高纯度外泌体；通常在重力流下操作从而保留了外泌体的完整性和生物活性；可重复性好；中度样本处理量。
缺点：超滤：仪器成本低，中等纯度；剪切力可引起外泌体损伤；有可能造成聚集和囊泡陷入膜孔中，或外泌体吸附在膜上而损失。SEC：仪器成本中等，需要专用的设备；不易放大，运行时间长。
3、外泌体沉淀（PEG-base）
聚乙二醇(PEG)，它在水中具有超溶性，可以“束缚”水分子，迫使较难溶的成分，如EV、外泌体、蛋白质和其它较难溶的成分从溶液中分离出来。通常是4℃用PEG孵育样品过夜，随后通过低速离心或过滤即可沉淀回收外泌体。
优势：容易操作，不需要特殊仪器；样本处理量大，具有可放大性。
缺点：缺乏选择性的分离机制，容易和非外泌体污染共沉淀，如其它胞外囊泡、蛋白聚集体、 高丰度蛋白等；运行时间长，需要在分离前先去除脂蛋白等亚细胞颗粒，在分离后去除聚合物材料。
4、免疫亲和捕获技术
免疫捕获过程需要使用微珠，通常约1μm，其带有铁核，通常被称为磁珠，这些磁珠表面包被有可识别外泌体表面标记物(如CD9、CD63和CD81)的捕获分子。捕获分子通常是抗体，但也可能是配体或纳米小体。磁珠可生产用于捕获一个表面标记，如CD63，或使用泛捕获方法捕获所有这三个表面标记。
优势：针对特定来源或亚群的外泌体分离是很好的选择；相比于其它分离方法，纯度要高出很多；利于外泌体的分型。
缺点：试剂成本高，需要预先确认好的外泌体标签(抗原)；样本处理量低，只有带标签的外泌体被识别而产量低；仅适用于Cell-free样品；肿瘤的异质性妨碍了免疫识别，可能会造成假阴性；抗原表位可能被封闭或掩藏。
5、微流控技术
微尺度下，利用外泌体的生理和生化特性进行分离，如免疫亲和特性、大小和密度，结合新兴的声波纳滤、电磁和电泳等技术。微流控技术包括捕获微流控技术、过滤微流控技术、磁分离微流控技术、声学分离微流控技术和介电泳微流控技术等。
优势：快速、低成本、高度便携、容易实现自动化，可将外泌体分离和后续检测进行集成。
缺点：缺乏标准化和大规模的临床样本测试，缺少方法验证，低/中等程度的样本处理量。
更多关于外泌体产品或技术问题请咨询上海金畔生物
Normal saline；生理盐水（0.65%，非无菌）
| 有效期 | 2年 |
| CAS | 7647-14-5 |
| 分子式 | NaCl |
| 分子量 | 58.44 |
| 储存条件 | RT |
| 外观（性状） | colorless liquid |
| 单位 | 瓶 |
| 规格 | 100ml 500ml |
Normal saline 生理盐水（0.9%，非无菌）
| CAS | 7647-14-5 |
| 分子式 | NaCl |
| 分子量 | 58.44 |
| 储存条件 | 常温 |
| 单位 | 瓶 |
| 规格 | 100ml 500ml |
Normal saline 生理盐水（9%，无菌）
| CAS | 7647-14-5 |
| 分子式 | NaCl |
| 分子量 | 58.44 |
| 储存条件 | 常温 |
| 单位 | 瓶 |
| 规格 | 100ml 500ml |
是常用的渗透压与动物或人体血浆的渗透压基本相等的氯化钠水溶液，可用于多种生理学实验，是常用的溶剂之一。0.9%生理盐水为哺乳类常用浓度; 0.85%生理盐水为常规实验常用浓度; 0.75%生理盐水为鸟类常用浓度; 0.65%生理盐水为两栖类常用浓度。
干细胞研究中常用的蛋白和细胞因子
本文主要介绍干细胞研究中常用的几种蛋白和细胞因子，如您需要查看相关的产品，或咨询技术问题，可以联系Peprotech代理商上海金畔生物。
Activin A (活化素A)
别名：Inhibin beta-1, FRP, FSH (Follicle-stimulating hormone)-releasing protein
描述：Activin A是TGF-β超家族的成员之一，具有调节细胞增殖和分化、促进神经元存活等多种生物学活性。在人结直肠肿瘤和罹患乳腺癌的绝经后妇女中均检测到Activin A水平的增加。Activin A的生物学活性可被inhibins(抑制素)和可扩散的TGF-β拮抗剂–Follistatin(卵泡抑素)所中和。Activin A可与两种Activin I型受体(Act RI-A和Act RI-B)及两种Activin II型受体(Act RII-A和Act RII-B)结合。重组的Activin A 的分子量为26.0kDa,是由2条βA链经二硫键连接而成的同源二聚体，每条链含116个氨基酸残基。人、小鼠和大鼠Activin A的氨基酸序列100%一致。
FGF-basic (成纤维细胞生长因子)
别名：Fibroblast Growth Factor-basic, FGF-2, HBGF-2,Prostatropin
描述：FGF-basic是23个已知的FGF家族成员之一，该家族的蛋白通过促进细胞增殖和分化而在多种组织的出生前和出生后发育、以及再生中发挥重要作用。FGF-basic为非糖基化的肝素结合生长因子，表达于脑、垂体、肾、视网膜、骨，睾丸、肾上腺、肝、单核细胞、上皮细胞和内皮细胞。
FGF-basic通过FGFR 1b，1c，2c，3c和4进行信号传递。
LIF (白血病抑制因子)
别名：Leukemia Inhibitory Factor, Differentiation-stimulating factor, D factor, Melanoma-derived LPL inhibitor (MLPLI)
描述：LIF是一种多效性细胞因子，由多种细胞，包括T细胞、髓单核细胞系、成纤维细胞、肝、心脏和骨髓瘤等产生。LIF通过抑制自发分化而促进胚胎干细胞的长期维持，其还有刺激肝脏合成急性期蛋白、促进胆碱能神经的分化、通过抑制脂肪细胞中的脂蛋白脂酶而阻止脂肪的形成等作用。人LIF对于小鼠细胞具有完全的生物活性，因而也广泛用于小鼠胚胎干细胞的维持培养，而小鼠LIF对人细胞无活性，其仅作用于小鼠细胞。
TGF-β1(转化生长因子-β1)
别名：Transforming Growth Factor-β1,Differentiation inhibiting factor, Cartilage-inducing factor
描述：哺乳动物的TGF-β存在三个亚型，即TGF-β1, β2和β3。它们均通过相同的受体传递信号，产生相似的生物学反应。这些细胞因子具有调节细胞增殖、生长、分化、运动、以及细胞外基质的合成和沉积等多种功能，并且也参与胚胎发生、组织重塑和伤口愈合等生理过程。 TGF-β主要以无活性复合物的形式被细胞分泌，储存在细胞表面和细胞外基质中。从无活性复合物中释放出具生物活性的TGF-β亚型需要蛋白水解和/或Thrombospondin- 1 ( 凝血酶敏感蛋白-1)等蛋白诱导引起的构象改变等步骤。 TGF-β1是几乎所有类型细胞中分泌最多的亚型，最初因其具有诱导成纤维细胞表型转化的能力而被鉴定出来。近来发现，TGF-β1 也参与皮肤肿瘤的形成。
Vitronectin (玻璃粘连蛋白)
别名：VTN, Serum-spreading factor, V75
描述：Vitronectin为分泌型糖蛋白，在肝脏中合成。其在循环中主要以单体形式存在，但也可通过构象改变生成以二硫键相连的多聚体。多聚体Virro-nectin能有效地结合并掺入细胞外基质。在基质中，Vitronectin可通过结合多种整合素和其它白多糖而对细胞粘附起到支持作用。重组的Vit-ronectin 在人胚胎干细胞维持培养基中常用作一种化学成分明确的基质成分。
以PeproTech的重组人Vitronectin(产品编号：140-09替代Matrigel作为基质铺板，培养人胚胎干细胞 。重组人Vitronectin为纯化的单一蛋白，因此是化学成分明确的基质。
购买产品，咨询技术问题，请联系PeproTech代理商–上海金畔生物
Western blot常用封闭液及注意事项
通常我们在做Western blot实验中，会用到固相载体（如NC膜，PVDF膜），在这些固相载体表面有很多洞洞，通过电转，胶上的蛋白被转移到膜上，蛋白以机械填补（堆积）和吸附的方式结合于表面。蛋白塞进了表面的很多洞洞里面，但是蛋白并不是连续的，而有很多空隙，抗体也是蛋白，也会被吸附在空的洞里，这样就会有很多非特异性的信号。
封闭液中的蛋白可以与固相载体表面的空白位置结合，同样以机械填补（堆积）和吸附覆盖的方式结合在膜上，因为有“填补”和覆盖“蛋白结合位点以避免一抗的非特异性结合，所以有”封闭“的说法。同样这两种作用使封闭液中的蛋白能够狠牢固的结合在空白位置上，这样抗体蛋白就不会被非特异性的吸附到膜上，而只会跟特异性蛋白结合。
封闭液应封闭所有的未结合位点而不替换表面上的靶蛋白，不结合靶蛋白表位，也不与抗体或检测试剂有交叉反应。
常见的封闭液：
1.BSA BSA是最常用的封闭液，成分单一适用于大多数情况。若免疫原是偶联BSA的，BSA有很强的免疫原性，会导致产生很多针对BSA的抗体，为避免交叉反应，不能用BSA，脱脂奶粉封闭，可以选用酪蛋白或无蛋白的封闭液。
2.血清 封闭血清的原理主要有两点，第一是待测样本有些与蛋白非特异性结合的物质，从而导致背景过高，因此可以用BSA或血清封闭掉这部分分特异性的结合，从这点看，BSA和血清没有明显区别。第二待测样品中可能会有Fc受体，可以和抗体恒定区结合，与抗体特异性无关，封闭血清中有抗体，因此用血清可以封闭掉一抗及二抗和样本Fc受体之间的结合，BSA无法封闭Fc受体。
3.脱脂奶粉 脱脂奶粉最大的优点是价格便宜，但由于成分相对复杂，所以适用范围要狭窄一些。磷酸化抗体也许会导致背景增加，此外，因为自身含有生物素，不能用于生物素标记的抗体系统。脱脂奶粉种含有少量的生物素和碱性磷酸酶残留，在使用生物素-亲和素系统和碱性磷酸酶标记的二抗时，也会使得高背景或本底水平增高。
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| 品牌 | 产品名称 | 产品货号 | 规格 |
| Vector | BLOXALL® Endogenous Blocking Solution, Peroxidase and Alkaline Phosphatase | SP-6000-100 | 100 ml |
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细胞凋亡实验检测原理及常用检测产品介绍
细胞凋亡是以细胞内明显的形态和生化变化为特征的程序性细胞死亡过程。是多细胞生物确保严重受损或突变细胞被清除的一个基本过程。这对调节免疫反应、发育和癌症中可能受损至关重要。我们有易于使用的凋亡试剂盒、膜联蛋白V试剂和针对常见凋亡标记物的抗体来确定细胞凋亡水平。
Annexin V
原理：在细胞凋亡的早期阶段，质膜被重新排列，导致细胞膜磷脂不对称性的改变。这些重排的作用之一是在外质膜上显示磷脂酰丝氨酸（PS）。在健康、静止的细胞中，PS仅位于内膜上，因此PS暴露是早期凋亡的迹象。膜联蛋白V在Ca2+存在下对PS具有高结合亲和力，因此是检测凋亡细胞的常用工具。
丝氨酸蛋白酶激活在细胞凋亡、肿瘤恶性程度以及乳腺癌、头颈癌的诊断指标中起着重要作用。
我们的荧光标记丝氨酸蛋白酶抑制剂（FLISP）试剂盒允许检测活细胞中丝氨酸蛋白酶的细胞内糜蛋白酶样活性。细胞内的活性糜蛋白酶样酶与荧光团（FAM）标记的FLISP抑制剂探针共价结合，在细胞内保留绿色荧光信号。细胞内活性糜蛋白酶样酶的浓度越高，观察到的荧光水平越高。FLISP试剂盒还包含碘化丙啶，用于流式细胞术鉴定死亡细胞，以及Hoechst 33342用于荧光显微镜下的核标记。
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| Active chymotrypsin-like serine protease activity staining by flow cytometry. Jurkat cells were treated as shown with 1mM staurosporine to induce apoptosis. The cells were then stained using the FLISP FAM-Phe-DAP Serine Protease Assay Kit including propidium iodide (APO009). Apoptotic cells positive for serine protease activity can be seen in the bottom right quadrant and dead cells positive for both serine protease and PI in the top right quadrant. Healthy cells are negative for both stains. Data acquired on the ZE5™ Cell Analyzer. |
Cathepsin Kits
该试剂盒能够检测溶酶体中包含的活性组织蛋白酶，它们参与自噬途径和吞噬作用。当释放到细胞质中时，它们可以调节细胞凋亡的内源性和外源性途径。组织蛋白酶家族由几种储存在称为溶酶体的细胞器中的蛋白水解酶组成。
这也是涉及溶酶体的细胞自噬的关键途径，这是细胞自我消化的过程。
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| Fig. 5. Cathepsin B staining in HeLa cells. HeLa cells were stained with Magic Red Cathepsin B Kit (ICT937) using Hoechst as a counterstain. A, Hoechst. B, Magic Red Cathepsin B. C, overlay. |
细胞凋亡相关检测产品
| 品牌 | 货号 | 产品名称 | 规格 |
| Bio-Rad | ICT097 | FAM FLICA™ CASPASE-1 KIT | 25 TESTS |
| Bio-Rad | ICT923 | FAM FLICA™ CASPASE-10 KIT | 100 TESTS |
| Bio-Rad | ICT093 | FAM FLICA™ CASPASE-3/7 KIT | 25 TESTS |
| Bio-Rad | ICT091 | FAM FLICA™ POLY CASPASE KIT | 25 TESTS |
| Bio-Rad | ICT946 | MITOCHONDRIAL MEMBRANE POTENTIAL KIT | 500 TESTS |
经典的信号通路研究
不同时期的凋亡检测
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