链霉亲和素(安捷伦)使用窍门与技巧

链霉亲和素(安捷伦)使用窍门与技巧

在使用安捷伦链霉亲和素产品的时候,可能很多客户对有些部分不知道怎么使用,或者对产品有一些问题疑惑。那通过本文讲解链霉亲和素使用窍门与技巧,就能帮助大家解决这些问题了。当然,更多关于链霉亲和素使用的问题,如本文没提及到,可以联系我们上海金畔生物。

1.我可以用水溶解冻干链霉亲和素吗?还是必须用 PBS?

链霉亲和素易溶于水或含盐缓冲液,浓度高达 50 mg/mL 以上。在中性或酸性 pH 条件下,冻干链霉亲和素在重新溶解于水或其他低离子强度缓冲液时,可能会发生聚集。安捷伦链霉亲和素已在弱碱性 pH 下从稀氯化钠溶液中冻干,从而尽可能减少聚集体的形成。在极少数情况下,链霉亲和素在溶于去离子水或低离子强度缓冲液时可能含有少量的不溶物质,无论是在最初溶解时还是在冻融循环后。在含盐缓冲液(例如 PBS)存在的情况下,通常观察不到这种效果。如果观察到未溶解物质,可以通过离心将其去除,它们不会构成总蛋白质的重要部分。

2.如何复溶链霉亲和素以避免形成聚集体?

对于 1 g 或 100 mg 溶液瓶,我们的标准技术是加入足量的缓冲液,使其溶解至 20–50 mg/mL,然后立即开始旋转溶液瓶。例如,您可以将溶液瓶放在工作台上,并以紧密的圆周运动方式将其迅速移动。继续旋转直到蛋白质溶解,这可能需要几分钟,从而尽可能减少聚集体的形成。如果之后有一点混浊,请先通过离心将其去除再使用该材料。当以这种方式溶解时,离心后的回收率应与溶液瓶上显示的 A280 测量结果一致。

在溶于水或低离子强度缓冲液时,避免聚集体形成是最重要的一点(如 SA10 技术数据表中所述)。在 PBS 和更高离子强度缓冲液中复溶链霉亲和素似乎对持续搅动不太敏感。然而,即使在使用 PBS 时也不要只是添加缓冲液,让溶液瓶保持不动,然后等待链霉亲和素溶解。对于分配到微量离心管中的 10 mg 样品和其他样品,添加足量的缓冲液使其溶解至 5–50 mg/mL。然后通过上下移液进行混合,直到观察到内容物已经溶解。对于这样的少量样品,复溶非常迅速。

3.产品中是否含有盐等添加剂?

安捷伦链霉亲和素以冻干形式提供,每毫克冻干产品含有约0.9 mg 蛋白质;其余为氯化钠。因此,每毫克冻干产品含有0.1 mg 氯化钠 (10%)。但我们按蛋白质含量进行分配,如果您购买一克链霉亲和素,您将收到一克链霉亲和素和额外的盐,而不是总共一克冻干产品。我们提供 NaCl 的含量信息,为称量产品的客户提供参考。

4.在SDS-PAGE 凝胶上观察到的 SA10 链霉亲和素分子量应该为多少? 

(分析证书指出该产品应主要作为 SDS-PAGE 的单一条带运行。)

链霉亲和素是分子量约为 52 kDa 的同源四聚体。随着SDS-PAGE 样品缓冲液中的热变性,链霉亲和素四聚体

分解为单体,在 SDS-PAGE 凝胶上以约 13 kDa 运行。在SDS-PAGE 处理之前,必须将链霉亲和素加热至沸腾(例如,在含有 0.2% SDS 的上样缓冲液中于 100 °C 下加热 20 分钟),使蛋白质完全变性。否则,四聚体可能无法完全分解为单体,SDS-PAGE 上可能出现四聚体形式。链霉亲和素中没有半胱氨酸残基(因此没有二硫键),因此样品缓冲液中是否存在还原剂(如 DTT 或 β-巯基乙醇)不会有什么不同。

更多详情请咨询Agilent中国代理商-上海金畔生物

安捷伦AdvanceBio糖苷酶新产品推荐

安捷伦AdvanceBio糖苷酶新产品推荐

随着生物治疗药物分子的表征需求迅速增加,包括糖基化在内的翻译后修饰的表征变得越来越重要。安捷伦推出新的糖苷酶产品,帮助客户解决复杂的分析挑战。现已上市四种新的重组糖苷酶:


新产品 替代的旧产品
GK80075 α(1-2)-甘露糖苷酶 GKX-5009 (obsolete)
GK80080 ß(1-4)-半乳糖苷酶 GKX-5014 (active)
GK80085 α(1-3,4,6)-半乳糖苷酶 GKX-5007 (active)
GK80060唾液酸酶V GKX-5020 (obsolete)


在通过 LC/FLD 对复杂样品的单个聚糖结构进行表征分析时,许多结构不同的聚糖有可能共流出。这四种外切糖苷酶是简化表征过程的关键工具:

α(1-2)-甘露糖苷酶对寡糖非还原末端的α(1-2)-连接的甘露糖残基具有高度特异性。可用于测序、酶解至 Man5 结构。

 ß(1-4)-半乳糖苷酶可用于区分 ß(1-4) 和 ß(1-3) 半乳糖连接。

 α(1-3,4,6)-半乳糖苷酶可用于鉴定可能具有潜在免疫原性的含 α-gal 聚糖(Galili 抗原)。

 唾液酸酶 V 一般用于去唾液酸化,可与唾液酸酶 A(GK80040) 搭配使用,鉴定 α(2-9) 连接的唾液酸。

GK80060、GK80080 和 GK80085 带有 His 标签,客户可通过 IMAC(固定化金属亲和色谱法)轻松去除酶解后多余的酶。

安捷伦还可以为客户提供多种糖苷酶,包括内切糖苷酶和外切糖苷酶。

 

内切糖苷酶是将低聚糖从糖蛋白及其他底物中释放出来。这些酶可用于在分析前对糖蛋白进行去糖基化,或用于释放N糖以进行标记和分析。

外切糖苷酶是一种糖苷水解酶,可酶解末端残基的糖苷键。这些酶可用于研究游离的多聚糖、糖脂和糖蛋白。针对特定结合位点的外切糖苷酶也可用于低聚糖的测序。

 

内切糖苷酶 内切糖苷酶可在多聚糖结构内进行裂解。N-糖酶(PNGase F,实际上为一种天冬酰胺酰胺酶)因具备释放大多数完整 N糖的功能而广泛用于研究游离多聚糖及生成去 N-糖基蛋白质。

Agilent

GKE-5002

AdvanceBio Endoglycosidase H

内切糖苷酶 H

30 mU (200 ul)

裂解高甘露糖型和一些杂合型 N-糖的 

N,N’-二乙酰壳聚糖(GlcNAc-GlcNAc) 核心

Agilent

GKE-5003

PNGase F (native, Elizabethkingia mening

PNGase F

100 mU (50 ul)

通过在最内侧的 GlcNAc Asn 之间进行裂解,

释放完 整 N-

Agilent

GKE-5006A

AdvanceBio N-Glycanase (PNGase F), >2.5

N-聚糖酶
(PNGase F)

100mU in 40 ul

通过在最内侧的 GlcNAc  Asn 之间进行裂解,

释放完整 N-

Agilent

GKE-5006B

AdvanceBio N-Glycanase (PNGase F), >2.5

200mU in 80 ul

Agilent

GKE-5006A-05

AdvanceBio N-Glycanase (PNGase F), >2.5

5×100mU in 40 ul

Agilent

GKE-5006B-1

AdvanceBio N-Glycanase (PNGase F), >2.5

5×200mU in 80 ul

Agilent

GKE-5006D

AdvanceBio N-Glycanase (PNGase F), >2.5

1U in 400ul

Agilent

GKE-5008

AdvanceBio Endo F2, recombinant

内切糖苷酶 F2

6 mU (60 ul)

裂解高甘露糖型和二天线型复合 N-糖的壳二糖 

(GlcNAcGlcNAc) 核心

Agilent

GKE-5010B

AdvanceBio N-Glycanase-PLUS (PNGase F)

N-聚糖酶-plus

400mU in 40ul

通过在最内侧的 GlcNAc Asn 之间进行裂解,

释放完整 N-

Agilent

GKE-5010D

AdvanceBio N-Glycanase-PLUS (PNGase F)

1U in 100ul

Agilent

GKE-5010B-2

AdvanceBio N-Glycanase-PLUS (PNGase F)

5×400mU in 40ul

Agilent

GKE-5016B

AdvanceBio N-Glycanase (PNGase F, EDTA-F

N-聚糖酶(PNGase F

不含 EDTA

200mU in 80 ul

通过在最内侧的 GlcNAc Asn 之间进行裂解,

释放完整 N-

Agilent

GKE-5016A-05

AdvanceBio N-Glycanase (PNGase F, EDTA-F

5×100mU in 40 ul

Agilent

GKE-5016B-1

AdvanceBio N-Glycanase (PNGase F, EDTA-F

5×200mU in 80 ul

Agilent

GKE-5016D

AdvanceBio N-Glycanase (PNGase F, EDTA-F

1U in 400 ul

Agilent

GKE-5020D

AdvanceBio N-Glycanase-ULTRA (PNGase F,

N-聚糖酶-ultra
PNGase F

不含 EDTA

1U in 100ul

通过在最内侧的 GlcNAc Asn 之间进行裂解,

释放完整 N-

Agilent

GKE-5020B-5

AdvanceBio N-Glycanase-ULTRA (PNGase F,

5×400mU in 40ul

Agilent

GKE-5020D-10

AdvanceBio N-Glycanase-ULTRA (PNGase F,

10×1U in 100ul

Agilent

GKE-5011A

AdvanceBio PNGase A (almond), 2 mU

PNGase A

2mU

裂解糖肽 N-糖,

包括带有 α(1, 3)-连接的核心岩藻糖的多聚糖,

常见于昆虫和植物多聚糖

Agilent

GKE-5011B

AdvanceBio PNGase A (almond), 10 mU

10mU

Agilent

GK80090

AdvanceBio O-Glycanase

O-聚糖酶

50 mU (40 ul)

从蛋白质中释放未取代的 Ser/Thr 连接的 

GalGalNAc


外切糖苷酶

外切糖苷酶可从多聚糖上裂解暴露或“末端”的单糖残基。常用的外切糖苷酶包括用于去糖基化的半乳糖苷酶,以及用于 游离多聚糖、糖蛋白或细胞去唾液酸化的唾液酸酶(神经氨酸酶)。

Agilent

GK80040

AdvanceBio Sialidase A, 1 U

1 U (200 ul)

唾液酸酶 A

从低聚糖和糖蛋白中释放 α(2, 3)-α(2, 6)-α(2, 8)- α(2, 9)-

接的唾液酸

Agilent

GK80045

AdvanceBio Sialidase A, 51 kDa

1 U (200 ul)

唾液酸酶 A-51

从低聚糖和糖蛋白中释放 α(2, 3)-α(2, 6)-α(2, 8)-  α(2, 9)-

接的唾液酸

Agilent

GK80046

AdvanceBio Sialidase A, 66 kDa

1 U (200 ul)

唾液酸酶 A-66

从低聚糖和糖蛋白中释放 α(2, 3)-α(2, 6)-α(2, 8)-  α(2, 9)-

接的唾液酸

Agilent

GK80043

AdvanceBio Sialidase A, Sampler Kit

1 ea

唾液酸酶 A

从低聚糖和糖蛋白中释放 α(2, 3)-α(2, 6)-α(2, 8)- α(2, 9)-

接的唾液酸

Agilent

GK80030

AdvanceBio Sialidase C, 1 U

1 U (100 ul)

唾液酸酶 C

从低聚糖、糖蛋白、复杂碳水化合物中释放 α(2-3, 6)-连接的唾液酸

Agilent

GK80021

AdvanceBio Sialidase S, His-tagged

3 U

唾液酸酶 S

从复杂碳水化合物中释放 α(2-3)-连接的唾液酸

Agilent

GK80085

AdvanceBio α(1-3,4,6)-Galactosidase

5 U

α(1-3, 4, 6)-半乳糖苷酶

从低聚糖中释放非还原末端 α(1-3, 4, 6)-连接的半乳糖

Agilent

GKX-5012

β(1-4,6)-Galactosidase (jack bean)

5 U lyophilized

β(1-4, 6)-半乳糖苷酶

酶水解非还原末端 Galβ(1-6)GlcNAc  Gal β(1-4)GlcNAc

Galβ(1-3)GlcNAc 

水解缓慢

Agilent

GKX-5013

β(1-3,4)-Galactosidase (bovine testis)

0.5 U

β(1-3, 4)-半乳糖苷酶

酶水解非还原末端 β(1-3)  β(1-4) 连接的半乳糖

Agilent

GK80080

AdvanceBio β(1-4)-Galactosidase, recomb

200 mU

β(1-4)-半乳糖苷酶

从低聚糖和糖蛋白中释放非还原末端 β(1-4)-连接的半乳糖

Agilent

GKX-5003

β-N-Acetylhexosaminidase (jack bean)

5U in 100ul

β-N-乙酰己糖胺酶

释放非还原末端 β(1-2, 3, 4, 6)-连接的 N-乙酰氨基葡萄糖 (GlcNAc) 

 N-乙酰半乳糖胺 (GalNAc) 残基

Agilent

GK80050

AdvanceBio β-N-Acetylhexosaminidase

1.6 U

β-N-乙酰己糖胺酶

酶裂解所有非还原末端 β-连接的 N-乙酰氨基葡萄糖 (GlcNAc)

Agilent

GKX-5023

β-(1-2,3,4,6)-Hexosaminidase, Sequencing

15U in 50ul

β(1-2, 3, 4, 6)
N-乙酰己糖胺酶

释放非还原末端 β(1-2, 3, 4, 6)-连接的 N-乙酰氨基葡萄糖 (GlcNAc)

 N-乙酰半乳糖胺 (GalNAc) 残基

Agilent

GK80075

AdvanceBio α(1-2)-Mannosidase (recomb)

2 mU

α(1-2)-甘露糖苷酶

从低聚糖的非还原末端释放 α(1-2)-连接的甘露糖残基

Agilent

GKX-5010

α(1-2,3,6)-Mannosidase (jack bean)

10 U

α(1-2, 3, 6)-甘露糖苷酶

从低聚糖中释放非还原末端 α(1-2, 3, 6)-连接的甘露糖

Agilent

GKX-5010-50

α(1-2,3,6)-Mannosidase (jack bean)

5 x 10U

Agilent

GK80060

AdvanceBio Sialidase V, recombinant 1 U

1 U

唾液酸酶 V

从低聚糖和糖蛋白中释放 α(2, 3)-  α(2, 6)-连接的唾液酸。

同时对 α(2, 8)-连接的唾液酸具有一定的活性

更多糖苷酶想产品,请咨询安捷伦糖型分析产品线经销商上海金畔生物

更多详情请咨询Agilent中国代理商-上海金畔生物

安捷伦链霉亲和素产品介绍

安捷伦链霉亲和素产品介绍

安捷伦链霉亲和素提供天然和重组形式,具有出色的批次间一致性,可为您提供超高性能。


链霉亲和素是四聚体,每个单体都包括一个生物素结合位点。可用于结合溶液中的生物素化分子,作为生物素化分子固定化的捕获剂(磁珠、微孔板、膜),或利用链霉亲和素-生物素相互作用进行蛋白质之间的偶联。


安捷伦链霉亲和素以冻干形式提供,易溶于水或含盐缓冲液,浓度高达 50 mg/mL 以上。


SA10 链霉亲和素是安捷伦历史悠久的链霉亲和素产品,25 年来一直是行业内广泛使用的主流产品。它从发酵的亲和素链霉菌中高度纯化得到,分子量为 52 kDa。SA10 也称为“核心”链霉亲和素,这是由于在细胞培养中发生的全长链霉亲和素蛋白质的加工。SA26 链霉亲和素-plus 在大肠杆菌中以重组形式生成,分子量为55 kDa。已经发现链霉亲和素-plus 在某些应用中具有优异的性能,例如将其固定化为ELISA 捕获剂。


链霉亲和素的两种产品 

SA10 链霉亲和素(天然) 由亲和素链霉菌的大规模发酵培养物纯化而成

SA26 链霉亲和素 -plus(重组) 来自在大肠杆菌中表达的亲和素链霉菌的重组基因,从发酵培养物中纯化得到的蛋白质


Agilent

SA10-10

Streptavidin, 10 mg

10 mg

Agilent

SA10-100

Streptavidin, 100 mg

100 mg

Agilent

SA10

Streptavidin, 1000 mg

1000 mg

Agilent

SA26-10

Streptavidin-plus 10 mg (recombinant)

10 mg

Agilent

SA26

Streptavidin-plus 100 mg (recombinant)

100 mg

如果需要更多的链霉亲和素信息,请联系安捷伦9P产品代理商上海金畔生物。

更多详情请咨询Agilent中国代理商-上海金畔生物

安捷伦链霉亲和素-高质量天然和重组链霉亲和素产品

安捷伦链霉亲和素-高质量天然和重组链霉亲和素产品

链霉亲和素是四聚体,每个单体都包括一个生物素结合位点。可用于结合溶液中的生物素化分子,作为生物素化分子固定化的捕获剂(磁珠、微孔板、膜),或利用链霉亲和素-生物素相互作用进行蛋白质之间的偶联。

安捷伦链霉亲和素提供天然和重组形式,具有出色的批次间一致性,可为您提供超高性能;安捷伦霉亲和素以冻干形式提供,易溶于水或含盐缓冲液,浓度高达50 mg/mL 以上。

链霉亲和素选项

SA10 链霉亲和素是我们历史悠久的链霉亲和素产品,25 年来一直是行业内广泛使用的主流产品。它从发酵的亲和素链霉菌中高度纯化得到,分子量为52 kDa。SA10 也称为“核心”链霉亲和素,这是由于在细胞培养中发生的全长链霉亲和素蛋白质的加工。

SA26 链霉亲和素-plus 在大肠杆菌中以重组形式生成,分子量为 55 kDa。已经发现链霉亲和素-plus 在某些应用中具有优异的性能,例如将其固定化为ELISA 捕获剂。

产品描述 货号 包装规格 四聚体分子量 比活度 应用

链霉亲和素天然来源于亲和素链霉菌(“心”链霉亲和素)

SA10-10 10mg 约52kDa

 14.0 U/mg

偶联,ELISA
SA10-100 100mg
SA10 1000mg
链霉亲和素 -plus 

重组基因来自亲和素链霉菌,

在大肠杆菌中表达

SA26-10 10mg 约55kDa

15.0 U/mg

偶联,ELISA,在链霉亲和素的固定化应用中性能良好
SA26-100 100mg

* 这些链霉亲和素产品具有多种包装规格,并以冻干形式提供。单批次的数量大,批次之间具有出色的一致性

**利用行业标准 HABA 染料结合检测得到的比活度。利用某些供应商所用的其他生物素滴定检测法进行测量时,比活性测量结果会更高

固定化链霉亲和素


链霉亲和素化琼脂糖是链霉亲和素与交联的 4.3% 琼脂糖微珠 连接的产物,其中微珠粒径分布为 75–300 微米。

生物素结合能力使其能够固定生物素化分子。应用包括固定 生物素化抗体,用于相关抗原的亲和纯化。 

链霉亲和素通过具有 15 碳间隔臂的稳定酰胺键与微珠连接。 该连接在宽 pH 范围 (4–11) 内保持稳定。填充微珠中的链霉 亲和素含量高于 1 mg/mL。

产品描述 货号 包装规格
链霉亲和素化琼脂糖 CJ30R-10 10mL
CJ30R-20 20mL
CJ30R 100mL

1. Pähler A. et al. Characterization and crystallization of core streptavidin. J. Biol. Chem. 1987, 

262(29), 13933-37.

链霉亲和素 – 酶偶联物


链霉亲和素-HRP(辣根过氧化物酶)偶联物针对 ELISA 流程和需要高信噪比的应用进行了优化。偶联物由优化的非汞稳定剂制成,以确保其长期稳定性。

我们还提供 HRP 和 AP(碱性磷酸酶)偶联稳定剂。

产品描述 货号 包装规格

链霉亲和素-HRP 偶合物 ELISA

专为需要高信噪比的应用进行了优化

使用改良的无汞稳定剂制成

CJ30H-3 3*1mL
CJ30H-10 10mL
CJ30H-100 100mL
HRP 偶联物稳定剂

用于稀释(高达 1000 倍)的 HRP 偶联物(用去离子水可达到 50%)。防腐剂不含汞、不含叠氮

CJ95 500mL
CJ95-1000 1000mL
AP 偶联物稳定剂

用于稀释(高达 1000 倍)的 AP 偶联物(用去离子水可达到 50%)。防腐剂不含汞、不含叠氮

CJ90 500mL
CJ90-1000 1000mL


如需购买安捷伦链霉亲和素产品,请联系安捷伦(Agilent)中国代理商-上海金畔生物