外泌体提取试剂盒(细胞培养基上清)

外泌体提取试剂盒(细胞培养基上清)

¥1800.00

货号:BL920A

规格:50ml

品牌:Jinpan

产品简介:

外泌体(Exosome)是由活细胞分泌的直径约为30-150 nm的小囊泡,具有典型的脂质双分子层结构,存在于细胞培养上清液、血清、血浆、唾液、尿液、羊水以及其它生物体液中。外泌体被认为是特定细胞间效应物及信号大分子传递的信使,然而,人们对外泌体的形成,组成成分及所参与的生物学过程仍不完全清楚。对外泌体功能及转运机制进行生物学研究,需要研究者首先能够分离、提取出完整的外泌体, 但目前所使用的提取方法复杂繁琐, 且特异性不高。

外泌体提取试剂(细胞培养基上清)提供了一种从细胞培养液样品中浓缩、分离完整外泌体的简单且可靠的方法。通过试剂中的亲水性基团锁住样品中的水分子,迫使外泌体从细胞培养液样品中分离出来,然后通过短暂低速离心来收集总外泌体。

 

操作提示:

由于细胞培养常规所用的胎牛血清(FBS)本身含有较高含量的外泌体,为了确保所分离的外泌体来源于你感兴趣的目的细胞,建议使用无外泌体胎牛血清(FBS)培养目的细胞,否则会导致所收集的细胞来源外泌体掺入胎牛血清外泌体,出现污染现象。若无法获得无外泌体胎牛血清,一些细胞系也可采用无血清培养的方式培养长达12小时,即可避免外泌体污染现象。

 

使用方法(仅供参考):

1.收集细胞培养上清液,3000xg离心15分钟以去除上清液中的细胞及细胞碎片。

2.取上清转移至新的洁净EP 管中,切记不要搅动上清液中的团状沉淀物。

3.向步骤2中所收集的不含细胞的细胞培养上清液中加入0.5 倍体积的外泌体提取试剂(如:1 mL 细胞培养上清液中加入0.5 mL外泌体提取试剂;10 mL细胞培养上清液中加入5 mL外泌体提取试剂)。

4.轻摇或涡旋混匀细胞培养上清液/外泌体提取试剂混合物,直至成为均质溶液,4℃孵育过夜。

5.完成步骤4后,将样品置于4℃,10000xg离心30分钟。

6.吸弃上清液,EP 管底部的米色或白色沉淀物即含有外泌体(大部分情况下肉眼不可见)。

7.用适量PBS缓冲液或同类缓冲液重悬沉淀物(如:1 mL细胞培养上清液所得外泌体沉淀物,重悬体积为:25-100 µL;10mL细胞培养上清液所得外泌体沉淀物,重悬体积为:100-1000 µL)

8.沉淀物被重悬后,所获得的总外泌体即可用于下游分析鉴定实验,或进一步纯化总外泌体。分离提取获得的总外泌体可于4℃保存长达1周,-20℃长期保存。

 

注意事项:

1、本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品。

2、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

 

保存条件:

4℃保存,一年有效。

货号 BL920A
规格 50ml
品牌 Jinpan
说明书下载 点击下载

外泌体专用裂解液

外泌体专用裂解液货号: JP9587

产品描述
描述
        Exosome(外泌体)是由活细胞分泌的直径约为30-150 nm的小襄泡,具有典型的脂质双分子层结构,存在于 细胞培养上清液、血清、血浆、唾液、尿液、羊水以及其它生物体液中。Exosome携带有多种蛋白质、 脂类、 DNA和RNA等重要信息,不仅在细胞与细胞间的物质和信息传递中起重要作用,更有望成为多种疾病的早期 诊断标志物。 
        外泌体专用裂解液针对外泌体样本研发,能够高效的裂解外泌体蛋白。裂解液中含有蛋白酶抑制剂,有效 抑制蛋白降解,适合样本裂解后进行BCA检测,Western Blot等实验。本试剂含有高浓度的去垢剂,不适合 Bradford法测定蛋白浓度。 
使用方法
1、实验前请将裂解液置于2 ~ 8℃融化,冰上备用。 
2、外泌体重悬液按照1:1的体积比加入裂解液,轻轻吹打混匀,置于冰上裂解10min。 
3、4℃,12000×g离心5min取上清,用BCA法测定蛋白浓度或进行Western Blot等后续实验。 
储存/保存方法
-20℃保存,有效期12个月。
注意事项

1、本产品含有蛋白酶抑制剂,请分装保存,避免反复冻融。
2、裂解样品需要在冰上或是4°C进行。
3、裂解后蛋白浓度应小于2ug/uL,以保证裂解充分。
4、为了您的安全和健康,请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。

外泌体(Exosome)及其五种常用纯化方式介绍

外泌体(Exosome)及其五种常用纯化方式介绍

外泌体(Exosome)是发现于1986年,一种直径约30~150nm的双层膜囊泡状结构小体,可由机体内多种细胞如免疫细胞、干细胞、心血管细胞、网织红细胞、血小板、神经细胞和肿瘤细胞等主动分泌产生,广泛分布于外周血、尿液、唾液、乳汁、腹水、羊水等体液中。

外泌体携带大量特异性的蛋白质(如细胞因子、生长因子)以及功能性的mRNAs、miRNAs等生物活性物质,在体内参与细胞通讯、细胞迁移、促血管新生和抗肿瘤免疫等生理过程,与多种疾病的发生和进程密切相关。由于外泌体的特殊结构和功能,使得它具有潜在的应用价值,一方面可以作为诊断多种疾病的生物指标,另一方面也可以作为治疗手段,未来有可能作为药物的天然载体用于临床治疗。

外泌体的研究日益活跃并令人瞩目。但是,由于外泌体的纳米尺寸,同其它类型的胞外囊泡在理化和生化特征上部分重叠,以及自身在大小、组成和功能方面存在异质性,其分离纯化也面临挑战。下面小欣给大家从文献中总结出了目前几大主流外泌体纯化方法,供大家参考。

1、差速离心法(UC)

通过差速超速离心分离外来体通常包括一系列不同离心力和持续时间的离心循环,以根据外来体与样品中其他成分的密度和大小差异来分离外来体,是目前最常用的分析方法。

优势:降低了使用分离试剂造成的污染和成本;样本处理量大,产量高。

缺点:仪器成本投入高,笨重,运行时间长,耗人力,不便携;超速离心可能破坏外泌体而影响下游分析;经常存在杂蛋白和脂蛋白污染。

2、基于大小的分离技术

超滤离心法也是目前很常用的纯化方法之一,其采用不同膜大小和截留分子量(MWCO)的膜过滤器,使大于MWCO的颗粒留下,而小于MWCO的颗粒被丢弃,超滤法作为一种有效的浓缩方法经常与其他外泌体分离方法联合应用。

分子排阻层析(SEC)也常被报道用于外泌体制备,使用具有化学惰性和稳定性的多孔填料,采用非吸附的层析方法,按照不同大小分子流经的路径长短不同来进行样品分离。外泌体在填料的排阻极限之外,无法进入填料的孔隙中,而紧跟着外水体积最先排出;蛋白等其它杂质由于分子量小,可以进入填料孔隙中,经过较长的路径而晚出峰,由此分离。

优势:超滤:快速,不需要特殊仪器,便携。将RNA提取液流经膜可直接用于RNA抽提。SEC:较高纯度外泌体;通常在重力流下操作从而保留了外泌体的完整性和生物活性;可重复性好;中度样本处理量。

缺点:超滤:仪器成本低,中等纯度;剪切力可引起外泌体损伤;有可能造成聚集和囊泡陷入膜孔中,或外泌体吸附在膜上而损失。SEC:仪器成本中等,需要专用的设备;不易放大,运行时间长。

3、外泌体沉淀(PEG-base)

聚乙二醇(PEG),它在水中具有超溶性,可以“束缚”水分子,迫使较难溶的成分,如EV、外泌体、蛋白质和其它较难溶的成分从溶液中分离出来。通常是4℃用PEG孵育样品过夜,随后通过低速离心或过滤即可沉淀回收外泌体。

优势:容易操作,不需要特殊仪器;样本处理量大,具有可放大性。

缺点:缺乏选择性的分离机制,容易和非外泌体污染共沉淀,如其它胞外囊泡、蛋白聚集体、 高丰度蛋白等;运行时间长,需要在分离前先去除脂蛋白等亚细胞颗粒,在分离后去除聚合物材料。

4、免疫亲和捕获技术

免疫捕获过程需要使用微珠,通常约1μm,其带有铁核,通常被称为磁珠,这些磁珠表面包被有可识别外泌体表面标记物(如CD9、CD63和CD81)的捕获分子。捕获分子通常是抗体,但也可能是配体或纳米小体。磁珠可生产用于捕获一个表面标记,如CD63,或使用泛捕获方法捕获所有这三个表面标记。

优势:针对特定来源或亚群的外泌体分离是很好的选择;相比于其它分离方法,纯度要高出很多;利于外泌体的分型。

缺点:试剂成本高,需要预先确认好的外泌体标签(抗原);样本处理量低,只有带标签的外泌体被识别而产量低;仅适用于Cell-free样品;肿瘤的异质性妨碍了免疫识别,可能会造成假阴性;抗原表位可能被封闭或掩藏。

5、微流控技术

微尺度下,利用外泌体的生理和生化特性进行分离,如免疫亲和特性、大小和密度,结合新兴的声波纳滤、电磁和电泳等技术。微流控技术包括捕获微流控技术、过滤微流控技术、磁分离微流控技术、声学分离微流控技术和介电泳微流控技术等。

优势:快速、低成本、高度便携、容易实现自动化,可将外泌体分离和后续检测进行集成。

缺点:缺乏标准化和大规模的临床样本测试,缺少方法验证,低/中等程度的样本处理量。

更多关于外泌体产品或技术问题请咨询上海金畔生物

EV-Up™MSC专用外泌体生产用培养基细胞培养-Wako富士胶片和光

EV-Up™MSC专用外泌体生产用培养基细胞培养-Wako富士胶片和光

供货周期 两周 应用领域 医疗卫生,化工,生物产业,农业,制药

EV-Up™ 间充质干细胞专用外泌体生产用培养基是一种间充质干细胞(MSC)专用的外泌体(EVs)生产培养基。本品不含血清及动物源成分, 适用于多种组织来源的MSCs的培养。

EV-Up™ 间充质干细胞专用外泌体生产用培养基EV-Up™MSC专用外泌体生产用培养基细胞培养-Wako富士胶片和光

EV-Up™ 间充质干细胞专用外泌体生产用培养基是一种间充质干细胞(MSC)专用的外泌体(EVs)生产培养基。只要将EV-Up™ 间充质干细胞外泌体生产用添加剂,无动物源成分添加至EV-Up™ 间充质干细胞外泌体生产用基础培养基,无动物源成分中配成*培养基即可使用。本品不含血清及动物源成分, 适用于多种组织来源的MSCs的培养。

◆特点

● 比血清培养基的外泌体分泌量高

● 培养的外泌体活性高

● 维持MSC的高存活率

◆适用细胞

适用于多种组织来源的MSC

细胞种类

骨髓来源的MSC,脂肪来源的MSC,脐带基质来源的MSC等

◆使用方法

EV-Up™MSC专用外泌体生产用培养基细胞培养-Wako富士胶片和光

*1:往EV-Up™ 间充质干细胞外泌体生产用基础培养基,无动物源成分(产品编号:053-09451)中添加了EV-Up™ 间充质干细胞外泌体生产用添加剂,无动物源成分(产品编号:298-84001)即为EV-Up™ 完全培养基

6孔板培养

1. 将各种间充质干细胞以5×103的密度来铺板,然后用增殖培养基(血清培养基或无血清培养基)培养至80-90%汇合。

2. 去除增殖培养基后加入4 mL EV-UP™*培养基。培养3-5日。

3. 回收培养上清,2,000×g离心20分钟,用干净试管收集离心后的上清液,避免吸入沉淀。

※ 可在培养上清中添加1/100的EV-Save™ 细胞外囊泡吸附抑制剂来抑制试管或吸头等对EV的吸附。

4. 用MagCapture™ 外泌体提取试剂盒PS提取培养上清中的外泌体。

◆应用数据

外泌体粒子数

利用PS亲和法*1从各种培养基的培养上清液中提取外泌体,使用NanoSight的Nano Tracking Analysis技术对外泌体的粒子数进行分析。

EV-Up™MSC专用外泌体生产用培养基细胞培养-Wako富士胶片和光

*1:在金属离子的存在下,结合分子通过磷脂酰丝氨酸(PS)捕获细胞外囊泡后,再使用螯合剂洗脱的方法。

*1:使用MagCapture™外泌体提取试剂盒PS时,可以通过本方法进行外泌体提取。

*2:Exosome-Depleted FBS

FUJIFILM Wako研发的EV-Up™ *培养基,在培养MSC时,释放的外泌体粒子数是D-MEM+10% EV depleted FBS培养的2.6倍左右。另外,FUJIFILM Wako的EV-Up™ *培养基与血清培养基相比,可以分泌更多的EV。

抗纤维化活性

用TGFβ刺激培养人胎肺成纤维细胞(TIG3细胞),用PS亲和法从不同培养基的培养上清中提取EV,取5×107 particles/mL提取出的EV,用RT-PCR对纤维化标记物(Collagen III,αSMA)的基因表达水平进行定量,以比较抗纤维化活性。

EV-Up™MSC专用外泌体生产用培养基细胞培养-Wako富士胶片和光

EV-Up™MSC专用外泌体生产用培养基细胞培养-Wako富士胶片和光

EV-Up™MSC专用外泌体生产用培养基细胞培养-Wako富士胶片和光

使用FUJIFILM Wako研发的EV-Up™ *培养基的EV,强力抑制了由TGFβ引起的纤维化相关基因的表达。由此可见,FUJIFILM Wako的EV-Up™ *培养基能培养出的外泌体活性更高。

细胞存活率

将在血清培养基中扩增培养的人骨髓来源的MSC用不同培养基培养5天,然后检测产生外泌体后的细胞存活率。

EV-Up™MSC专用外泌体生产用培养基细胞培养-Wako富士胶片和光

FUJIFILM Wako 的EV-Up™ *培养基培养的MSC与D-MEM+10% EV-depleted FBS相比,具有同样高的细胞存活率。

外泌体标志物蛋白表达

用PS亲和法从培养上清液中提取外泌体,并通过ELISA检测标记蛋白CD9、CD63和CD81的表达。

EV-Up™MSC专用外泌体生产用培养基细胞培养-Wako富士胶片和光

EV-Up™MSC专用外泌体生产用培养基细胞培养-Wako富士胶片和光

EV-Up™MSC专用外泌体生产用培养基细胞培养-Wako富士胶片和光

FUJIFILM Wako的EV-Up™ *培养基与其他血清培养基相比,不同外泌体标记分子的表达更好。

◆产品列表

EV-Up™MSC专用外泌体生产用培养基

产品列表

产品名称

规格

包装

053-09451

EV-Up™ EV Production Basal Medium for MSC, AF

EV-Up™ 间充质干细胞外泌体生产用基础培养基,

无动物源成分

for Cell Culture

95 mL

298-84001

EV-Up™ MSC EV Production Supplement, AF

EV-Up™ 间充质干细胞外泌体生产用添加剂,

无动物源成分

for Cell Culture

100 mL

外泌体防吸附&冻结保护试剂

产品列表

产品名称

规格

包装

058-09261

EV-Save™ Extracellular Vesicle Blocking Reagent

EV-Save™ 细胞外囊泡保存稳定剂(超滤用)

for Genetic Research

1 mL

050-09461

EV-Save™ Extracellular Vesicle Blocking Reagent for 动物体内实验用

EV-Save™ 细胞外囊泡保存稳定剂(动物体内实验用)

for Genetic Research

1 mL


外泌体粒提取和纯化试剂

产品列表

产品名称

规格

包装

299-77603

MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS
MagCapture™外泌体提取试剂盒PS

for Genetic Research

2 tests

293-77601

10 tests

290-80301

PS Capture™ Exosome Isolation Resin Kit
PS Capture™外泌体提取树脂试剂盒

for Genetic Research

1 kit
(0.5 mL浆状)

294-84101

MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS Ver.2
MagCapture™外泌体提取试剂盒PS Ver.2

for Genetic Research

2 tests

290-84103

10 tests

通过超快隔离系统检测外泌体:EXODUS

通过超快隔离系统检测外泌体:EXODUS

外泌体在疾病诊断和治疗中显示出巨大的潜力。然而,目前的分离方法是繁重的,并且速度、产量和纯度都很低,限制了基础研究和临床应用。在这里,我们描述了一种通过超快分离系统(EXODUS)的高效外显体检测方法,该系统允许自动无标记纯化各种生物流体中的外显体。我们通过负压振荡和双耦合谐振子激活的膜振动获得了超高效的外体纯化。我们的两个耦合振荡器在膜上产生双频横波,使EXODUS在速度、纯度和产量方面优于其他隔离技术。我们通过纯化113例患者尿液样本中的外显体证明了外显子,并通过高分辨率和高通量分析验证了外显子RNA图谱的实际相关性。

参考文献:

Merchant, M. L., Rood, I. M., Deegens, J. K. J. & Klein, J. B. Isolation and characterization of urinary extracellular vesicles: implications for biomarker discovery. Nat. Rev. Nephrol. 13, 731–749 (2017). – PubMed – PMC

Wang, W., Luo, J. & Wang, S. Recent progress in isolation and detection of extracellular vesicles for cancer diagnostics. Adv. Healthc. Mater. 7, 1800484 (2018).

Geeurickx, E. & Hendrix, A. Targets, pitfalls and reference materials for liquid biopsy tests in cancer diagnostics. Mol. Asp. Med. 72, 100828 (2020).

Mader, S. & Pantel, K. Liquid biopsy: current status and future perspectives. Oncol. Res. Treat. 40, 404–408 (2017). – PubMed

Lu, Y. T., Delijani, K., Mecum, A. & Goldkorn, A. Current status of liquid biopsies for the detection and management of prostate cancer. Cancer Manag. Res. 11, 5271–5291 (2019). – PubMed – PMC

更多详情请咨询上海金畔生物

外泌体常见的提纯方式

外泌体常见的提纯方式

外泌体是指包含了复杂 RNA 和蛋白质的小膜泡 (30-150nm),现今,其特指直径在40-100nm的盘状囊泡。1983年,外泌体首次于绵羊网织红细胞中被发现, 1987年Johnstone将其命名为“exosome”。多种细胞在正常及病理状态下均可分泌外泌体。其主要来源于细胞内溶酶体微粒内陷形成的多囊泡体,经多囊泡体外膜与细胞膜融合后释放到胞外基质中 。

外泌体的提取(提纯)主要包括以下几种方式:

一是超速离心法:这是外泌体提取最常用的方法 。此种方法得到的外泌体量多,但是纯度不足,电镜鉴定时发现外泌体聚集成块, 由于微泡和外泌体没有非常统一的鉴定标准,也有一些研究认为此种 方法得到的是微泡不是外泌体 ;

二是过滤离心:这种操作简单、省时,不影响外泌体的生物活性 ,但同样存在纯度不足的问题;

三是密度梯度离心法:用此种方法分离到的外泌体纯度高,但是前期准备工作繁杂,耗时,量少;

四是免疫磁珠法:这种方法可以保证外泌体形态 的完整,特异性高、操作简单、不需要昂贵的仪器设备,但是非中性pH和非生理性盐浓度会影响外泌体生物活性,不便进行下一步的实验;

五是PS亲和法:该方法将PS(磷脂酰丝氨酸)与磁珠结合,利用亲和原理捕获外泌体囊泡外的PS。该方法与免疫磁珠法相似,获得的外泌体形态完整,纯度最高。由于不使用变性剂,不影响外泌体的生物活性,外泌体可用于细胞共培养和体内注射。2016.9《Scientific Reports》杂志发表了该方法最新数据,表明PS法可提取相当高纯度的外泌体;

六是色谱法:这种方法分离到的外泌体在电镜下大小均一, 但是需要特殊的设备,应用不广泛 。

更多详情请咨询上海金畔生物

PS Capture™ 外泌体ELISA试剂盒 抗小鼠IgG试剂盒-Wako富士胶片和光

PS Capture™ 外泌体ELISA试剂盒 抗小鼠IgG试剂盒-Wako富士胶片和光

供货周期 一个月 应用领域 生物产业

PS Capture™ 外泌体ELISA试剂盒 抗小鼠IgG
◆产品概要
本试剂盒是可以定性分析细胞培养上清和体液样品中提取的细胞外囊泡,以及定量分析细胞培养上清样品中的细胞外囊泡的ELISA试剂盒。让细胞外囊泡表面的磷脂酰丝氨酸(PS)特异性结合的蛋白在固定化的板上与细胞外囊泡反应并固定后,用任意细胞外囊泡表面标记蛋白的小鼠单抗作为检测一抗,试剂盒中的HRP标记抗小鼠IgG抗体为二抗。

PS Capture™ 外泌体ELISA试剂盒 抗小鼠IgG​PS Capture™ 外泌体ELISA试剂盒 抗小鼠IgG试剂盒-Wako富士胶片和光

 

◆产品概要

  本试剂盒是可以定性分析细胞培养上清和体液样品中提取的细胞外囊泡,以及定量分析细胞培养上清样品中的细胞外囊泡的ELISA试剂盒。让细胞外囊泡表面的磷脂酰丝氨酸(PS)特异性结合的蛋白在固定化的板上与细胞外囊泡反应并固定后,用任意细胞外囊泡表面标记蛋白的小鼠单抗作为检测一抗,试剂盒中的HRP标记抗小鼠IgG抗体为二抗,可高灵敏度检测表面具有任意标记蛋白的细胞外囊泡。

 

◆特点

采用PS结合分子Tim4包被板

● 通过磷脂酰丝氨酸(PS)结合分子进行捕获。※1

● 可检测出0.1 μL左右培养上清液的细胞外囊泡。

● 可用纯化细胞外囊泡标准品※2 定量检测。

● 高灵敏度检测(检测灵敏度可达WB※3 的50~1,000倍)。

 

高灵敏度定性·定量检测培养上清中的细胞外囊泡

※1 本方法比起使用抗体包被板的ELISA法,可以更好地定性·定量分析细胞外囊泡。

※2 请使用MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS纯化的细胞外囊泡标准品。

※3 WB法:免疫印迹实验

 

使用优化的试剂组成的试剂盒

● 优化对照用的一抗※4

● 优化检测用的二抗※5

● 采用显色法

 

操作简便,实验重复性高

※4 配套抗人CD63抗体。检测其他表面标记蛋白可使用任意小鼠单抗。

※5 配套抗小鼠IgG抗体-HRP标记。

 

◆试剂盒组成

试剂盒组成(96次)

包装

捕获外泌体96孔板

1个 (8 well×12 strips)

反应/洗涤缓冲液(10×)

50 mL×2瓶

外泌体结合增强子(100×)

10 mL×1瓶

对照一抗Anti-CD63(100×)

120 μL×1瓶

二抗HRP缀合抗小鼠IgG(100×)

120 μL×1瓶

TMB溶液

12 mL×1瓶

终止液

12 mL×1瓶

封板膜

4个

说明书

1本

 

◆应用实例

从各种细胞培养上清提取细胞外囊泡的定性分析

  将1 ng从各种细胞培养上清中提取的细胞外囊泡添加至孔中,使用能识别表面标记蛋白CD9、CD63、CD81的一抗通过本试剂盒对各表面标记量进行定性比较。

  另外,作为比较参考数据,将150 ng从各细胞培养上清提取的细胞外囊泡进行电泳,使用能识别表面标记的CD9、CD63、CD81的一抗对各表面标记蛋白量以Western blotting进行定性分析。

 

提取外泌体(1 ng/well)的定性比较数据                        参考比较数据

PS Capture™ 外泌体ELISA试剂盒 抗小鼠IgG试剂盒-Wako富士胶片和光  PS Capture™ 外泌体ELISA试剂盒 抗小鼠IgG试剂盒-Wako富士胶片和光

 

在ELISA系统和WB分析之间,标记蛋白的表达模式具有相关性。

 

参考数据:各种细胞的外泌体标记蛋白表达分析

PS Capture™ 外泌体ELISA试剂盒 抗小鼠IgG试剂盒-Wako富士胶片和光

分别使用1 ng各种细胞的培养上清液来源纯化外泌体(使用MagCapture来源外泌体提取试剂盒 PS),外泌体标记蛋白CD9、CD63、CD81对应的抗体,进行表达分析。

 

检测抗体

<ELISA>

抗CD9小鼠单抗(M-L13)

抗CD63小鼠单抗(H5C6)

<WB>

抗CD9兔多抗

抗CD63小鼠单抗(8A12)

抗CD81小鼠单抗(1D6)

 

细胞株不同,表达量*不同!

有的细胞株中可能存在对特定标记蛋白的表达较少的外泌体。

 

从正常人血清中提取的细胞外囊泡的定性分析

  从正常人血清的6个样品分别提取细胞外囊泡,通过BCA法算出细胞外囊泡膜上的蛋白浓度。分别添加40、20、10 ng的细胞外囊泡到孔中,用可识别表面标记CD63的对照组检测一抗(试剂盒配套)对检测的OD值进行定性比较。

 

提取外泌体(1 ng/well)的定性比较数据

PS Capture&trade; 外泌体ELISA试剂盒 抗小鼠IgG试剂盒-Wako富士胶片和光

即使是从体液样品中纯化的细胞外囊泡也具有良好的线性

 

从细胞培养上清中提取的细胞外囊泡的检测灵敏度的参考数据

  从COLO201细胞培养上清中提取细胞外囊泡,比较本试剂盒和免疫印迹的检测灵敏度。

 

Western blot和ELISA的检测灵敏度比较

PS Capture&trade; 外泌体ELISA试剂盒 抗小鼠IgG试剂盒-Wako富士胶片和光

图(a),(b)为使用各种抗CD63抗体(其他公司产品,Wako产品: 012-27063)进行免疫印迹的检测灵敏度数据

样品:COLO201细胞培养上清提取细胞外囊泡(使用MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS提取)

★:各抗体中免疫印迹的检测上限。

图(c)Exosome ELISA Kit检测上限数据

  使用本试剂盒梯度稀释COLO201细胞来源的纯化细胞外囊泡(使用MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS)后的样品以及仅有缓冲液的空白值检测并制备COLO201标准曲线。利用此标准曲线可算出COLO201来源纯化样品的低检测灵敏度。(按照各浓度点n=6,空白点n=12检测)

  

相比免疫印迹,可以更高灵敏度地检测标记蛋白。

 

从细胞培养上清中提取细胞外囊泡的稀释线性(Linearity)参考数据

  用从COLOC201细胞培养上清中提取的细胞外囊泡作为标准品制作标准曲线,评价COLO201细胞培养上清样品的5个稀释度(1:100-1:1600)的线性。

 

COLO201细胞培养上清

PS Capture&trade; 外泌体ELISA试剂盒 抗小鼠IgG试剂盒-Wako富士胶片和光

COLO201细胞培养上清

细胞伤情量

(μL)

稀释

测定值

(ng/mL)

期望值

(ng/mL)

预期百分比

比例

稀释因子(×)

0.0625

1:1600

0.000625

0.89

0.91

98.4

0.125

1:800

0.00125

1.82

1.72

105.6

0.25

1:400

0.0025

3.44

3.52

97.8

0.5

1:200

0.005

7.04

6.78

103.9

1

1:100

0.01

13.6

 

标准品:COLO201细胞来源外泌体

(使用MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS纯化)

检测样品:COLO201细胞培养上清

一抗:试剂盒配套抗CD63抗体

 

可以确认到良好的稀释线性以及可检测出0.1 μL细胞外囊泡。  

 

检测不同接种细胞数和不同培养时间的培养基中的细胞外囊泡

  在T75细胞培养瓶中接种1×107、2×107、3×107的COLO201细胞,培养72 h。每24 h回收一部分的培养上清样品,用PS Capture™ 外泌体ELISA试剂盒(抗小鼠IgG POD)和试剂盒配套的Control Primary Antibody Anti CD63 (100×) 进行CD63的吸光度检测。

  准备4 μL的细胞培养上清,用添加了Exosome Binding Enhancer的反应液/清洗液(1×)稀释至100 μL。

● 检测样品:COLO201细胞培养上清(25倍稀释)

● 接种细胞数:1×107、2×107、3×107个细胞/瓶

● 培养时间:24 h、48 h、72 h

● 一抗:抗CD63抗体

 

PS Capture&trade; 外泌体ELISA试剂盒 抗小鼠IgG试剂盒-Wako富士胶片和光

  只需使用4 μL的细胞培养上清液,就可直接检测细胞外囊泡量,在讨论新型的细胞株的培养条件时,省去了讨论条件的时间。

  可以简单方便地讨论如何分泌多的细胞外囊泡的条件。

 

添加药物后引起细胞外囊泡数量的变化

  在T225培养瓶接种K562细胞,以无血清培养基培养72 h。之后更换添加终浓度为10 μmol/L的莫能菌素钠和不含莫能菌素钠的无血清培养基,再培养24 h。培养后回收培养上清样品,用PS Capture™ 外泌体ELISA试剂盒(抗小鼠IgG POD)和试剂盒配套Control Primary Antibody Anti CD63(100×),检测CD63的吸光度。

  用添加了Exosome Binding Enhancer的反应液/清洗液(1×)稀释回收后的细胞培养上清,分别作为10倍稀释和100倍稀释的细胞培养上清样品。

● 检测样品:K562细胞培养上清(更换含莫能菌素钠(产品编号:ALX-380-026-G001)的培养基和对照培养基后培养24 h)

● 一抗:抗CD63抗体

 

PS Capture&trade; 外泌体ELISA试剂盒 抗小鼠IgG试剂盒-Wako富士胶片和光

  无需提取,少量培养基即可检测。

  可检测培养基中外泌体量随时间的变化,由于可数值化外泌体变化量,因此相比WB法更容易进行比较。

 

使用COLO201细胞培养上清来源和人血清来源纯化外泌体比较检测灵敏度

  制备下列①~⑥的样品,比较用PS Capture™ 外泌体ELISA试剂盒、A公司ELISA试剂盒、A公司ELISA试剂盒(高灵敏型)检测外泌体标记蛋白CD63时的灵敏度。

 

使用样品内容

① A公司ELISA试剂盒配套标准品

② A公司ELISA试剂盒(高灵敏型)配套标准品

③ 用MagCapture™ 外泌体提取试剂盒PS提取COLO201细胞培养上清来源外泌体

④ 用聚合物沉淀法提取COLO201细胞培养上清来源外泌体

⑤ MagCapture™ 外泌体提取试剂盒PS提取人血清来源外泌体

⑥ 聚合物沉淀法提取人血清来源外泌体

 

 

x1

1/16

1/1000

40 ng/mL

160 ng/mL

800 ng/mL

2000 µg/mL

x0.5

1/32

1/2000

20 ng/mL

80 ng/mL

400 ng/mL

1000 µg/mL

x0.25

1/64

1/4000

10 ng/mL

40 ng/mL

200 ng/mL

500 µg/mL

x0.125

1/128

1/8000

5 ng/mL

20 ng/mL

100 ng/mL

250 µg/mL

x0.0625

1/256

1/16000

2.5 ng/mL

10 ng/mL

50 ng/mL

125 µg/mL

 

PS Capture&trade; 外泌体ELISA试剂盒 抗小鼠IgG试剂盒-Wako富士胶片和光

  PS Capture™ 外泌体ELISA试剂盒相比A公司ELISA试剂盒和A公司ELISA试剂盒(高灵敏型),可更灵敏地检测到CD63。另外,A公司ELISA试剂盒和A公司ELISA试剂盒(高灵敏型)对各自试剂盒配套标准品的反应敏感,但对PS提取外泌体的反应性弱。

  由此证明,PS Capture™ 外泌体ELISA试剂盒相比公司ELISA试剂盒和A公司ELISA试剂盒(高灵敏型),可以更高特异性且高灵敏性地检测外泌体表面的CD63。

 

◆产品列表

产品编号

产品名称

包装

297-79201

PS Capture™ 外泌体ELISA试剂盒(抗小鼠IgG POD)

96 tests

 

◆相关产品

产品编号

产品名称

包装

299-77603

MagCapture™ 外泌体提取试剂盒PS

2 tests

293-77601

10 tests

 PS Capture™ 外泌体ELISA试剂盒 抗小鼠IgG​

PS Capture™ 外泌体ELISA试剂盒 抗小鼠IgG试剂盒-wako富士胶片和光

PS Capture™ 外泌体ELISA试剂盒 抗小鼠IgG试剂盒-wako富士胶片和光

供货周期 一个月 应用领域 生物产业

PS Capture™ 外泌体ELISA试剂盒 抗小鼠IgG
◆产品概要
本试剂盒是可以定性分析细胞培养上清和体液样品中提取的细胞外囊泡,以及定量分析细胞培养上清样品中的细胞外囊泡的ELISA试剂盒。让细胞外囊泡表面的磷脂酰丝氨酸(PS)特异性结合的蛋白在固定化的板上与细胞外囊泡反应并固定后,用任意细胞外囊泡表面标记蛋白的小鼠单抗作为检测一抗,试剂盒中的HRP标记抗小鼠IgG抗体为二抗。

PS Capture™ 外泌体ELISA试剂盒 抗小鼠IgG​PS Capture&trade; 外泌体ELISA试剂盒 抗小鼠IgG试剂盒-wako富士胶片和光

 

◆产品概要

  本试剂盒是可以定性分析细胞培养上清和体液样品中提取的细胞外囊泡,以及定量分析细胞培养上清样品中的细胞外囊泡的ELISA试剂盒。让细胞外囊泡表面的磷脂酰丝氨酸(PS)特异性结合的蛋白在固定化的板上与细胞外囊泡反应并固定后,用任意细胞外囊泡表面标记蛋白的小鼠单抗作为检测一抗,试剂盒中的HRP标记抗小鼠IgG抗体为二抗,可高灵敏度检测表面具有任意标记蛋白的细胞外囊泡。

 

◆特点

采用PS结合分子Tim4包被板

● 通过磷脂酰丝氨酸(PS)结合分子进行捕获。※1

● 可检测出0.1 μL左右培养上清液的细胞外囊泡。

● 可用纯化细胞外囊泡标准品※2 定量检测。

● 高灵敏度检测(检测灵敏度可达WB※3 的50~1,000倍)。

 

高灵敏度定性·定量检测培养上清中的细胞外囊泡

※1 本方法比起使用抗体包被板的ELISA法,可以更好地定性·定量分析细胞外囊泡。

※2 请使用MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS纯化的细胞外囊泡标准品。

※3 WB法:免疫印迹实验

 

使用优化的试剂组成的试剂盒

● 优化对照用的一抗※4

● 优化检测用的二抗※5

● 采用显色法

 

操作简便,实验重复性高

※4 配套抗人CD63抗体。检测其他表面标记蛋白可使用任意小鼠单抗。

※5 配套抗小鼠IgG抗体-HRP标记。

 

◆试剂盒组成

试剂盒组成(96次)

包装

捕获外泌体96孔板

1个 (8 well×12 strips)

反应/洗涤缓冲液(10×)

50 mL×2瓶

外泌体结合增强子(100×)

10 mL×1瓶

对照一抗Anti-CD63(100×)

120 μL×1瓶

二抗HRP缀合抗小鼠IgG(100×)

120 μL×1瓶

TMB溶液

12 mL×1瓶

终止液

12 mL×1瓶

封板膜

4个

说明书

1本

 

◆应用实例

从各种细胞培养上清提取细胞外囊泡的定性分析

  将1 ng从各种细胞培养上清中提取的细胞外囊泡添加至孔中,使用能识别表面标记蛋白CD9、CD63、CD81的一抗通过本试剂盒对各表面标记量进行定性比较。

  另外,作为比较参考数据,将150 ng从各细胞培养上清提取的细胞外囊泡进行电泳,使用能识别表面标记的CD9、CD63、CD81的一抗对各表面标记蛋白量以Western blotting进行定性分析。

 

提取外泌体(1 ng/well)的定性比较数据                        参考比较数据

PS Capture&trade; 外泌体ELISA试剂盒 抗小鼠IgG试剂盒-wako富士胶片和光  PS Capture&trade; 外泌体ELISA试剂盒 抗小鼠IgG试剂盒-wako富士胶片和光

 

在ELISA系统和WB分析之间,标记蛋白的表达模式具有相关性。

 

参考数据:各种细胞的外泌体标记蛋白表达分析

PS Capture&trade; 外泌体ELISA试剂盒 抗小鼠IgG试剂盒-wako富士胶片和光

分别使用1 ng各种细胞的培养上清液来源纯化外泌体(使用MagCapture来源外泌体提取试剂盒 PS),外泌体标记蛋白CD9、CD63、CD81对应的抗体,进行表达分析。

 

检测抗体

<ELISA>

抗CD9小鼠单抗(M-L13)

抗CD63小鼠单抗(H5C6)

<WB>

抗CD9兔多抗

抗CD63小鼠单抗(8A12)

抗CD81小鼠单抗(1D6)

 

细胞株不同,表达量*不同!

有的细胞株中可能存在对特定标记蛋白的表达较少的外泌体。

 

从正常人血清中提取的细胞外囊泡的定性分析

  从正常人血清的6个样品分别提取细胞外囊泡,通过BCA法算出细胞外囊泡膜上的蛋白浓度。分别添加40、20、10 ng的细胞外囊泡到孔中,用可识别表面标记CD63的对照组检测一抗(试剂盒配套)对检测的OD值进行定性比较。

 

提取外泌体(1 ng/well)的定性比较数据

PS Capture&trade; 外泌体ELISA试剂盒 抗小鼠IgG试剂盒-wako富士胶片和光

即使是从体液样品中纯化的细胞外囊泡也具有良好的线性

 

从细胞培养上清中提取的细胞外囊泡的检测灵敏度的参考数据

  从COLO201细胞培养上清中提取细胞外囊泡,比较本试剂盒和免疫印迹的检测灵敏度。

 

Western blot和ELISA的检测灵敏度比较

PS Capture&trade; 外泌体ELISA试剂盒 抗小鼠IgG试剂盒-wako富士胶片和光

图(a),(b)为使用各种抗CD63抗体(其他公司产品,Wako产品: 012-27063)进行免疫印迹的检测灵敏度数据

样品:COLO201细胞培养上清提取细胞外囊泡(使用MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS提取)

★:各抗体中免疫印迹的检测上限。

图(c)Exosome ELISA Kit检测上限数据

  使用本试剂盒梯度稀释COLO201细胞来源的纯化细胞外囊泡(使用MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS)后的样品以及仅有缓冲液的空白值检测并制备COLO201标准曲线。利用此标准曲线可算出COLO201来源纯化样品的低检测灵敏度。(按照各浓度点n=6,空白点n=12检测)

  

相比免疫印迹,可以更高灵敏度地检测标记蛋白。

 

从细胞培养上清中提取细胞外囊泡的稀释线性(Linearity)参考数据

  用从COLOC201细胞培养上清中提取的细胞外囊泡作为标准品制作标准曲线,评价COLO201细胞培养上清样品的5个稀释度(1:100-1:1600)的线性。

 

COLO201细胞培养上清

PS Capture&trade; 外泌体ELISA试剂盒 抗小鼠IgG试剂盒-wako富士胶片和光

COLO201细胞培养上清

细胞伤情量

(μL)

稀释

测定值

(ng/mL)

期望值

(ng/mL)

预期百分比

比例

稀释因子(×)

0.0625

1:1600

0.000625

0.89

0.91

98.4

0.125

1:800

0.00125

1.82

1.72

105.6

0.25

1:400

0.0025

3.44

3.52

97.8

0.5

1:200

0.005

7.04

6.78

103.9

1

1:100

0.01

13.6

 

标准品:COLO201细胞来源外泌体

(使用MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS纯化)

检测样品:COLO201细胞培养上清

一抗:试剂盒配套抗CD63抗体

 

可以确认到良好的稀释线性以及可检测出0.1 μL细胞外囊泡。  

 

检测不同接种细胞数和不同培养时间的培养基中的细胞外囊泡

  在T75细胞培养瓶中接种1×107、2×107、3×107的COLO201细胞,培养72 h。每24 h回收一部分的培养上清样品,用PS Capture™ 外泌体ELISA试剂盒(抗小鼠IgG POD)和试剂盒配套的Control Primary Antibody Anti CD63 (100×) 进行CD63的吸光度检测。

  准备4 μL的细胞培养上清,用添加了Exosome Binding Enhancer的反应液/清洗液(1×)稀释至100 μL。

● 检测样品:COLO201细胞培养上清(25倍稀释)

● 接种细胞数:1×107、2×107、3×107个细胞/瓶

● 培养时间:24 h、48 h、72 h

● 一抗:抗CD63抗体

 

PS Capture&trade; 外泌体ELISA试剂盒 抗小鼠IgG试剂盒-wako富士胶片和光

  只需使用4 μL的细胞培养上清液,就可直接检测细胞外囊泡量,在讨论新型的细胞株的培养条件时,省去了讨论条件的时间。

  可以简单方便地讨论如何分泌多的细胞外囊泡的条件。

 

添加药物后引起细胞外囊泡数量的变化

  在T225培养瓶接种K562细胞,以无血清培养基培养72 h。之后更换添加终浓度为10 μmol/L的莫能菌素钠和不含莫能菌素钠的无血清培养基,再培养24 h。培养后回收培养上清样品,用PS Capture™ 外泌体ELISA试剂盒(抗小鼠IgG POD)和试剂盒配套Control Primary Antibody Anti CD63(100×),检测CD63的吸光度。

  用添加了Exosome Binding Enhancer的反应液/清洗液(1×)稀释回收后的细胞培养上清,分别作为10倍稀释和100倍稀释的细胞培养上清样品。

● 检测样品:K562细胞培养上清(更换含莫能菌素钠(产品编号:ALX-380-026-G001)的培养基和对照培养基后培养24 h)

● 一抗:抗CD63抗体

 

PS Capture&trade; 外泌体ELISA试剂盒 抗小鼠IgG试剂盒-wako富士胶片和光

  无需提取,少量培养基即可检测。

  可检测培养基中外泌体量随时间的变化,由于可数值化外泌体变化量,因此相比WB法更容易进行比较。

 

使用COLO201细胞培养上清来源和人血清来源纯化外泌体比较检测灵敏度

  制备下列①~⑥的样品,比较用PS Capture™ 外泌体ELISA试剂盒、A公司ELISA试剂盒、A公司ELISA试剂盒(高灵敏型)检测外泌体标记蛋白CD63时的灵敏度。

 

使用样品内容

① A公司ELISA试剂盒配套标准品

② A公司ELISA试剂盒(高灵敏型)配套标准品

③ 用MagCapture™ 外泌体提取试剂盒PS提取COLO201细胞培养上清来源外泌体

④ 用聚合物沉淀法提取COLO201细胞培养上清来源外泌体

⑤ MagCapture™ 外泌体提取试剂盒PS提取人血清来源外泌体

⑥ 聚合物沉淀法提取人血清来源外泌体

 

 

x1

1/16

1/1000

40 ng/mL

160 ng/mL

800 ng/mL

2000 µg/mL

x0.5

1/32

1/2000

20 ng/mL

80 ng/mL

400 ng/mL

1000 µg/mL

x0.25

1/64

1/4000

10 ng/mL

40 ng/mL

200 ng/mL

500 µg/mL

x0.125

1/128

1/8000

5 ng/mL

20 ng/mL

100 ng/mL

250 µg/mL

x0.0625

1/256

1/16000

2.5 ng/mL

10 ng/mL

50 ng/mL

125 µg/mL

 

PS Capture&trade; 外泌体ELISA试剂盒 抗小鼠IgG试剂盒-wako富士胶片和光

  PS Capture™ 外泌体ELISA试剂盒相比A公司ELISA试剂盒和A公司ELISA试剂盒(高灵敏型),可更灵敏地检测到CD63。另外,A公司ELISA试剂盒和A公司ELISA试剂盒(高灵敏型)对各自试剂盒配套标准品的反应敏感,但对PS提取外泌体的反应性弱。

  由此证明,PS Capture™ 外泌体ELISA试剂盒相比公司ELISA试剂盒和A公司ELISA试剂盒(高灵敏型),可以更高特异性且高灵敏性地检测外泌体表面的CD63。

 

◆产品列表

产品编号

产品名称

包装

297-79201

PS Capture™ 外泌体ELISA试剂盒(抗小鼠IgG POD)

96 tests

 

◆相关产品

产品编号

产品名称

包装

299-77603

MagCapture™ 外泌体提取试剂盒PS

2 tests

293-77601

10 tests

 PS Capture™ 外泌体ELISA试剂盒 抗小鼠IgG​

外泌体提取试剂盒(血浆)

外泌体提取试剂盒(血浆)

¥1800.00

货号:BL922A

规格:10ml

品牌:Jinpan

产品简介:

外泌体(Exosome)是由活细胞分泌的直径约为30-150 nm的小囊泡,具有典型的脂质双分子层结构,存在于细胞培养上清液、血清、血浆、唾液、尿液、羊水以及其它生物体液中。外泌体被认为是特定细胞间效应物及信号大分子传递的信使,然而,人们对外泌体的形成,组成成分及所参与的生物学过程仍不完全清楚。对外泌体功能及转运机制进行生物学研究,需要研究者首先能够分离、提取出完整的外泌体, 但目前所使用的提取方法复杂繁琐, 且特异性不高。

外泌体提取试剂(血浆提供了一种从人源和小鼠血浆样品中浓缩、分离完整外泌体的简单且可靠的方法。通过试剂中的亲水性基团锁住样品中的水分子,迫使外泌体从血浆样品中分离出来,然后通过短暂低速离心来收集总外泌体。

 

操作提示

推荐使用蛋白酶K去除血浆中的蛋白,但也可能导致血浆样品中外泌体表面附着的蛋白部分降解,研究者需根据自身研究需要,选择是否使用蛋白酶K来处理血浆样本。

 

使用方法仅供参考详见说明书

 

注意事项

1、本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品

2、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

 

保存条件:

4保存,一有效

货号 BL922A
规格 10ml
品牌 Jinpan
说明书下载 点击下载

PS Capture™ 外泌体ELISA试剂盒分析用试剂-Wako富士胶片和光

PS Capture™ 外泌体ELISA试剂盒分析用试剂-Wako富士胶片和光

供货周期 一个月以上 应用领域 生物产业

PS Capture™ 外泌体ELISA试剂盒(链霉亲和素HRP)
本试剂盒是可用于细胞培养上清和体液样本中细胞外囊泡的定性分析以及定量分析的酶联免疫试剂。将能与细胞外囊泡表面的磷脂酰丝氨酸(PS)特异性结合的蛋白质预包被到板上,细胞外囊泡与其反应被固定后,以目的细胞外囊泡表面标记蛋白的生物素标记抗体作为检测一抗,以试剂盒中的HRP标记链霉亲和素为二抗,可高灵敏度检测表面具有靶标记蛋白的细胞外囊泡

体液样本中细胞外囊泡的分析工具PS Capture&trade; 外泌体ELISA试剂盒分析用试剂-Wako富士胶片和光

PS Capture™ 外泌体ELISA试剂盒(链霉亲和素HRP)

 

 

  本试剂盒是可用于细胞培养上清和体液样本中细胞外囊泡的定性分析以及定量分析的酶联免疫试剂。将能与细胞外囊泡表面的磷脂酰丝氨酸(PS)特异性结合的蛋白质预包被到板上,细胞外囊泡与其反应被固定后,以目的细胞外囊泡表面标记蛋白的生物素标记抗体作为检测一抗,以试剂盒中的HRP标记链霉亲和素为二抗,可高灵敏度检测表面具有靶标记蛋白的细胞外囊泡。同时,可用不同物种的生物素标记抗体作为检测一抗。此外,二抗采用HRP标记链霉亲和素,与血液成分的非特异性结合低,可高灵敏度检测血液样本中的细胞外囊泡。

 

 

◆特点

 

● 高灵敏度和定量检测

   可以直接检测样本中的细胞外囊泡(无需分离)

   可以从2.5微升左右的血液样本中检测细胞外囊泡(节约样本)

   灵敏度是WB法的50~1000倍(检测微量信号)

 

● 应用广泛

      可定性或定量检测培养上清和血液样本中的细胞外囊泡

      测定EV-depleted FBS中残留的细胞外囊泡数量

      使用凝集素分析外泌体的糖链

 

● 通用的生物素标记检测方法

      一抗可灵活更换成不同动物来源的抗体或凝集素等的生物素标记一抗

 

● 操作简单以及再现性高

      优化细胞外囊泡检测用的试剂盒和试剂

 

 

◆检测原理

 

PS Capture&trade; 外泌体ELISA试剂盒分析用试剂-Wako富士胶片和光  PS Capture&trade; 外泌体ELISA试剂盒分析用试剂-Wako富士胶片和光

 

  Wako试剂盒PS Capture™ 外泌体ELISA 试剂盒(抗小鼠IgG POD)(图右)中,一抗使用小鼠抗体,二抗使用抗小鼠IgG抗体,但是本试剂盒(图左),使用生物素标记抗体作为一抗,二抗使用HRP标记的链霉亲和素。因此,可以不受限于抗体种类分析细胞外囊泡。

 

 

◆试剂盒组成

 

试剂盒组成(96次用)

容量

Exosome Capture 96 Well Plate

1块(8 well×12 strips)

Reaction Buffer

80毫升×1支

Washing Buffer (10×)

100毫升×1支

Exosome Binding Enhancer (100×)

10毫升×1支

Control Biotinylated Antibody Anti-CD63 (100×)

120微升×1支

HRP-conjugated Streptavidin (100×)

240微升×1支

TMB Solution

12毫升×1支

Stop Solution

12毫升×1支

Plate Seal

4块

使用说明书

1份

 

 

◆对应样本

 

样本

定性分析

定量分析

细胞培养上清液

可以实现

可以实现

体液样本

可以实现

可以实现

 

 

◆数据

 

■ 血液样本以及培养上清液样本的稀释线性

 

用从COLO201细胞培养上清液中纯化的细胞外囊泡制成的标准曲线为基准,检测①人血清稀释样本,②人肝素血浆稀释样本,③人EDTA血浆稀释样本(各2个样本,稀释4次)以及④COLO201细胞培养上清液稀释4次的样本中的外泌体浓度(检测CD63),评价各个样本的稀释线性。

 

PS Capture&trade; 外泌体ELISA试剂盒分析用试剂-Wako富士胶片和光

 

结果表明,在CD63检测中,血清和肝素血浆样本在双倍稀释或更高稀释度下可获得良好的线性。EDTA血浆样本在5倍以上稀释度下可获得良好的线性。

 

 

■ PS亲和法和抗体法的比较(捕获EVs的能力)

 

将预处理※1的各个细胞培养上清液分别添加至已固相化的抗CD抗体(CD9, CD63, CD81)或Tim4微孔板的各个孔中进行反应。然后,用各个生物素标记抗CD抗体(CD9, CD63, CD81)检测结合的外泌体。

※1 预处理条件: 10,000×g, 30分钟

 

PS Capture&trade; 外泌体ELISA试剂盒分析用试剂-Wako富士胶片和光

 

PS亲和法与抗体法相比,更高效率地捕抓到了各种细胞株来源的外泌体

 

 

■ 测定市面上“无外泌体血清”中残留的外泌体数量

 

用生物素标记抗CD9抗体※4检测未处理的FBS,市场上售卖的“无外泌体血清”(EV-depleted FBS)以及超离处理的FBS (UC-treated FBS)※3 中残存的外泌体。

 

※3 超离条件: 160,000×g, 16小时

※4 用Biotin Labeling Kit-SH 标记抗CD9抗体。

 

Capture: Tim4 / Detection: 生物素标记抗CD9抗体

 

PS Capture&trade; 外泌体ELISA试剂盒分析用试剂-Wako富士胶片和光

 

使用PS亲和法的ELISA系统,可以简单便利地检测到外泌体残留量。

 

 

■ 应用于糖链分析:rBC2LCN凝集素和Tim4的双抗夹心ELISA

 

用生物素标记抗CD63抗体和生物素标记rBC2LCN凝集素※6检测预处理完成※5的5倍稀释iPS细胞培养上清液中的外泌体。

 

※5 预处理条件: 10,000×g, 30分钟

※6用 EZ-Link™ Sulfo-NHS-LC-LC-Biotin标记rBC2LCN。

 

捕获用抗体: Tim4 / 检测用抗体: 各生物素标记体

 

PS Capture&trade; 外泌体ELISA试剂盒分析用试剂-Wako富士胶片和光

 

 

通过与各种凝集素相组合,可应用于外泌体表面上的糖链分析。

 

■ 检测人正常血液样本中外泌体标记物的相对浓度

 

PS Capture&trade; 外泌体ELISA试剂盒分析用试剂-Wako富士胶片和光

 

准备人血清(10个样本),EDTA血浆(9个样本)和肝素血浆(9个样本)作为正常血液样本,检测外泌体标记物CD63和CD9,以及被认为是癌细胞外泌体特异性标记物的EpCAM。

结果显示,在各个血液样本中均检测出了外泌体标记物CD63和CD9,但只有在癌细胞外泌体中才检测出极微量的表面抗原EpCAM。

 

 

■ COLO201来源纯化外泌体的添加回收测试

 

PS Capture&trade; 外泌体ELISA试剂盒分析用试剂-Wako富士胶片和光

 

准备混合血清,EDTA血浆,肝素血浆的2倍稀释液,并添加从COLO 201细胞培养上清中提取的3种浓度的COLO201来源外泌体,以EpCAM检测来确认回收率。

在EpCAM检测中,添加回收率在100%±10%的范围内,显示出良好的回收性能※。

※考虑到【血液检体的稀释线性】,EDTA血浆样本建议稀释5倍以上进行检测。

 

 

◆产品列表

 

产品编号

产品名称

规格

包装

298-80601

PS Capture™ 外泌体ELISA试剂盒(链霉亲和素HRP)

基因研究用

96 次

 

 

抗外泌体标记抗体系列

 

产品编号

产品名称

交叉反应

包装

018-27761

抗CD9单克隆抗体(1K)

人,牛

20微升

014-27763

100微升

016-27061

抗CD63,单克隆抗体(3-13)

20微升

012-27063

100微升

015-27771

抗CD81单克隆抗体(17B1)

人,牛

20微升

011-27773

100微升

产品编号

产品名称

偶联基团

包装

018-27641

抗CD63,单克隆抗体(3-13),荧光素结合

绿色荧光素

25次用

014-27643

100次用

011-27751

抗CD63单克隆抗体(3-13),红色荧光染料(635)偶联

红色荧光素

25次用

017-27753

100次用

013-27711

抗CD63单克隆抗体(3-13),生物素偶联

生物素

20微升

019-27713

100微升

 

 

◆相关产品

 

产品编号

产品名称

规格

包装

299-77603

MagCapture™ 外泌体提取试剂盒PS

基因研究用

2次

293-77601

10次

297-79201

PS Capture™ 外泌体ELISA 试剂盒(抗小鼠IgG POD)

基因研究用

96次

297-79701

PS Capture™外泌体流式试剂盒

基因研究用

300次

016-27061

抗CD63,单克隆抗体(3-13)

免疫化学用

20微升

012-27063

100微升