细胞增殖标志物抗体

发表于2024年12月20日由上海金畔生物科技有限公司

细胞增殖标志物抗体

Serotec是英国一家成立于1982年的老牌抗体公司,2006年与Antibodies by Design, Biogenesis和Oxford Biotechnology公司一起被著名的抗体技术公司MorphoSys收购，成立了专门部门，使用新的品牌AbD Serotec，向全球客户提供自主生产和经过严格质控的万余种高质量的抗体以及相关的制备抗体服务。

AbD Serotec公司生产的抗体Rat Anti Brdu,clone BU1/75 (ICR1)，货号MCA2060，能够识别游离的以及和单链DNA结合的Brdu，是目前文献引用最多的anti-Brdu抗体，同时AbD Serotec是该抗体唯一的商品化生产商。

Ki-67是一种增殖细胞相关的核抗原，不表达于静止期的细胞，ki-67的反义寡核苷酸能够抑制细胞的增殖，揭示ki-67蛋白对细胞增殖是绝对必需的。

细胞增殖标志物抗体

福尔马林固定，石蜡包埋的小鼠结肠组织切片， Rat anti Brdu(MCA2060)染色结果

MCF-7细胞的anti ki-67免疫荧光染色结果（HCA006，绿色），Phalloidin（红色）和Hoechst(蓝色)复染

AbD Serotec公司提供的最受欢迎的细胞增殖标志物抗体

Product Code	Product Type	Specificity	Clone	Host	Species Reactivity	Format	Quantity	Applications
MCA2060	Monoclonal Antibody	BrdU	BU1/75 (ICR1)	Rat		Purified	0.2 mg	F, IF, P
MCA2060GA	Monoclonal Antibody	BrdU	BU1/75 (ICR1)	Rat		Purified	0.1 mg	F, IF, P
MCA2060T	Monoclonal Antibody	BrdU	BU1/75 (ICR1)	Rat		Purified	20 μg	F, IF, P
MCA2060A488	Monoclonal Antibody	BrdU	BU1/75 (ICR1)	Rat		ALEXA FLUOR^® 488	100 TESTS/1ml	F*
MCA2060B	Monoclonal Antibody	BrdU	BU1/75 (ICR1)	Rat		Biotin	0.1 mg	F*
MCA2060F	Monoclonal Antibody	BrdU	BU1/75 (ICR1)	Rat		FITC	0.1 mg	F*
MCA2060FT	Monoclonal Antibody	BrdU	BU1/75 (ICR1)	Rat		FITC	0.25 mg	F*
MCA2060P	Monoclonal Antibody	BrdU	BU1/75 (ICR1)	Rat		HRP	0.5 mg	E, P*
MCA2060PA	Monoclonal Antibody	BrdU	BU1/75 (ICR1)	Rat		HRP	0.1 mg	E, P*
MCA2483	Monoclonal Antibody	BrdU	Bu20a	Mouse		Purified	0.2 mg	C, F, P
MCA2483FA	Monoclonal Antibody	BrdU	Bu20a	Mouse		FITC	50 μg	F*
MCA2483T	Monoclonal Antibody	BrdU	Bu20a	Mouse		Purified	20 μg	C, F, P
HCA006	Monoclonal Antibody	Ki-67	2531 (Fab)	HuCAL^®	Human, Bovine, Dog	Purified	0.1 mg	C, E, IF, P*,WB
HCA053	Monoclonal Antibody	Ki-67	2531	HuCAL^®	Human, Bovine, Dog	Purified	0.1 mg	C, E, P*, WB
HCA053A	Monoclonal Antibody	Ki-67	2531	HuCAL^_®	Human, Bovine,Dog	Purified	50 μg	C, E, P*, WB
HCA117	Monoclonal Antibody	Ki-67	2815	HuCAL^®	Human	Purified	0.1 mg	E, P*
HCA117A	Monoclonal Antibody	Ki-67	2815	HuCAL®	Human	Purified	50 μg	E, P*
MCA289	Monoclonal Antibody	Ki-67	Ki67	Mouse	Human	Supernatant	2 ml	C, F, IF
MCA289T	Monoclonal Antibody	Ki-67	Ki67	Mouse	Human	Supernatant	0.2 ml	C, F, IF
MCA1859	Monoclonal Antibody	MCM2	CRCT2.1	Mouse	Human	Purified	0.1 mg	C, P*, WB
AHP1419	Polyclonal Antibody	PCNA		Rabbit	Broad	Purified	50 μg	E, P*, WB
MCA1558	Monoclonal Antibody	PCNA	PC10	Mouse	Broad	Purified	0.1 mg	C, F*, IP, P,WB
MCA1558F	Monoclonal Antibody	PCNA	PC10	Mouse	Broad	FITC	0.1 mg	F*
MCA1558H	Monoclonal Antibody	PCNA	PC10	Mouse	Broad	Purified	6 ml	C, P
MCA3328Z	Monoclonal Antibody	PCNA	1G7	Mouse	Human	Azide Free	0.1 mg	IF, WB

C = Immunohistology – Frozen, E = ELISA, F = Flow Cytometry, FN = Functional Assay, IF = Immunofluorescence, IP = Immunoprecipitation, P = Immunohistology – Paraffin,WB = Western Blotting.
* = Requires Special Conditions – see datasheet

细胞增殖研究中使用alamar Blue的3个理由

发表于2024年11月9日由上海金畔生物科技有限公司

细胞增殖研究中使用alamar Blue的3个理由

如果您使用增殖细胞作为研究的一部分，您将知道监测其生长速度的重要性。培养中的细胞以异常速率分裂，可能表明其生长条件出现问题，并可能影响实验结果的有效性，更不用说留给您的实验细胞太少了。

细胞增殖研究中使用alamar Blue的3个理由

除了监测培养中的细胞生长外，许多实验还旨在比较以不同方式处理的细胞群的增殖或健康状况。例如，您可能想知道通过比较处理和未处理细胞的增殖来了解新候选药物对细胞分裂速率的影响。这些实验是如此常规，因此拥有一种每次都可以使用的简单、可靠的方法非常重要。访问科学文档、方案、故障排除建议和其他资源对于确保您从所选方法中获得最佳效果也至关重要。值得庆幸的是，有各种各样的工具和技术可用于跟踪细胞生长，最好的细胞增殖体外检测器之一是 alamarBlue。我们将解释了什么是 alamarBlue 以及它是如何工作的，然后探讨了这种试剂的三个主要优点。我们还将向您介绍有用的资源，以支持您使用 alamarBlue 的学习。

什么是 alamarBlue？

alamarBlue 含有细胞渗透性，无毒的 REDOX 指示染料刃天青。响应细胞代谢，染料的颜色从弱荧光蓝色变为强荧光粉红色（图 1）。粉红色荧光的强度与活的呼吸细胞的数量成正比; 因此，AlamarBlue 是细胞健康的直接指标。

细胞增殖研究中使用alamar Blue的3个理由

为何建议您使用 alamarBlue 进行细胞增殖检测呢?

优势一：alamarBlue 无毒

与其他增殖试剂相比，alamarBlue 不会干扰电子传递链或影响细胞呼吸或功能，因此无毒且使用安全（O’Brien 等人，2000）。这也意味着 alamarBlue 可能比有毒化合物更容易获得，用于教学实验室和项目学生的实验室。与有毒增殖剂不同，暴露于 alamarBlue 的细胞保持功能齐全，存活和健康，不受指示剂存在的影响。结合您不需要裂解细胞来测量 alamarBlue 活性的事实，您可以在测量增殖后保持细胞生长，并在以后的时间点进行重复测量。这使得 alamarBlue 适合长期的时间课程研究。

优势 2：alamarBlue 使用简单

alamarBlue 的工作流程很简单：将试剂添加到细胞中，孵育并测量（图 2）。作为一种高度信任和引用的化合物，许多实用的建议、方案和已发表的实验可以为您提供支持。alamarBlue 与多种培养基兼容，因此在添加 alamarBlue 之前，您不需要更换细胞培养基。哺乳动物细胞需要在标准培养条件下与 alamarBlue 一起孵育至少 1-4 小时：在 37°C 和 pH 6.8 至 7.4 之间。作为细胞增殖读数的颜色变化可以使用荧光或吸光度进行测量，以最适合您的实验室为准。在 570nm 和600nm 处监测吸光度，在 530-560nm 激发波长和 590nm 发射波长处监测荧光。然后，您可以使用简单的 alamarBlue 计算器来处理数字并指示细胞在时间范围内生长的速度。

优势 3：alamarBlue 灵活

alamarBlue 的灵活性是它被广泛使用并作为增殖剂受到如此高度信任的另一个主要原因（它在PubMed 上有超过 3，000 次引用）。订购一种试剂并将其用于各种实验总是更容易，而不是在方案之间来回切换。

除了培养的哺乳动物细胞外，alamarBlue 还适用于其他细胞类型，包括细菌，酵母，真菌和原生动物，并且与贴壁或悬浮细胞兼容。alamarBlue 也可用于细胞计数低的实验，能够检测培养物中少至 50 个细胞！它适合与酚红一起使用，它只是稍微改变了测量值。alamarBlue 是广泛应用的不错选择，包括细胞增殖测定、相对细胞毒性生物测定和细胞因子测定。

alamarBlue 的灵活性延伸到实用优势。由于 alamarBlue 是水溶性的，因此不需要洗涤/固定或提取步骤。如果在进行实验的当天无法读取板，您可以将它们冷藏在塑料或铝箔包装中并在 1-3 天内读取它们，让您在方便时读取板，这可能有助于避免长时间在实验室！

探索 alamarBlue 的魅力

我们已经描述了我们喜欢 alamarBlue 的三个主要原因，以及它如何为您的细胞增殖实验增加价值。您可以在我们的专用资源页面上找到更多原因，说明为什么它可以成为您实验室的重要试剂，以及使用 alamarBlue 所需的所有工具。

Bio Rad 助力使用 alamarBlue 上加速您的科研进展！

References

O’Brien J et al. (2003). Investigation of the Alamar Blue (resazurin) fluorescent dye for the

assessment of mammalian cell cytotoxicity. The FEBS Journal, 267, 5421-5426.

更多详情，请咨询Bio Rad国内代理商-上海金畔生物

细胞活性和细胞增殖检测试剂盒—-CCK8试剂盒

发表于2024年10月10日由上海金畔生物科技有限公司

细胞活性和细胞增殖检测试剂盒—-CCK8试剂盒

产品原理

Cell Counting Kit-8又称CCK-8试剂盒或者CCK8试剂盒。CCK8试剂盒基于WST-8法检测细胞的细胞活性和细胞增殖。

WST-8是MTT的升级产品，试剂盒的工作原理是在电子耦合试剂存在的情况下，可以被线粒体内的脱氢酶还原生成高度

水溶性的橙黄色的甲臜产物（formazan）。最终形成的颜色深浅与细胞增殖情况成正比，与细胞毒性成反比。使用酶标

仪在450mM波长处测定OD值，间接反映活细胞数量。

产品应用

CCK法应用非常广泛，如药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏试验以及生物因子的活性检测等。

产品列表

ENZO公司可以提供两款CCK8试剂盒

货号	产品名称	规格	检测方法
ALX-850-039-0100	Cell Counting Kit-8	1*100tests	比色法
ALX-850-039-KI01	Cell Counting Kit-8	1*500tests	比色法
ALX-850-039-KI02	Cell Counting Kit-8	5*500tests	比色法
ALX-850-245-KI01	Cell Counting Kit-F	1*500tests	荧光法
ALX-850-245-KI02	Cell Counting Kit-F	5*500tests	荧光法

ALX-850-039

特点：

一步法，直接使用，无放射性

高灵敏度

高通量

比MTT,MTS或者WST-1法灵敏

用不同浓度的IL-1培养CTLL-2细胞72小时。每孔中加入CCK-8，在450nm处测定吸光值。

相较于其他的检测方法，CCK8法有更好的灵敏度。

ALX-850-245

产品特点：

Cell Counting kit-F是荧光法检测细胞增殖和细胞毒性。

该试剂盒无放射性，和比色法相比更灵敏。

固定反应时间更短

没有增溶的步骤

产品详细信息请咨询ENZO中国代理上海金畔生物

邮箱: sales@jinpanbio.com

深圳: 021-50837765 北京: 021-50837765 上海: 021-50837765 广州：18024516375

香港: 021-50837765

代理品牌网站: www.jinpanbio.com

自主品牌网站: www.jinpanbio.cnet

检测细胞增殖实验及可使用产品介绍

发表于2024年10月4日由上海金畔生物科技有限公司

检测细胞增殖实验及可使用产品介绍

细胞增殖是由于细胞生长和分裂而导致的细胞群体的快速扩张。这一细胞过程必须小心调节，因为最小的改变都可能导致细胞数量不受控制的增加，最终导致癌症。为了维持体内平衡并最终防止癌变，不受控制的细胞增殖常常被凋亡的增加所抵消。

细胞周期失调和细胞周期检查点受损是细胞异常增殖的两个最常见原因。

在真核生物中，细胞周期可分为三个主要阶段：

间期（细胞复制其DNA的生长期，包括G1期、S期和G2期）

有丝分裂期（染色体分为两组准备分裂；M期包括4个阶段：前期、中期、后期、末期）

胞质分裂（分裂形成两个子细胞）


细胞周期的示意图

细胞周期失调和细胞周期检查点受损是细胞异常增殖的两个最常见原因。

细胞增殖可以通过蛋白质水平量化关键增殖标记物：

Ki-67在G1、S、G2和M期表达

PCNA（增殖细胞核抗原）从G1期到G2期均有表达

MCM（微染色体维持）对G1期的复制至关重要

检测细胞增殖实验及可使用产品介绍

ROCK1是一种丝氨酸/苏氨酸激酶，它是肌动蛋白细胞骨架、细胞极性和癌细胞侵袭的关键调节因子

也可以通过测量溴脱氧尿苷（BrdU）的掺入来识别S期的细胞

小鼠抗BrdU单克隆抗体（MCA2483）小鼠抗BrdU抗体，克隆Bu20a是最常用的抗BrdU抗体之一。

细胞活性和细胞增殖检测试剂盒—-CCK8试剂盒

发表于2024年9月25日由上海金畔生物科技有限公司

细胞活性和细胞增殖检测试剂盒—-CCK8试剂盒

产品原理

Cell Counting Kit-8又称CCK-8试剂盒或者CCK8试剂盒。CCK8试剂盒基于WST-8法检测细胞的细胞活性和细胞增殖。

WST-8是MTT的升级产品，试剂盒的工作原理是在电子耦合试剂存在的情况下，可以被线粒体内的脱氢酶还原生成高度

水溶性的橙黄色的甲臜产物（formazan）。最终形成的颜色深浅与细胞增殖情况成正比，与细胞毒性成反比。使用酶标

仪在450mM波长处测定OD值，间接反映活细胞数量。

产品应用

CCK法应用非常广泛，如药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏试验以及生物因子的活性检测等。

产品列表

ENZO公司可以提供两款CCK8试剂盒

货号	产品名称	规格	检测方法
ALX-850-039-0100	Cell Counting Kit-8	1*100tests	比色法
ALX-850-039-KI01	Cell Counting Kit-8	1*500tests	比色法
ALX-850-039-KI02	Cell Counting Kit-8	5*500tests	比色法
ALX-850-245-KI01	Cell Counting Kit-F	1*500tests	荧光法
ALX-850-245-KI02	Cell Counting Kit-F	5*500tests	荧光法

ALX-850-039

特点：

一步法，直接使用，无放射性

高灵敏度

高通量

比MTT,MTS或者WST-1法灵敏

用不同浓度的IL-1培养CTLL-2细胞72小时。每孔中加入CCK-8，在450nm处测定吸光值。

相较于其他的检测方法，CCK8法有更好的灵敏度。

ALX-850-245

产品特点：

Cell Counting kit-F是荧光法检测细胞增殖和细胞毒性。

该试剂盒无放射性，和比色法相比更灵敏。

固定反应时间更短

没有增溶的步骤

产品详细信息请咨询ENZO中国代理上海金畔生物

邮箱: sales@jinpanbio.com

深圳: 021-50837765 北京: 021-50837765 上海: 021-50837765 广州：18024516375

香港: 021-50837765

代理品牌网站: www.jinpanbio.com

自主品牌网站: www.jinpanbio.cnet

MTT细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒

发表于2024年8月12日由上海金畔生物科技有限公司

MTT细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒

货号：BL132A

规格：500T

品牌：Jinpan

MTT细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒

产品编号	产品名称	规格
BL132A	MTT细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒	500 T
BL132B	MTT细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒	1000 T

产品简介：

MTT分析法以代谢还原噻唑蓝3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl tetrazolium bromide (MTT)为基础。活细胞的线粒体中存在与NADP相关的脱氢酶，可将黄色的MTT还原为不溶性的蓝紫色的甲臜（Formazan），死细胞此酶消失，MTT不被还原。用DMSO溶解Formazan 后可用酶标仪在490nm波长处检测光密度。

产品组成:

组分	名称	规格		保存
组分	名称	500T	1000T	保存
试剂一	5×MTT	5 mL	10 mL	-20℃避光干燥
试剂二	Dilution Buffer	25 mL	50 mL	2-8℃避光干燥

注：5×MTT溶液收到后建议分装保存到-20℃，避光保存，一年有效。

使用方法：

见说明书

注意事项：

1、悬浮细胞用此法时必须经离心后才能吸出上清再加DMSO。

2、 Formazan的生成不仅与活细胞数成比例，也受作用时间的影响，因此当样品较多时测定的OD值可能随时间而变。

3、用不同试剂溶解Formazan时，测定的OD值不同：DMSO溶解时，建议在490nm波长下检测；若用含SDS的相关溶剂溶解，建议在570nm下检测。

4、本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

保存条件：

-20℃避光保存一年。

货号	BL132A
规格	500T
品牌	Jinpan
说明书下载	点击下载

MTT细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒

发表于2024年8月7日由上海金畔生物科技有限公司

MTT细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒

货号：BL132B

规格：1000T

品牌：Jinpan

MTT细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒

产品编号	产品名称	规格
BL132A	MTT细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒	500 T
BL132B	MTT细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒	1000 T

产品简介：

产品组成:

组分	名称	规格		保存
组分	名称	500T	1000T	保存
试剂一	5×MTT	5 mL	10 mL	-20℃避光干燥
试剂二	Dilution Buffer	25 mL	50 mL	2-8℃避光干燥

注：5×MTT溶液收到后建议分装保存到-20℃，避光保存，一年有效。

使用方法：

见说明书

注意事项：

1、悬浮细胞用此法时必须经离心后才能吸出上清再加DMSO。

2、 Formazan的生成不仅与活细胞数成比例，也受作用时间的影响，因此当样品较多时测定的OD值可能随时间而变。

3、用不同试剂溶解Formazan时，测定的OD值不同：DMSO溶解时，建议在490nm波长下检测；若用含SDS的相关溶剂溶解，建议在570nm下检测。

4、本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

保存条件：

-20℃避光保存一年。

货号	BL132B
规格	1000T
品牌	Jinpan
说明书下载	点击下载

MTT细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒

发表于2024年8月1日由上海金畔生物科技有限公司

MTT细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒货号： JP50010

产品描述
描述	MTT 法又称 MTT 比色法，是一种检测细胞存活和生长的方法。其检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性 MTT 还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒(Formazan)并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。在一定细胞数范围内，MTT 结晶形成的量与细胞数成正比，吸光度越大，表示细胞活性越强，说明药物毒性越小。该方法已广泛用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验以及肿瘤放射敏感性测定等。它的特点是灵敏度高、经济。组分：MTT（25mg）、MTT 溶剂（5ml）、Formazan 溶解液（55ml）
使用方法	1、将细胞板放置于无菌操作台中。 2、在细胞板中每孔加入10%体积的 MTT溶溶剂。【MTT溶液的配制：用5ml MTT溶剂溶解25mg MTT，配制成5mg/ml的MTT溶液。配制后即可使用，或直接-20℃避光保存，也可以根据需要适当分装后-20℃避光保存。】 3、将细胞板放回培养箱中继续孵育3 – 4小时。做对比试验时，孵育时间需一致。 4、孵育后将细胞板从培养箱中拿出，按照下面的方法溶解产生MTT甲臜结晶物。（1）如果是贴壁细胞，则弃去培养基。加入与初始体积等量的Formazan Solvent。每孔的溶解液体积可能不同，但为了方便比较，总体积须保持一致。（2）如是非贴壁细胞或培养基的去除会造成MTT甲臜丢失，则直接在培养基中加入与初始体积等量的溶解液。（3）加入 Formazan Solvent 后，须在 1 小时内完成读数。 5、在摇床中温和地振荡可增强溶解。某些情况下，尤其是细胞密度较高时，需要反复吹打使 MTT 甲臜结晶物完全溶解。 6、分光光度计测定 OD570 和参考波长 OD690。 7、96 孔板可以在配备合适滤光片的酶标仪上进行检测。 8、其他类型的多孔板则需用合适大小的比色皿或读板器进行分光光度检测。
注意事项	1、由于使用96孔板进行检测，如果细胞培养时间较长，一定要注意蒸发的问题。一方面，由于96孔板周围一圈最容易蒸发，可以采取弃用周围一圈的办法，改加PBS，水或培养液；另一方面，可以把96孔板置于靠近培养箱内水源的地方，以缓解蒸发。 2、若所用受试化合物与MTT能够反应，可先离心后弃去培养液，小心用PBS冲2~3遍后，再加入含MTT的培养液。 3、Formazan的生成不仅与活细胞数成正比，也受作用时间的影响，因此样品较多时测定的结果可能随时间而变。 4、本品含有致癌物质，避免与皮肤和眼睛接触，请小心操作。为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 5、本产品只用于科研，不可应用于临床或诊断。
基本信息
别名	MTT Cell Proliferation and Cytotoxicity Assay Kit,MTT kit
储存/保存方法	2~8℃，避光保存，有效期12个月。

细胞增殖概述及检测试剂

发表于2024年6月21日由上海金畔生物科技有限公司

细胞增殖概述及检测试剂

细胞生长和分裂的增加或减少是细胞毒性和凋亡检测的一个关键结果，可以用来确定实验处理对细胞复制的影响。我们为监控细胞增殖提供一系列的抗体、试剂盒和染料。增殖的测定方法包括将染料掺入活细胞，定量关键的增殖标志分子，或评估胸苷类似物 BrdU 在 DNA 中的掺入。

特色产品：CytoTrack ™ Cell Proliferation Assays

CytoTrack 染料可用于测定活细胞中的细胞增殖。当带有标记的细胞分裂时，染料浓度减半。通过这种细胞分裂依赖性的荧光减弱可以测定增殖，并区分细胞的代数。我们提供多种激发和发射光谱的 CytoTrack 染料，方便您添加到多色流式细胞分析的组合中。

细胞增殖概述及检测试剂

图 2. CytoTrack Cell Proliferation Assays 能够分辨多达 10 代的细胞。

细胞增殖的染料

产品	应用	最大激发波长,nm	最大发射波长,nm	最佳激发激光	货号
alamarBlue	E, FN, IF/ICC	N/A	N/A	N/A	BUF012A BUF012B
CFDA-SE	FC	492	517	488	1351201
CytoTrack Blue 403/454	FC	403	454	405	1351202
CytoTrack Green 511/525	FC	511	525	488	1351203
CytoTrack Yellow 542/556	FC	542	556	532	1351204
CytoTrack Red 628/643	FC	628	643	640	1351205

细胞增殖的抗体

（注：在本站搜索相关货号，即可查看这些抗体的详细情况）

更多详情请咨询Bio Rad代理商-上海金畔生物

细胞增殖检测最合适的四种方法

发表于2024年6月7日由上海金畔生物科技有限公司

细胞增殖检测最合适的四种方法

细胞增殖检测的应用相当广泛，不论是测试药物试剂还是生长因子的效果，不论是评估细胞毒性还是分析细胞活性状态，您都可能会用到它。细胞增殖检测一般是检测分裂中的细胞数量或者细胞群体发生的变化。细胞增殖检测主要分为四类：DNA合成检测、代谢活性检测、细胞增殖相关抗原检测和ATP浓度检测。在这些方法中作何选择，主要取决于您所研究的细胞类型和研究方案。

DNA合成检测

DNA合成检测是目前实验室中检测细胞增殖最准确可靠的方式。传统方法是，将放射性标记的3H-胸腺嘧啶与细胞一同孵育几小时或者孵育过夜。这样新增殖细胞的DNA中就会掺入放射性标记，经洗脱后可用闪烁计数器SC检测。该方法时间耗时长而且还有个明显的弊端，那就是使用和处理放射性物质既麻烦又不安全。不过，您还可以使用5-溴-2-脱氧尿苷BrdU来进行类似实验，因为BrdU也同样可以掺入到新合成的DNA中。不过这样就需要进行额外的实验步骤，先孵育特异性BrdU单抗和带标记的二抗，然后再进行比色法、化学发光检测或荧光信号检测等步骤。该方法的好处就是让您不需要再和放射性物质打交道。BrdU标记很适合免疫组化 IHC、免疫细胞化学IC、细胞内ELISA、流式细胞分析和高通量筛选。

代谢活性检测

检测细胞群体的代谢活性也可以反映细胞增殖的情况。在细胞增殖过程中乳酸脱氢酶的活性会增加，因此四唑盐或者Alamar Blue在代谢活跃的细胞环境中会逐渐减少，形成能够改变培养基颜色的甲臜染料。您可以通过低配置或高配置的分光光度计和酶标仪来读取含染料培养基的吸光度，从而衡量细胞的代谢活性，检测细胞增殖的情况。

四种最常见的四唑盐是：MTT、XTT、MTS和WST1。MTT在标准的细胞培养基中是不溶的，而且其生成的甲臜晶体需要溶解在DMSO或者异丙醇中。因此，MTT主要作为终点检测方法。其他三种盐与Alamar Blue一样，都是可溶且无毒的。它们可以作为连续监控手段来跟踪细胞增殖的动态改变。其中XTT的效率较低，需要添加额外的因子。而WST1更灵敏有效，与其他盐相比能够更快显色。Alamar Blue的灵敏度也很高，只要微孔板的孔中有100个细胞它就能够检测到。四唑盐和Alamar Blue氧化还原染料能够用于多种仪器和高通量研究，非常方便。它们适用的检测仪器包括：标准分光光度计、荧光分光光度计和酶标仪等。

增殖标志检测

有些抗原只存在于增殖细胞中，而非增值细胞缺乏这些抗原，您也可以通过特异性的单抗来对细胞增殖进行检测。例如，在人体细胞中，Ki-67抗体识别同名蛋白，在细胞周期S期、G2期和M期表达，而在G0期和G1 期(非增殖期)不表达。用针对Ki-67蛋白的单抗就可以检测细胞的增值情况。由于需要组织切片，这种方法无法进行高通量分析。不过这一方法颇受癌症研究者们的青睐，因为它能够用来检测体内肿瘤细胞的增殖。其他普遍使用的细胞增殖或细胞周期调控标志还包括，增殖细胞核抗原PCNA、拓扑异构酶IIB和磷酸化组蛋白H3。

ATP检测

细胞内的ATP含量受到了严格调控，检测ATP也可以得到细胞增殖的信息。死亡细胞或即将死亡的细胞几乎不含ATP，在细胞溶解物或提取物中测得的ATP浓度与细胞数之间存在严格的线性关系。利用荧光素酶luciferase及其底物荧光素luciferin的ATP检测以生物发光为基础，能够为您提供非常灵敏的结果。如果有ATP存在荧光素酶就会发光，而且其发光强度与ATP浓度成正比，用能读取发光信号的光度计和酶标仪都可以方便的进行检测。这种方法非常适用于高通量细胞增殖检测和筛选。

怎么选择最合适的细胞增殖检测方法呢？

怎样选择最适合自己的检测方法，这依赖于您的细胞类型和研究方案，当然还取决于您在细胞增殖中期望得到的信息。举例来讲，假如您已经有了待测细胞(不论是在培养板还是在溶液中)，希望了解细胞增殖中的代谢活性变化，那您可以使用四唑盐和比色法检测。相应的，如果您对DNA合成的改变更感兴趣，可以选择用BrdU标记，再通过比色法、化学发光或荧光检测进行分析。若您研究的是单个细胞，也可以用BrdU标记来检测DNA合成，将其与荧光标记的相应抗体结合，您就可以通过流式细胞仪来进行流式分选。

本文介绍的四种方案都是久经考验的可靠方法，选择最适合自己的检测方式，好结果自然水到渠成。

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