一招制敌——“小欣”教您如何有效避免组织中的自发荧光
在免疫组化检测过程中，许多样本组织会产生可通过各种波长滤光片的组织内源性自发荧光，干扰抗体标记的目的蛋白荧光的观察，甚至导致实验失败。为了解决免疫组化实验中的自发荧光，VectorLabs公司专门开发了一款Vector® True VIEW™ Autofluorescence Quenching Kit试剂盒，该产品旨在去除组织切片中由于醛固定、红细胞以及胶原蛋白/弹性蛋白结构造成的自发荧光。该试剂使用方便，无需稀释操作，为即用型试剂。 该试剂盒中含有防自发荧光效果excellent的VECTASHIELD Vibrance Antifade Mounting Media 封片剂（含或不含DAPI两种）。客户无需单独购买封片剂，经济、实用。
注意：该试剂盒对脂褐素造成的组织自发荧光无效。
● 试剂盒组成：
a. Vector®TrueVIEW™ Reagent A 5ml b. Vector®TrueVIEW™ Reagent B 5ml c. Vector®TrueVIEW™ Reagent C 5ml d. VECTASHIELD Vibrance Antifade Mounting Media 2ml e. VECTASHIELD Vibrance Antifade Mounting Media with DAPI 2ml
其中，货号SP-8400包含a,b,c,d四个组分；货号SP-8500包含a,b,c,e四个组分
● 产品使用方法：
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将ReagentA、B、C以1:1:1的比例混合。（注意混合顺序，先将A和B以1:1比例混合10s，再加入C,混匀10s） |  |
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将混好后的TrueView试剂滴加到组织样本切片上，将样本完全覆盖，孵育2-5min |  |
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使用PBS缓冲液洗片5次，除去多余缓冲液，VECTASHIELD Vibrance Media封片后观察 |  |
● 产品特征
A 显著降低背景染色并保留特异性抗原染色； B 提高信噪比； C 产品稳定，储存在滴瓶中，使用方便； D 操作简单，快速；整个染色过程仅需2-5min； E 为使用者提供清晰、明确、真实的染色结果； F 适用于多种荧光染料的自发荧光去除，包括Alexa488，Alexa 594，DyLight 488，DyLight 594，FITC，Cyanine 5和GFP；
G SP-8500试剂盒中的封片剂中DAPI浓度较高，可对细胞核进行清晰的染色。
● 产品对自发荧光淬灭效果:
| ◆ 右图为经Vector®TrueVIEW™kit处理后，人肾脏组织切片中自发荧光淬灭的百分比与处理时间之间的关系。 ◆ Note：2分钟内即可达到最大淬灭效果。 |  |
● 产品应用举例：
＞ 案例一
| 未经任何处理 | 使用Vector®TrueVIEW™处理 |
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| ◆ 上图为人脾脏组织染色结果：使用VectaFluor TM Duet试剂盒（DK-8818）检测的mouse anti-CD20（red）和rabbit anti-Ki67（green）对人脾组织切片的染色。 ◆ 左图为未经任何处理的染色结果， ◆ 右图为使用TrueVIEW™Autofluorescence Quenching试剂盒染色结果。于未经处理的染色结果相比，经TrueVIEW™Autofluorescence Quenching试剂盒处理后，自发荧光显著减少。 | |
＞ 案例二
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◆ A-D图为人肾脏切片（石蜡切片）染色结果，实验中使用anti-AE1 /AE3抗体对角蛋白进行染色（绿色）。◆ A图未经处理， ◆ B-D图经TrueVIEW™Quencher Kit处理。自发荧光明显减弱。延长曝光时间，阳性信号强度也随之增强。 | |
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＞ 案例三
| 未经任何处理 | 使用TrueVIEW Treatment Mounted with Vibrance + 3x DAPI处理 |
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| ◆ 上图为人胰腺组织染色结果：绿色为insulin的染色。 ◆ 左图为未经任何处理的染色结果， ◆ 右图为使用TrueVIEW Treatment Mounted with Vibrance + 3x DAPI（SP-8500）试剂盒染色结果。与未经处理的染色结果相比，经该试剂盒处理后，自发荧光显著减少，核染色显著增强。 |
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＞ 案例四
| 未经处理（内源性自发荧光） | 经TrueVIEW™Quencher Kit处理 |
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| Company A | Company B | Company C |
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| Copper Sulfate Solution | Sodium Borohydride | Sudan Black B |
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● 产品订购信息 Vector® True VIEW™ Autofluorescence Quenching Kit
| 产品 | 货号 | 规格 | 染色切片数 |
| Vector® True VIEW™ Autofluorescence Quenching Kit |
SP-8400 | 15ml | 100-150 |
| Vector® True VIEW™ Autofluorescence Quenching Kit |
SP-8500 | 15ml | 100-150 |
| VECTOR TrueVIEW Autofluorescence Quenching Kit (3ml) |
SP-8403 | 3ml | ~30 |
| VECTASHIELD® HardSet™ Antifade Mounting Medium |
H-1400 | 10ml | 100-150 |
| VECTASHIELD® HardSet™ with DPI Antifade Mounting Medium |
H-1500 | 10ml | 100-150 |
详情请咨询 Vectorlabs 中国代理- 上海金畔生物科技