Axygen品牌代理商–上海金畔
1. Axygen品牌介绍
美国Axygen公司是一家位于硅谷地区的高科技企业，主要产品为实验室耗材，包括：吸头、PCR薄壁管、PCR板、PCR封口膜、离心管、离心管架和分离柱。
2. Axygen重点产品
主要产品为实验室耗材，包括：吸头、PCR薄壁管、PCR板、PCR封口膜、离心管、离心管架和分离柱。
3. Axygen官网
http://axygen.com/
4. 金畔生物代理Axygen品牌代理商联系方式
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mPEG-NH2，mPEG-COOH，mPEG-NHNH2，mPEG-N3，mPEG-Alkyne
上海金畔生物科技有限公司提供mPEG-NH2，mPEG-COOH，mPEG-NHNH2，mPEG-N3，mPEG-Alkyne
mPEG-NH2
mPEG-COOH
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CIL品牌代理商
CIL品牌代理商–上海金畔
1. CIL品牌介绍
美国剑桥同位素CIL是世界上第一个生产稳定性同位素标记化合物的生产商，以其领先的技术雄踞同位素分离领域。主要标记性同位素有13C、12C、D、15N、18O和17O，目前已经拥有8000多种
标记化合物。CIL的产品均能应用于不同的领域，如物理，化学，生物医学，分析，诊断研究以及环境测试。
2. CIL重点产品
稳定性同位素标记化合物
3. CIL官网
http://www.isotope.com/cil/index.cfm
4. 金畔生物代理CIL品牌联系方式
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实验七 SDS-PAGE测定蛋白质分子量及蛋白质的纯度鉴定
实验七 SDS-PAGE测定蛋白质分子量及蛋白质的纯度鉴定
一、实验目的与原理
蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中电泳时，它的迁移取决于它所带电荷以及分子大小和形状等因素。1967年Shapiro等人发现，如果在聚丙烯酰胺系统中加入阴离子去污剂十二烷基磺酸钠(SDS),大多数蛋白质能与SDS按一定比例结合，即每克蛋白质结合1.4g的SDS－复合物都带上相同密度的负电荷，它的量大大超过了蛋白质分子原有的电荷量，因而消除了蛋白质原有的电荷差别，使蛋白质分子电泳的迁移率主要取决于本身的分子量，而与蛋白质所带的电荷无关，在一定条件下，蛋白质的分子量的对数与电泳迁移率间呈负相关。
本实验的目的是对多酚氧化酶的纯化度鉴定及分子量的测定，通过实验，学习和掌握SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳法蛋白质纯度和分子量的鉴定。
二、仪器与试剂
1．材料：
硫酸铵盐析沉淀的多酚氧化酶粗酶样品、DEAE-纤维素DE52柱层析的样品，Sephadex G-100柱层析的样品。
2．试剂：
（1）丙稀酰胺(Acr母液)：30％Acr （Acr/Bis）
（2）10％的SDS溶液
（3）10％的过硫酸铵溶液
（4）四甲基乙二胺（TEMED）
（5）分离胶缓冲液：1.5M Tris,PH8.8
（6）浓缩胶缓冲液：1.0M Tris,PH6.8
（7）电极缓冲液：10×30g Tris,125g 甘氨酸和5g SDS，加水溶解定容至1000ml,pH8.3
（8）样品缓冲液：0.2M Tris,PH6.8,1%SDS,30%甘油，巯基乙醇及溴酚兰
（9）染色液：0.15％考马斯亮蓝R250，溶于脱色液
（10）脱色液：50％的甲醇，7％的冰醋酸的水溶液
（11）标准分子量蛋白。
3．仪器设备：
电泳仪，垂直电泳槽等。
三、操作步骤
1, 凝胶制备：
用两块电泳玻璃板制成垂直板槽（不能漏胶），垂直放置。将配制好的分离胶溶液，倒入，滴加入无离子水，待凝胶聚集后，倒出无离子水，用吸水纸吸干，倒入浓缩胶，再插入梳子。
2, 上样：
分别取样品若干ml于离心管中，按1/1-1/5比例加入5×样品缓冲液，再沸水浴中加热3－5min，取出待用。用微量注射器分别吸取不超过30ul不同浓度的标准蛋白样品和试验样品注入样品槽。点样结束后，调节电泳仪电流到10mA（2－3mA/em），保持电流稳定不变，当溴酚蓝迁移到离分离胶底1－2cm时，即可停止电泳。
3, 染色：
电泳完毕后，取出凝胶板，浸入染色液中，在37℃温箱中保温过夜。倒掉染色液，24h后，即可看到清晰的蛋白质条带。
四、结果 （略）
五、注意事项
1、 SDS与蛋白质的结合按质量成比例（即：1.4gSDS/g蛋白质），如果比例不当，就不能得到准确的数据。
2、 用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白质相对分子量时，必须同时作标准曲线。不能利用这次的标准曲线作为下次用。
3、 有些蛋白质由亚基（如血红蛋白）或两条以上肽链（α-胰凝乳蛋白酶）组成的，它们在巯基乙醇和SDS的作用下解离成亚基或多条单肽链。因此，对于这一类蛋白质，SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定的只是它们的亚基或是单条肽链的相对分子量。
4、 有的蛋白质（如：电荷异常或结构异常的蛋白质；带有较大辅基的蛋白质）不能采用该法测相对分子量。
5、 如果该电泳中出现拖尾、染色带的背景不清晰等现象，可能是SDS不纯引起。
实验八 Western bloting 技术
一、实验目的与原理
Western bloting技术是用来检测蛋白表达的特定的灵敏的方法，由蛋白质的SDS-PAGE、电转及杂交几部分组成。杂交技术主要有NC膜封闭，靶蛋白与第一抗体的反应，结合靶蛋白的一抗和二抗的反应，显色等组成。将凝胶上的蛋白质转移到NC膜上，用其他蛋白作为封闭液，将膜上余下的其他蛋白结合位点封闭，加入与检测蛋白特异性的第一抗体，经免疫反应，一抗与靶蛋白结合，经洗膜液洗涤后，膜上仅在靶蛋白上结合抗体。在加入与第一抗体有免疫特异性的二抗，使之与一抗反应，反应后，经洗膜液洗涤，二抗仅存在于结合靶蛋白的一抗上。因为这种二抗都为酶标抗体，通过酶标反应，在显色液中，膜上结合靶蛋白—一抗—二抗的位置即将呈现一定的颜色。
二、材料与方法
1.材料
从微生物细胞中提取的多酚氧化酶（PPO）：10μl，20μl
NC膜：硝酸纤维素膜
2.仪器：
电转移槽，电泳仪，塑料封口机，摇床
3.试剂：
转移缓冲液：48Mm Tris,39mM甘氨酸，0.037%SDS同时加入20%乙醇。
封闭液与稀释液：PBS（牛血清白蛋白）
辣根过氧化物酶显色液：现配现用
三、操作步骤
1.SDS-PAGE电泳见上个实验
2.电转
⑴剪NC膜大小、滤纸与凝胶板一致，浸泡在转移缓冲液中5min。
⑵在转移装置中依次将三层滤纸、凝胶、滤纸、三层滤纸放在一起。
⑶将装好的转移装置放入电转移槽中NC膜一侧向正极，凝胶一面向负极。
⑷接通电源电压63V，电流90mA,转移过夜。
⑸转移结束后，取出装置，依次取掉各层，用铅笔在膜的上沿做标记，切下其中一个孔所对应膜的一半。
⑹NC膜的封闭：将NC膜放入一塑料袋中，加入封闭液3ml，封口，轻轻震荡2h。
⑺将封闭好的NC膜放入另一塑料袋中，加入用封闭液稀释的一抗，2.8ml，封口。4℃下轻摇2h。
⑻洗膜：弃去反应液，用一抗稀释液洗三次，每次10min。
将膜从PBS中取出转至150mM氯化钠，50mM Tris-HCL(pH7.5)溶液中轻轻震荡10min。
⑼将二抗用二抗稀释液稀释，将NC膜放入塑料袋中，加入二抗溶液2.8ml。封口，轻轻震荡1h。
⑽洗膜：取出膜转至150mM氯化钠，50mM Tris-HCL(pH7.5)溶液中轻轻震荡10min，三次。
⑾将膜放入显色液中，室温轻轻摇动，10min。
⑿待条带出现后，立刻用水洗膜，然后转入PBS中，观察记录。
实验九 等电聚焦电泳（IEF）分离蛋白及测定蛋白质等电点
一、原理
等电点聚焦（IEF）是在电场中分离蛋白质技术的一个重要发展，等电聚焦是在稳定的pH梯度中按等电点的不同分离两性大分子的平衡电泳方法。
在电场中充有两性载体和抗对流介质，当加上电场后，由于两性载体移动的结果，在两极间逐步建立稳定的pH梯度，当蛋白质分子或其他两性分子存在于这样的pH梯度中时，这种分子便会由于其表面电荷在此电场中运动，并最终达到一个使其表面静电荷为0的区带，这时的pH则是该分子的pI，聚焦在等电点的分子也会不断扩散，一旦偏离其等电点后，由于pH环境的改变，分子又立即得到正电荷或负电荷，从而又向pI迁移。因此，这些分子总会是处于不断扩散和抗扩散的平衡中，在pI处得以“聚焦”.
二、仪器与试剂
1．材料：蛋白样品
2．试剂：
聚丙烯酰胺、甲乙聚丙烯酰胺、两性电解质、尿素、NP-40、teiton-100
电极液：1M磷酸（阳极液）、1M氢氧化钠（阴极液）
固定液：100g三氯乙酸、10g磺基水杨酸溶于500ml，定容为1000ml
染色液：0.35g考马斯亮蓝R－150溶于300ml脱色液中，加热到60－70℃，加入0.3g硫酸铜。
脱色液：25％乙醇、8％冰乙酸溶于水
样品缓冲液:1％Ampholine 、2％Triton X-100、9M尿素
三、操作步骤：
1, 样品制备：
用IEF样品缓冲液提取待分析样品，如其他缓冲液提取的样品则应透析后，冷冻干燥、再复溶于IEF样品缓冲液。充分溶解后，离心去除不溶杂质。
2,制模具：
洗干净两块IEF专用玻璃板，进行硅化和反硅化处理，两块玻璃板的硅化和反硅化面相对，放上夹条，夹子夹好。
3, 配胶：
胶液组成：6ml胶母液（10％，19/1）
6－8％尿素
1ml Ampholine (pH3.5-10)
60-80ul 10%AP
5 ul TEMED
4, 灌胶：配好的胶迅速灌入模具
5, 电泳：
等胶凝固后，小心揭去上下玻璃板，将塑料垫片底部擦干，小心放于电泳槽上。在胶面两边各放一根浸透电极缓冲液的电极条。在胶面上任意位置上放上小擦镜纸片，在纸片上加样，盖上盖子，横功率25W电泳，约10min后，暂停电泳，取下纸片，继续电泳约30min，待电流达4mA以下，停止电泳。
6, 表面电极测定蛋白质的pI
7, 固定：取出塑料片，放入固定液中15min
8, 染色：取出塑料片放入染色液中65℃染色，直至条带出现
9, 可脱色至背景消除后干燥保存。
四、结果 （略）
五、注意事项
1、 两性电解质是等电聚焦的关键试剂，它的含量2﹪-3﹪较合适，能形成较好的pH梯度。
2、 丙烯酰胺最好是经过重结晶的。
3、 过硫酸铵一定要新配置。
4、 所有水用重蒸水。
5、 样品必须无离子，否则电泳时样品带可能走歪，拖带或根本不成带。
6、 平板等电聚焦电泳的胶很薄，当电流稳定在8mA，电压上升到550V 以上，由于阴极飘移，造成局部电流过大，胶承受不了而被烧断。
核酸技术
实验十 染色体DNA的提取
一、实验目的与原理
DNA是遗传信息的载体，是最重要的生物信息(bioinformation)(bioinformation)(bioinformation)(bioinformation)分子，是分子生物学研究的主要对象。DNA的提取是分子生物学实验技术中的最重要、最基本的操作。本实验通过植物样品在液氮下研磨以粉碎组织，通过裂解液裂解细胞，有机溶剂反复抽提，使DNA进入水相与蛋白质成分分开，在RNase作用下，降解RNA以纯化DNA。
二、材料以方法
1、 材料：培养菌体
2、 仪器设备：超净工作台，培养箱，摇床，恒温水浴锅，高速冷冻离心机，台式离心机，移液枪一套，低温冰箱，冷冻真空干燥机，电泳仪，水平电泳槽，紫外观测仪
3、 试剂：
细胞裂解液 100 mM Tris-HCl
5 mM EDTA
500 mM NaCl
1.25% SDS
PH 7.5
饱和酚，氯仿/异戊醇，酚/氯仿/异戊醇
无水乙醇，70％乙醇，异丙醇
3 M NaAc pH5.2, RNase，50×TE缓冲液，电泳载样缓冲液
三、操作步骤
（1） 培养菌体
（2） 加入10 ml裂解液，1/10体积酚，于65℃下20－30 min，然后加入等体积的氯仿，轻摇
（3） 12000－15000rpm离心15 min
（4） 取上淸液，加入等体积氯仿，轻摇，12000－15000rpm离心15 min
（5） 取上淸液，加入0.6倍体积冷异丙醇（-20℃）或2倍体积冷无水乙醇（-20℃）
（6） 加入1/10体积的3 M NaAc(pH5.2)，置于室温下10 min
（7） 12000－15000rpm离心10 min
（8） 倒弃液体留下沉淀，用70％乙醇洗涤沉淀
（9） 加入2倍体积无水乙醇
（10） 12000－15000rpm离心10 min
（11） 倒弃液体留下沉淀，真空干燥
（12） 复溶于2 ml TE
（13） 加入RNase，65℃或37℃处理10－30 min
（14） 加等体积酚，酚/氯仿，氯仿各一次，12000－15000rpm离心10 min
（15） 取上淸液，加入0.6倍体积冷异丙醇（-20℃）或2倍体积冷无水乙醇（-20℃）
（16） 加入1/10体积的3 M NaAc(PH5.2)，置于室温下10 min
（17） 12000－15000rpm离心10 min
（18） 倒弃液体留下沉淀，用70％乙醇洗涤沉淀
（19） 真空干燥沉淀
（20） 复溶于0.5－1.0 ml的TE或水中，分装成小体积，4℃或-20℃保存。
（21） 电泳检测提取DNA的质量
四、结果与分析
点样空，若发亮则说明有污染
超螺旋结构DNA，若条带有拖尾则
说明有破碎的DNA
少量未清除的RNA
五、注意事项
1、 重点防止DNA的损伤，包括各种物理、化学和机械损伤。
2、 干燥好的染色体DNA最好溶于去离子水，以备后面直接利用。如果用TE 缓冲液溶解，后面还需去离子。
3、 取上清时，如果上清液过少，可再加入少量水，重新离心，取上清，避免DNA损失过多。
实验十一 质粒DNA的提取与纯化
一、实验目的与原理
质粒多为一些双链、环状的DNA分子，是独立于细菌染色体之外进行复制和遗传的辅助性遗传单位。质粒是进行分子生物学实验操作，进行遗传工程改良物种等工作时最主要的DNA载体。提取质粒的基本步骤分为三步：①细菌的培养和质粒的扩增，②细菌菌体的裂解，③质粒DNA的纯化。本实验采取的菌体裂解方法为碱解法，质粒纯化方法为梯度离心法。
二、材料与试剂
1、材料：大肠杆菌(Escherichia coli)(Escherichia coli)(Escherichia coli)(Escherichia coli)
2、仪器：超净工作台，培养箱，摇床，恒温水浴锅，台式离心机，取液器一套，低温冰箱，冷冻真空干燥机，电泳仪，水平电泳槽，紫外观测仪
3、试剂：
Solution I 25 mM Tris-Hcl(pH7.4)
10 mM EDTA(pH8.0)
50 mM葡萄糖
高压灭菌，4℃保存
Solution II 0.2 M NaOH, 1%SDS 现配现用
Solution III 5 N KAc pH4.8
高压灭菌，4℃保存
3 M NaAc PH5.2, 高压灭菌，4℃保存。异丙醇，溶菌酶（8 mg/ml），酚/氯仿，无水乙醇，70％乙醇，LB培养基，电泳试剂
三、操作步骤
1、细菌繁殖
LB培养基，2 ml/20ml，37℃，200rpm，摇一摇，过夜
2、离心10 min，5000 rpm, 4℃；弃上淸液
3、沉淀（菌体细胞）预冷的TES缓冲液洗涤，离心10 min，5000 rpm, 4℃
加入预冷的1 ml Solution I，冰浴，10 min
4、重新悬浮，加入150 ul溶菌酶母液，室温放置5 min
5、加入1.2 ml Solution II, 冰浴，5 min
6、加入0.9 ml预冷乙酸钾，混匀，离心10 min，12000 rpm, 4℃
7、加入1.5 ml异丙醇，-20℃冰箱内放置15 min
8、离心10 min，12000 rpm, 4℃
9、取沉淀，悬于400 ul TE缓冲液中
10、加入40 ul，3 M NaAc
11、酚/氯仿，抽提，乙醇沉淀
12、离心10 min，12000 rpm, 4℃
13、取沉淀，冷冻干燥，再悬浮于50 ul TE缓冲液中。
14、电泳检测提取DNA的质量
三、结果与分析
超螺旋结构DNA
四、注意事项
在本实验中，如果不经过RNase处理，在电泳带中，RNA会呈现极亮的带，所以，建议使用RNase处理一下。离心时应注意转速不能太低，太低会导致质粒不纯；也不要太高，否则质粒不易溶解。电泳时应注意电压，电压太高或混有蛋白质杂质时电泳带容易产生偏离和拖尾。在DNA操作中应尽可能轻地操作（尤其是分别加入溶液Ⅱ、溶液Ⅲ轻轻摇），否则质粒容易断裂，从而在观察条带时出现许多杂带。无水乙醇可用于沉淀质粒，如果质粒量比较大的话，一般用异丙醇来沉淀。
实验十二 亚克隆技术
一、目的与原理
限制性内切酶是一类能识别双链DNA分子中特异核苷酸序列的DNA水解酶，该类酶是体外剪切基因片段的重要工具。实验主要通过EcoR Ⅰ,Hind Ⅲ两种限制性内切酶对λ DNA的单切酶、双切酶及部分酶切的操作，掌握内切酶的实验操作技术。
二、材料与试剂
1．材料：λDNA
2．仪器：
离心机，恒温水浴，取液器，电泳仪，电泳槽，紫外观测仪
3．试剂
EcoRI及缓冲液，HindIII及缓冲液，λDNA,TAE缓冲液
三、操作步骤：
EcoRI、HindIII单酶切及部分酶切
取2只干净、灭菌新Eppendorf管，分别按下表加入
试剂 A（μl）
灭菌水 0
10×缓冲液 2
质粒 5
染色体DNA 12
EcoR I
1
HindIII
总体积 20
37℃保温1—2小时。保温结束后，分别加入0.5M（pH8.0）EDTA（使终浓度达到10mM）。加入6μl电泳加样缓冲液。
电泳。
EcoRI、HindIII双酶切
取1只干净、灭菌新Eppendorf管，按下表
加入试剂 体积（μl）
灭菌水 14
10×缓冲液 2
λDNA 2
EcoR I
1
HindIII
1
总体积 20
37℃保温1—2小时。保温结束后，分别加入0.5M（ pH7.2）EDTA（使终浓度达到10mM）。加入6μl电泳加样缓冲液。电泳分析。
四、结果 （略）
五、注意事项
1、 酶的量不超过总体积的1﹪，以为酶的保存液中含有甘油，甘油太多会形成星活性，切下非目的片段。
2、 在加入模板DNA以前可加入少量BSA，减轻管壁对酶的吸附作用。
3、 如果用双酶切，必须注意分别提供各自的最适盐浓度。若两者可以用同种缓冲液，则可同时水解，否则低盐浓度的限制酶必须先用，随着调节盐浓度，再用高盐浓度的限制酶水解。也可在第一个酶切反应完成后，用等体积酚/氯仿（1：1）抽提，加0.1倍体积的3mol/LnaAc和2倍体积的无水乙醇，混匀后-20℃放置30分钟，离心，干燥并重新溶于缓冲液后进行第二个酶切反应。
蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中电泳时，它的迁移取决于它所带电荷以及分子大小和形状等因素。1967年Shapiro等人发现，如果在聚丙烯酰胺系统中加入阴离子去污剂十二烷基磺酸钠(SDS),大多数蛋白质能与SDS按一定比例结合，即每克蛋白质结合1.4g的SDS－复合物都带上相同密度的负电荷，它的量大大超过了蛋白质分子原有的电荷量，因而消除了蛋白质原有的电荷差别，使蛋白质分子电泳的迁移率主要取决于本身的分子量，而与蛋白质所带的电荷无关，在一定条件下，蛋白质的分子量的对数与电泳迁移率间呈负相关。
本实验的目的是对多酚氧化酶的纯化度鉴定及分子量的测定，通过实验，学习和掌握SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳法蛋白质纯度和分子量的鉴定。
二、仪器与试剂
1．材料：
硫酸铵盐析沉淀的多酚氧化酶粗酶样品、DEAE-纤维素DE52柱层析的样品，Sephadex G-100柱层析的样品。
2．试剂：
（1）丙稀酰胺(Acr母液)：30％Acr （Acr/Bis）
（2）10％的SDS溶液
（3）10％的过硫酸铵溶液
（4）四甲基乙二胺（TEMED）
（5）分离胶缓冲液：1.5M Tris,PH8.8
（6）浓缩胶缓冲液：1.0M Tris,PH6.8
（7）电极缓冲液：10×30g Tris,125g 甘氨酸和5g SDS，加水溶解定容至1000ml,pH8.3
（8）样品缓冲液：0.2M Tris,PH6.8,1%SDS,30%甘油，巯基乙醇及溴酚兰
（9）染色液：0.15％考马斯亮蓝R250，溶于脱色液
（10）脱色液：50％的甲醇，7％的冰醋酸的水溶液
（11）标准分子量蛋白。
3．仪器设备：
电泳仪，垂直电泳槽等。
三、操作步骤
1, 凝胶制备：
用两块电泳玻璃板制成垂直板槽（不能漏胶），垂直放置。将配制好的分离胶溶液，倒入，滴加入无离子水，待凝胶聚集后，倒出无离子水，用吸水纸吸干，倒入浓缩胶，再插入梳子。
2, 上样：
分别取样品若干ml于离心管中，按1/1-1/5比例加入5×样品缓冲液，再沸水浴中加热3－5min，取出待用。用微量注射器分别吸取不超过30ul不同浓度的标准蛋白样品和试验样品注入样品槽。点样结束后，调节电泳仪电流到10mA（2－3mA/em），保持电流稳定不变，当溴酚蓝迁移到离分离胶底1－2cm时，即可停止电泳。
3, 染色：
电泳完毕后，取出凝胶板，浸入染色液中，在37℃温箱中保温过夜。倒掉染色液，24h后，即可看到清晰的蛋白质条带。
四、结果 （略）
五、注意事项
1、 SDS与蛋白质的结合按质量成比例（即：1.4gSDS/g蛋白质），如果比例不当，就不能得到准确的数据。
2、 用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白质相对分子量时，必须同时作标准曲线。不能利用这次的标准曲线作为下次用。
3、 有些蛋白质由亚基（如血红蛋白）或两条以上肽链（α-胰凝乳蛋白酶）组成的，它们在巯基乙醇和SDS的作用下解离成亚基或多条单肽链。因此，对于这一类蛋白质，SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定的只是它们的亚基或是单条肽链的相对分子量。
4、 有的蛋白质（如：电荷异常或结构异常的蛋白质；带有较大辅基的蛋白质）不能采用该法测相对分子量。
5、 如果该电泳中出现拖尾、染色带的背景不清晰等现象，可能是SDS不纯引起。
实验八 Western bloting 技术
一、实验目的与原理
Western bloting技术是用来检测蛋白表达的特定的灵敏的方法，由蛋白质的SDS-PAGE、电转及杂交几部分组成。杂交技术主要有NC膜封闭，靶蛋白与第一抗体的反应，结合靶蛋白的一抗和二抗的反应，显色等组成。将凝胶上的蛋白质转移到NC膜上，用其他蛋白作为封闭液，将膜上余下的其他蛋白结合位点封闭，加入与检测蛋白特异性的第一抗体，经免疫反应，一抗与靶蛋白结合，经洗膜液洗涤后，膜上仅在靶蛋白上结合抗体。在加入与第一抗体有免疫特异性的二抗，使之与一抗反应，反应后，经洗膜液洗涤，二抗仅存在于结合靶蛋白的一抗上。因为这种二抗都为酶标抗体，通过酶标反应，在显色液中，膜上结合靶蛋白—一抗—二抗的位置即将呈现一定的颜色。
二、材料与方法
1.材料
从微生物细胞中提取的多酚氧化酶（PPO）：10μl，20μl
NC膜：硝酸纤维素膜
2.仪器：
电转移槽，电泳仪，塑料封口机，摇床
3.试剂：
转移缓冲液：48Mm Tris,39mM甘氨酸，0.037%SDS同时加入20%乙醇。
封闭液与稀释液：PBS（牛血清白蛋白）
辣根过氧化物酶显色液：现配现用
三、操作步骤
1.SDS-PAGE电泳见上个实验
2.电转
⑴剪NC膜大小、滤纸与凝胶板一致，浸泡在转移缓冲液中5min。
⑵在转移装置中依次将三层滤纸、凝胶、滤纸、三层滤纸放在一起。
⑶将装好的转移装置放入电转移槽中NC膜一侧向正极，凝胶一面向负极。
⑷接通电源电压63V，电流90mA,转移过夜。
⑸转移结束后，取出装置，依次取掉各层，用铅笔在膜的上沿做标记，切下其中一个孔所对应膜的一半。
⑹NC膜的封闭：将NC膜放入一塑料袋中，加入封闭液3ml，封口，轻轻震荡2h。
⑺将封闭好的NC膜放入另一塑料袋中，加入用封闭液稀释的一抗，2.8ml，封口。4℃下轻摇2h。
⑻洗膜：弃去反应液，用一抗稀释液洗三次，每次10min。
将膜从PBS中取出转至150mM氯化钠，50mM Tris-HCL(pH7.5)溶液中轻轻震荡10min。
⑼将二抗用二抗稀释液稀释，将NC膜放入塑料袋中，加入二抗溶液2.8ml。封口，轻轻震荡1h。
⑽洗膜：取出膜转至150mM氯化钠，50mM Tris-HCL(pH7.5)溶液中轻轻震荡10min，三次。
⑾将膜放入显色液中，室温轻轻摇动，10min。
⑿待条带出现后，立刻用水洗膜，然后转入PBS中，观察记录。
实验九 等电聚焦电泳（IEF）分离蛋白及测定蛋白质等电点
一、原理
等电点聚焦（IEF）是在电场中分离蛋白质技术的一个重要发展，等电聚焦是在稳定的pH梯度中按等电点的不同分离两性大分子的平衡电泳方法。
在电场中充有两性载体和抗对流介质，当加上电场后，由于两性载体移动的结果，在两极间逐步建立稳定的pH梯度，当蛋白质分子或其他两性分子存在于这样的pH梯度中时，这种分子便会由于其表面电荷在此电场中运动，并最终达到一个使其表面静电荷为0的区带，这时的pH则是该分子的pI，聚焦在等电点的分子也会不断扩散，一旦偏离其等电点后，由于pH环境的改变，分子又立即得到正电荷或负电荷，从而又向pI迁移。因此，这些分子总会是处于不断扩散和抗扩散的平衡中，在pI处得以“聚焦”.
二、仪器与试剂
1．材料：蛋白样品
2．试剂：
聚丙烯酰胺、甲乙聚丙烯酰胺、两性电解质、尿素、NP-40、teiton-100
电极液：1M磷酸（阳极液）、1M氢氧化钠（阴极液）
固定液：100g三氯乙酸、10g磺基水杨酸溶于500ml，定容为1000ml
染色液：0.35g考马斯亮蓝R－150溶于300ml脱色液中，加热到60－70℃，加入0.3g硫酸铜。
脱色液：25％乙醇、8％冰乙酸溶于水
样品缓冲液:1％Ampholine 、2％Triton X-100、9M尿素
三、操作步骤：
1, 样品制备：
用IEF样品缓冲液提取待分析样品，如其他缓冲液提取的样品则应透析后，冷冻干燥、再复溶于IEF样品缓冲液。充分溶解后，离心去除不溶杂质。
2,制模具：
洗干净两块IEF专用玻璃板，进行硅化和反硅化处理，两块玻璃板的硅化和反硅化面相对，放上夹条，夹子夹好。
3, 配胶：
胶液组成：6ml胶母液（10％，19/1）
6－8％尿素
1ml Ampholine (pH3.5-10)
60-80ul 10%AP
5 ul TEMED
4, 灌胶：配好的胶迅速灌入模具
5, 电泳：
等胶凝固后，小心揭去上下玻璃板，将塑料垫片底部擦干，小心放于电泳槽上。在胶面两边各放一根浸透电极缓冲液的电极条。在胶面上任意位置上放上小擦镜纸片，在纸片上加样，盖上盖子，横功率25W电泳，约10min后，暂停电泳，取下纸片，继续电泳约30min，待电流达4mA以下，停止电泳。
6, 表面电极测定蛋白质的pI
7, 固定：取出塑料片，放入固定液中15min
8, 染色：取出塑料片放入染色液中65℃染色，直至条带出现
9, 可脱色至背景消除后干燥保存。
四、结果 （略）
五、注意事项
1、 两性电解质是等电聚焦的关键试剂，它的含量2﹪-3﹪较合适，能形成较好的pH梯度。
2、 丙烯酰胺最好是经过重结晶的。
3、 过硫酸铵一定要新配置。
4、 所有水用重蒸水。
5、 样品必须无离子，否则电泳时样品带可能走歪，拖带或根本不成带。
6、 平板等电聚焦电泳的胶很薄，当电流稳定在8mA，电压上升到550V 以上，由于阴极飘移，造成局部电流过大，胶承受不了而被烧断。
核酸技术
实验十 染色体DNA的提取
一、实验目的与原理
DNA是遗传信息的载体，是最重要的生物信息(bioinformation)(bioinformation)(bioinformation)(bioinformation)分子，是分子生物学研究的主要对象。DNA的提取是分子生物学实验技术中的最重要、最基本的操作。本实验通过植物样品在液氮下研磨以粉碎组织，通过裂解液裂解细胞，有机溶剂反复抽提，使DNA进入水相与蛋白质成分分开，在RNase作用下，降解RNA以纯化DNA。
二、材料以方法
1、 材料：培养菌体
2、 仪器设备：超净工作台，培养箱，摇床，恒温水浴锅，高速冷冻离心机，台式离心机，移液枪一套，低温冰箱，冷冻真空干燥机，电泳仪，水平电泳槽，紫外观测仪
3、 试剂：
细胞裂解液 100 mM Tris-HCl
5 mM EDTA
500 mM NaCl
1.25% SDS
PH 7.5
饱和酚，氯仿/异戊醇，酚/氯仿/异戊醇
无水乙醇，70％乙醇，异丙醇
3 M NaAc pH5.2, RNase，50×TE缓冲液，电泳载样缓冲液
三、操作步骤
（1） 培养菌体
（2） 加入10 ml裂解液，1/10体积酚，于65℃下20－30 min，然后加入等体积的氯仿，轻摇
（3） 12000－15000rpm离心15 min
（4） 取上淸液，加入等体积氯仿，轻摇，12000－15000rpm离心15 min
（5） 取上淸液，加入0.6倍体积冷异丙醇（-20℃）或2倍体积冷无水乙醇（-20℃）
（6） 加入1/10体积的3 M NaAc(pH5.2)，置于室温下10 min
（7） 12000－15000rpm离心10 min
（8） 倒弃液体留下沉淀，用70％乙醇洗涤沉淀
（9） 加入2倍体积无水乙醇
（10） 12000－15000rpm离心10 min
（11） 倒弃液体留下沉淀，真空干燥
（12） 复溶于2 ml TE
（13） 加入RNase，65℃或37℃处理10－30 min
（14） 加等体积酚，酚/氯仿，氯仿各一次，12000－15000rpm离心10 min
（15） 取上淸液，加入0.6倍体积冷异丙醇（-20℃）或2倍体积冷无水乙醇（-20℃）
（16） 加入1/10体积的3 M NaAc(PH5.2)，置于室温下10 min
（17） 12000－15000rpm离心10 min
（18） 倒弃液体留下沉淀，用70％乙醇洗涤沉淀
（19） 真空干燥沉淀
（20） 复溶于0.5－1.0 ml的TE或水中，分装成小体积，4℃或-20℃保存。
（21） 电泳检测提取DNA的质量
四、结果与分析
点样空，若发亮则说明有污染
超螺旋结构DNA，若条带有拖尾则
说明有破碎的DNA
少量未清除的RNA
五、注意事项
1、 重点防止DNA的损伤，包括各种物理、化学和机械损伤。
2、 干燥好的染色体DNA最好溶于去离子水，以备后面直接利用。如果用TE 缓冲液溶解，后面还需去离子。
3、 取上清时，如果上清液过少，可再加入少量水，重新离心，取上清，避免DNA损失过多。
实验十一 质粒DNA的提取与纯化
一、实验目的与原理
质粒多为一些双链、环状的DNA分子，是独立于细菌染色体之外进行复制和遗传的辅助性遗传单位。质粒是进行分子生物学实验操作，进行遗传工程改良物种等工作时最主要的DNA载体。提取质粒的基本步骤分为三步：①细菌的培养和质粒的扩增，②细菌菌体的裂解，③质粒DNA的纯化。本实验采取的菌体裂解方法为碱解法，质粒纯化方法为梯度离心法。
二、材料与试剂
1、材料：大肠杆菌(Escherichia coli)(Escherichia coli)(Escherichia coli)(Escherichia coli)
2、仪器：超净工作台，培养箱，摇床，恒温水浴锅，台式离心机，取液器一套，低温冰箱，冷冻真空干燥机，电泳仪，水平电泳槽，紫外观测仪
3、试剂：
Solution I 25 mM Tris-Hcl(pH7.4)
10 mM EDTA(pH8.0)
50 mM葡萄糖
高压灭菌，4℃保存
Solution II 0.2 M NaOH, 1%SDS 现配现用
Solution III 5 N KAc pH4.8
高压灭菌，4℃保存
3 M NaAc PH5.2, 高压灭菌，4℃保存。异丙醇，溶菌酶（8 mg/ml），酚/氯仿，无水乙醇，70％乙醇，LB培养基，电泳试剂
三、操作步骤
1、细菌繁殖
LB培养基，2 ml/20ml，37℃，200rpm，摇一摇，过夜
2、离心10 min，5000 rpm, 4℃；弃上淸液
3、沉淀（菌体细胞）预冷的TES缓冲液洗涤，离心10 min，5000 rpm, 4℃
加入预冷的1 ml Solution I，冰浴，10 min
4、重新悬浮，加入150 ul溶菌酶母液，室温放置5 min
5、加入1.2 ml Solution II, 冰浴，5 min
6、加入0.9 ml预冷乙酸钾，混匀，离心10 min，12000 rpm, 4℃
7、加入1.5 ml异丙醇，-20℃冰箱内放置15 min
8、离心10 min，12000 rpm, 4℃
9、取沉淀，悬于400 ul TE缓冲液中
10、加入40 ul，3 M NaAc
11、酚/氯仿，抽提，乙醇沉淀
12、离心10 min，12000 rpm, 4℃
13、取沉淀，冷冻干燥，再悬浮于50 ul TE缓冲液中。
14、电泳检测提取DNA的质量
三、结果与分析
超螺旋结构DNA
四、注意事项
在本实验中，如果不经过RNase处理，在电泳带中，RNA会呈现极亮的带，所以，建议使用RNase处理一下。离心时应注意转速不能太低，太低会导致质粒不纯；也不要太高，否则质粒不易溶解。电泳时应注意电压，电压太高或混有蛋白质杂质时电泳带容易产生偏离和拖尾。在DNA操作中应尽可能轻地操作（尤其是分别加入溶液Ⅱ、溶液Ⅲ轻轻摇），否则质粒容易断裂，从而在观察条带时出现许多杂带。无水乙醇可用于沉淀质粒，如果质粒量比较大的话，一般用异丙醇来沉淀。
实验十二 亚克隆技术
一、目的与原理
限制性内切酶是一类能识别双链DNA分子中特异核苷酸序列的DNA水解酶，该类酶是体外剪切基因片段的重要工具。实验主要通过EcoR Ⅰ,Hind Ⅲ两种限制性内切酶对λ DNA的单切酶、双切酶及部分酶切的操作，掌握内切酶的实验操作技术。
二、材料与试剂
1．材料：λDNA
2．仪器：
离心机，恒温水浴，取液器，电泳仪，电泳槽，紫外观测仪
3．试剂
EcoRI及缓冲液，HindIII及缓冲液，λDNA,TAE缓冲液
三、操作步骤：
EcoRI、HindIII单酶切及部分酶切
取2只干净、灭菌新Eppendorf管，分别按下表加入
试剂 A（μl）
灭菌水 0
10×缓冲液 2
质粒 5
染色体DNA 12
EcoR I
1
HindIII
总体积 20
37℃保温1—2小时。保温结束后，分别加入0.5M（pH8.0）EDTA（使终浓度达到10mM）。加入6μl电泳加样缓冲液。
电泳。
EcoRI、HindIII双酶切
取1只干净、灭菌新Eppendorf管，按下表
加入试剂 体积（μl）
灭菌水 14
10×缓冲液 2
λDNA 2
EcoR I
1
HindIII
1
总体积 20
37℃保温1—2小时。保温结束后，分别加入0.5M（ pH7.2）EDTA（使终浓度达到10mM）。加入6μl电泳加样缓冲液。电泳分析。
四、结果 （略）
五、注意事项
1、 酶的量不超过总体积的1﹪，以为酶的保存液中含有甘油，甘油太多会形成星活性，切下非目的片段。
2、 在加入模板DNA以前可加入少量BSA，减轻管壁对酶的吸附作用。
3、 如果用双酶切，必须注意分别提供各自的最适盐浓度。若两者可以用同种缓冲液，则可同时水解，否则低盐浓度的限制酶必须先用，随着调节盐浓度，再用高盐浓度的限制酶水解。也可在第一个酶切反应完成后，用等体积酚/氯仿（1：1）抽提，加0.1倍体积的3mol/LnaAc和2倍体积的无水乙醇，混匀后-20℃放置30分钟，离心，干燥并重新溶于缓冲液后进行第二个酶切反应。
Cayman品牌代理商
Cayman品牌代理商–上海金畔
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生酸类物质、氧化氮试剂及许多相关脂质、脂肪酸、酶和抗体等。Cayman非常愿意接受各地客户的要求，合成复杂和不稳定分子。
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(MPEG)2赖氨酸-NS
(N-Succinimidyloxycarbonyl)pentyl-PEG-(N-Succinimidyloxycarbonyl)pentyl
(RO)3Si-PEG-Si(OR)3
3-arm-PEG-COOH
3-Arm-PEG-Mal
3-Arm-PEG-NH2
3-Arm-PEG-NHS
4-Arm-mPEG
4-Arm-PEG-5-(N-Succinimidyloxycarbonyl)pentyl
4-Arm-PEG-Ac
4-Arm-PEG-Acid
4-arm-PEG-ACRL
4arm-PEG-ACRL-10K
4arm-PEG-ACRL-20K
4-arm-PEG-Acrylate
4-Arm-PEG-Amine
4-Arm-PEG-Azide
4-Arm-PEG-Carboxyl
4-arm-PEG-CM
4arm-PEG-CM-10K
4-Arm-PEG-COOH
4-Arm-PEG-DSPE
4-Arm-PEG-EP
4arm-PEG-EPOX-10K
4arm-PEG-EPOX-20K
4-Arm-PEG-Epoxide
4-arm-PEG-Hydroxy
4-Arm-PEG-Mal
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4-Arm-PEG-Maleimide
4-Arm-PEG-N3
4-Arm-PEG-NH2
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4-Arm-PEG-NH2-SC
4-Arm-PEG-NH2-SS
4-Arm-PEG-NHS
4-Arm-PEG-N-hydroxysuccinimide
4-Arm-PEG-Nitrophenyl Carbonate
4-Arm-PEG-NPC
4-Arm-PEG-OH
4-Arm-PEG-SCM
4arm-PEG-SCM-10K
4-Arm-PEG-SG
4-Arm-PEG-SH
4arm-PEG-SH-10K
4-Arm-PEG-SH-SG
4-Arm-PEG-SH-SS
4-Arm-PEG-SS
4-Arm-PEG-Succinimidyl Carboxymethyl
4-Arm-PEG-Succinimidyl glutarate
4-Arm-PEG-Sulphydryl
4-arm-PEG-Thiol
4-Arm-PEG-Thiol （Sulphydryl）
4臂聚乙二醇-N-羟基琥珀酰亚胺酯
4臂聚乙二醇氨基
4臂聚乙二醇胺基
4臂聚乙二醇丙烯酸
4臂聚乙二醇丙烯酸酯
4臂聚乙二醇叠氮
4臂聚乙二醇二硬脂酰甘油磷脂乙醇胺
4臂聚乙二醇琥珀酰亚胺
4臂聚乙二醇琥珀酰亚胺戊二酸酯
4臂聚乙二醇环氧丙烷
4臂聚乙二醇硫醇
4臂聚乙二醇马来酰亚胺
4臂聚乙二醇羟基
4臂聚乙二醇巯基 (硫醇)
4臂聚乙二醇羧基
4臂聚乙二醇硝苯基碳酸盐
689580
689696
6-aminohexyl-PEG-6-aminohexyl
6-Arm-PEG-Ac
6-Arm-PEG-EP
6-Arm-PEG-NCO
6-Arm-PEG-NH2
6-Arm-PEG-NHS
6-Arm-PEG-OH
6-Arm-PEG-SG
6-Arm-PEG-SH
6-Arm-PEG-SS
6-氨基己基聚乙二醇6-氨基己基
8-Arm-PEG-Amine
8-Arm-PEG-Carboxyl
8-Arm-PEG-CM
8-Arm-PEG-COOH
8-arm-PEG-Hydroxy
8-Arm-PEG-NH2
8-Arm-PEG-NHS
8-Arm-PEG-N-hydroxysuccinimide
8-Arm-PEG-Nitrophenyl Carbonate
8-Arm-PEG-NPC
8-Arm-PEG-OH
8-Arm-PEG-SG
8-Arm-PEG-Succinimidyl glutarate
8臂聚乙二醇-N-羟基琥珀酰亚胺酯
8臂聚乙二醇胺基
8臂聚乙二醇琥珀酰亚胺戊二酸酯
8臂聚乙二醇羟基
8臂聚乙二醇羧基
8臂聚乙二醇硝苯基碳酸盐
a,w- Di-maleinimids
a,w- Di-NHS esters
AA-PEG-AA
Acetic Acid-PEG-Acetic Acid
Acid-PEG-Fmoc-amine X=COOH,Y=Fmoc-NH,n=11
Ac-PEG-Ac
Ac-PEG-MAL
Ac-PEG-Maleimide
Ac-PEG-SCM
Ac-PEG-SVA
ACRL-PEG-ACRL-1000
ACRL-PEG-ACRL-10K
ACRL-PEG-ACRL-2000
ACRL-PEG-ACRL-20K
ACRL-PEG-ACRL-3400
ACRL-PEG-ACRL-5000
ACRL-PEG-MAL-3400
ACRL-PEG-SCM-2000
ACRL-PEG-SCM-3400
ACRL-PEG-SCM-5000
ACRL-PEG-SVA-3400
Acrylate-PEG-Acrylate
Acrylate-PEG-Maleimide
Acrylate-PEG-SCM
Acrylate-PEG-Succinimidyl Carboxymethyl
Acrylate-PEG-Succinimidyl Valerate
Acrylate-PEG-SVA
Aldehyde-PEG-Aldehyde
ALD-PEG-ALD
a-Methoxy-w-azides
a-Methoxy-w-maleinimids
a-Methoxy-w-NHS esters
Amine-PEG-Amine
Amine-PEG-Amine X=Y=NH2,n=18
Amine-PEG-Azido
Amine-PEG-Boc-amine,X=NH2,Y=Boc-NH,n=6
Amine-PEG-Carboxyl
Amine-PEG-Silane
Amine-PEG-Thiol
Amine-PEG-Valeric Acid
Amino-PEG-Carboxyl
Amino-PEG-CM
Amino-PEG-COOH
Azide-PEG-amine
Azide-PEG-amine X=NH2,Y=N3,n=5
azide-PEG-azide
Azide-PEG-Biotin
Azide-PEG-Carboxyl
Azide-PEG-hydroxyl
Azide-PEG-N-hydroxysuccinimide
Azido-PEG
Azido-PEG amine
a-氨基盐酸盐-w-羧基聚乙二醇
a-羟基-w-琥珀酰亚胺丙酸酯聚乙二醇
a-羟基-w-马来酰亚胺聚乙二醇
a-羟基-w-羧基聚乙二醇
bALD-PEG-bALD
bALD-PEG-bALD-10K
bALD-PEG-bALD-3400
bALD-PEG-bALD-5K
Biotin PEG acid
Biotin PEG amine
Biotin PEG disulfide
Biotin-CONH-PEG-NH2
Biotin-CONH-PEG-O-C3H6-CONHS
Biotin-CONH-PEG-O-C3H6-COOH
Biotin-PEG-Amino
Biotin-PEG-Biotin
Biotin-PEG-Carboxyl
Biotin-PEG-COOH
Biotin-PEG-disulfide
Biotin-PEG-FITC
Biotin-PEG-Fluorescein
Biotin-PEG-Mal
Biotin-PEG-MAL-3400
Biotin-PEG-MAL-5000
Biotin-PEG-Maleimide
Biotin-PEG-Mercaptopropionyl
Biotin-PEG-Methacrylamide
Biotin-PEG-NH2
Biotin-PEG-NH2-2000
Biotin-PEG-NH2-3400
Biotin-PEG-NH2-5000
Biotin-PEG-NHS
Biotin-PEG-N-hydroxysuccinimide
Biotin-PEG-S2
Biotin-PEG-SC
Biotin-PEG-SC-2000
Biotin-PEG-SC-3400
Biotin-PEG-SC-5000
Biotin-PEG-SCM
Biotin-PEG-SCM-3400
Biotin-PEG-SCM-5000
Biotin-PEG-SH
Biotin-PEG-SIL-3400
Biotin-PEG-Silane
Biotin-PEG-Succinimidyl Carbonate
Biotin-PEG-Succinimidyl Carboxymethyl
Biotin-PEG-Succinimidyl Valerate
Biotin-PEG-SVA
Biotin-PEG-SVA-3400
Biotin-PEG-SVA-5000
BO-050TS
Boc-amino PEG amine
Boc-amino PEG diglycolic acid
Boc-amino PEG propionic acid
BOC-NH-PEG-Amine
BOC-NH-PEG-COOH
BOC-NH-PEG-diglycolic acid
Boc-NH-PEG-Methacrylamide
Boc-NH-PEG-NH2
BOC-NH-PEG-NH2-2000
BOC-NH-PEG-NH2-3400
BOC-NH-PEG-NHS
BOC-NH-PEG-Nitrophenyl Carbonate
BOC-NH-PEG-NPC
BOC-NH-PEG-NPC-5000
Boc-NH-PEG-O-C3H6-CONHS
Boc-NH-PEG-O-C3H6-COOH
BOC-NH-PEG-OH
BOC-NH-PEG-propionic acid
BOC-NH-PEG-SC
BOC-NH-PEG-SC-3400
BOC-NH-PEG-SC-5000
Boc-NH-PEG-SCM
BOC-NH-PEG-SCM-1000
BOC-NH-PEG-SCM-2000
BOC-NH-PEG-SCM-3400
BOC-NH-PEG-SCM-5000
BOC-NH-PEG-SH
BOC-NH-PEG-Succinimidyl Carbonate
BOC-NH-PEG-Succinimidyl Carboxymethyl
BOC-NH-PEG-TS
BOC-NH-聚乙二醇-N-羟基琥珀酰亚胺
BOC-NH-聚乙二醇氨基
BOC-NH-聚乙二醇丙酸
BOC-NH-聚乙二醇二甘醇酸
BOC-NH-聚乙二醇琥珀酰亚胺
BOC-NH-聚乙二醇琥珀酰亚胺碳酸酯
BOC-NH-聚乙二醇硫醇
BOC-NH-聚乙二醇羟基
BOC-NH-聚乙二醇羧基
BOC-NH-聚乙二醇硝苯基碳酸盐
Boc-PEG-carbonateNHS
Br-PEG-Br
Butyraldehyde-PEG-Butyraldehyde
Carbonyl imidazole-PEG-Carbonyl imidazole
Carboxylic acid-PEG-Carboxylic acid
Carboxyl-PEG-Carboxyl
Carboxyl-PEG-Carboxyl,X=Y=COOH n=12
Carboxyl-PEG-Fmoc-amine X=COOH,Y=Fmoc-NH,n=11
Carboxyl-PEG-Silane
Carboxymethyl-PEG-Succinimidyl Carboxymethyl
Carboxymethyl-PEG-Thiol
CDI-PEG-CDI
CH3O-PEG-Br
CH3O-PEG-C2H4-mal
CH3O-PEG-C2H4-N3
CH3O-PEG-NH2
CH3O-PEG-NHCO-C2H4-CONHS
CH3O-PEG-NH-CO-C4H8-CHO
CH3O-PEG-NHCO-CH2-CH2-COOH
CH3O-PEG-OH
CH3O-PEG-SH
CM-PEG-CM
CM-PEG-CM-1000
CM-PEG-CM-2000
CM-PEG-CM-3400
CM-PEG-CM-5000
CM-PEG-SCM
CM-PEG-SCM-35K
CM-PEG-SH
CM-PEG-SH-1000
CM-PEG-SH-2000
CM-PEG-SH-3400
CM-PEG-SH-5000
CM-PEG-Thiol
CONHNH2-PEG-CONHNH2
CONHS-PEG-S-Trt
COOH-PEG-COOH
COOH-PEG-disulfide
COOH-PEG-Fmoc-NH
COOH-PEG-S2
COOH-PEG-SCM
COOH-PEG-SH
COOH-PEG-Silane
DE-034AS
DE-034GS
DE-034HS
DE-034PA
DE-050SH
DE-100GS
DE-100HS
DE-100MA
DE-100PA
DE-100SH
DE-200GS
DE-200HS
DE-200MA
DE-200PA
DE-200SH
DE-300PA
Decaethylene Glycol
Distearoylphosphatidylethanolamine-PEG-Acid
Distearoylphosphatidylethanolamine-PEG-Amine
Distearoylphosphatidylethanolamine-PEG-Biotin
Distearoylphosphatidylethanolamine-PEG-Maleimide
Distearoylphosphatidylethanolamine-PEG-N-hydroxysuccinimide
Distearoylphosphatidylethanolamine-PEG-Orthopyridyl Disulfide
Distearoylphosphatidylethanolamine-PEG-Succinimidyl Carboxymethyl
Disulfide-PEG-SPA
Dodecaethylene Glycol
DSPE-020CN
DSPE-020GS
DSPE-020MA
DSPE-020PA
DSPE-050CN
DSPE-050MA
DSPE-050PA
DSPE-AM0530K
DSPE-Comb-shaped PEG
DSPE-Multi-arm PEG
DSPE-PEG
DSPE-PEG-Acid
DSPE-PEG-Amine
DSPE-PEG-Amino
DSPE-PEG-Biotin
DSPE-PEG-Biotin-3400
DSPE-PEG-COOH
DSPE-PEG-Mal
DSPE-PEG-MAL-3400
DSPE-PEG-Maleimide
DSPE-PEG-NH2
DSPE-PEG-NH2-2000
DSPE-PEG-NHS
DSPE-PEG-N-hydroxysuccinimide
DSPE-PEG-OPSS
DSPE-PEG-SCM
DSPE-PEG-Succinimidyl Carboxymethyl
DSPE-PG8G
DSPE-Polyglycerine
DSPE-PTE020
Epoxide-PEG-Epoxide
EPOX-PEG-EPOX-2K
EPOX-PEG-EPOX-5K
EP-PEG-EP
FITC-PEG-COOH
FITC-PEG-MAL
FITC-PEG-NH2
FITC-PEG-NHS
FITC-PEG-SCM
FITC-PEG-SVA
Fluorescein-PEG-Amine
Fluorescein-PEG-Carboxyl
Fluorescein-PEG-COOH
Fluorescein-PEG-MAL
Fluorescein-PEG-Maleimide
Fluorescein-PEG-NH2
Fluorescein-PEG-NHS
Fluorescein-PEG-N-hydroxysuccinimide
Fluorescein-PEG-SCM
Fluorescein-PEG-Succinimidyl Carboxymethyl
Fluorescein-PEG-Succinimidyl Valerate
Fluorescein-PEG-SVA
FLUOR-PEG-MAL-3400
FLUOR-PEG-NH2-5000
FLUOR-PEG-SCM-20K
FLUOR-PEG-SCM-3400
FLUOR-PEG-SCM-5000
FLUOR-PEG-SVA-3400
FLUOR-PEG-SVA-5000
Fmoc-amino PEG propionic acid
Fmoc-NH-PEG-Amino
FMOC-NH-PEG-Amino*TFA salt
FMOC-NH-PEG-Carboxyl
FMOC-NH-PEG-Carboxymethyl
FMOC-NH-PEG-CM-3400
FMOC-NH-PEG-COOH
Fmoc-NH-PEG-Hydroxy
Fmoc-NH-PEG-NH2
FMOC-NH-PEG-NH2*TFA salt
FMOC-NH-PEG-NH2-TFA-1K
FMOC-NH-PEG-NH2-TFA-5K
Fmoc-NH-PEG-NHS
Fmoc-NH-PEG-O-C3H6-CONHS
Fmoc-NH-PEG-O-C3H6-COOH
Fmoc-NH-PEG-OH
FMOC-NH-PEG-OH-5000
Fmoc-NH-PEG-propionic acid
Fmoc-NH-PEG-SCM
FMOC-NH-PEG-SCM-2000
FMOC-NH-PEG-SCM-3400
FMOC-NH-PEG-SCM-5000
Fmoc-NH-PEG-Succinimidyl Carboxymethyl
Fmoc-NH-聚乙二醇胺基
FMOC-NH-聚乙二醇胺基*三氟乙酸盐
Fmoc-NH-聚乙二醇丙酸
Fmoc-NH-聚乙二醇琥珀酰亚胺
Fmoc-NH-聚乙二醇羟基
FMOC-NH-聚乙二醇羧基
GALA-NHS-35K
GALA-PEG-NHS
GALA-PEG-N-hydroxysuccinimide
GA-PEG-GA
GL2-400GS2
GL2-400MA
GL2-400NP
GL2-400PA
GL2-400TS
GLUC-NHS-35K
GLUC-PEG-NHS
GLUC-PEG-N-hydroxysuccinimide
Glutaric Acid-PEG-Glutaric Acid
H2N-PEG-NH-Boc
H2N-PEG-NHCO-C2H4-S-Trt
H2N-PEG-O-C3H6-COOH x HCl
HCl.NH2-PEG-Carboxymethyl
HCl.NH2-PEG-COOH
Heptaethylene Glycol
Hexaethylene Glycol
HGEO-200GS
HGEO-200NP
HO-020PA
HO-034PA
HO-050AL
HO-050PA
HO-100AL
HO-200AL
HO-300AL
HOOC-PEG-COOH
HOOC-PEG-Silane
HO-P-COOH-10K-1G
HO-P-COOH-20K-1G
HO-P-COOH-40K-1G
HO-P-COOH-5K-1G
HO-PEG-Acetaldehyde
HO-PEG-ALD
HO-PEG-Amino
HO-PEG-Carboxymethyl
HO-PEG-CM
HO-PEG-CM-3400
HO-PEG-COOH
HO-PEG-MAL
HO-PEG-MAL-3400
HO-PEG-MAL-5000
HO-PEG-Maleimide
HO-PEG-N3
HO-PEG-NH2
HO-PEG-NH2-1000
HO-PEG-NH2-3400
HO-PEG-NH2-35K
HO-PEG-NH2-5000
HO-PEG-NH-Boc
HO-PEG-NHCO-C2H4-CONH-NH-Boc
HO-PEG-NHCO-C2H4-COOH
HO-PEG-NHCO-C2H4-SH
HO-PEG-NHCO-C2H4-S-Trt
HO-PEG-NHCO-S-Trt
HO-PEG-OH
HO-PEG-SPA
HO-PEG-Succinimidyl propionate
HO-PEG-tBu-Propionate
HO-PEG-Tosylate
HO-P-MAL-10K-1G
HO-P-MAL-20K-1G
HO-P-MAL-5K-1G
HO-P-SPA-10K-1G
HO-P-SPA-20K-1G
HO-P-SPA-40K-1G
HO-P-SPA-5K-1G
HS-C2H4-CONH-PEG-O-C3H6-COOH
HS-PEG-Carboxyl
HS-PEG-NH2 x HCl
HS-PEG-NHCO-C2H4-CONH-NH-Boc
HS-PEG-SH
Hydrazide-PEG-Hydrazide
Hydroxyl-PEG-propylaldehyde
Hydroxyl-PEG-propylamine
Hydroxy-PEG-Amino
Hydroxy-PEG-Carboxyl
Hydroxy-PEG-Hydroxy
Hydroxy-PEG-Maleimide
Hydroxy-PEG-Succinimidyl propionate
Hydroxy-PEG-Tosylate
HZ-PEG-HZ
HZ-PEG-HZ-2000
HZ-PEG-HZ-3400
Isocyanate-PEG-Isocyanate
MA-050TS
MAc-PEG-MAc
M-ALD-20K
Maleimide-PEG-Amino
Maleimide-PEG-carbonate NHS
Maleimide-PEG-Carboxyl
Maleimide-PEG-Maleimide
Maleimide-PEG-NHS
Maleimide-PEG-N-hydroxysuccinimide
Maleimide-PEG-SCM
Maleimide-PEG-Silane
Maleimide-PEG-Succinimidyl Carbonate
Maleimide-PEG-Succinimidyl Carboxymethyl
Maleimide-PEG-Succinimidyl Valerate
Maleimide-PEG-SVA
Maleimidopropionyl-PEG NHS ester
Malhex-NH-PEG-NHCO-Biotin
Malhex-NH-PEG-O-C3H6-CONHS
Malhex-NH-PEG-O-C3H6-COOH
MAL-PEG-Amino
Mal-PEG-Biotin
MAL-PEG-Carboxyl
Mal-PEG-COOH
Mal-PEG-Mal
MAL-PEG-MAL-10K
MAL-PEG-MAL-2K
MAL-PEG-MAL-3400
MAL-PEG-MAL-5K
MAL-PEG-NH2
Mal-PEG-NHS
MAL-PEG-SC
MAL-PEG-SCM
MAL-PEG-SCM-10K
MAL-PEG-SCM-2000
MAL-PEG-SCM-3400
MAL-PEG-SCM-5000
MAL-PEG-Silane
Mal-PEG-SVA
MAL-PEG-SVA-3400
MAL-PEG-TS
ME-020AS
ME-020CS
ME-020MA
ME-020SH
ME-050AL
ME-050AS
ME-050CS
ME-050GS
ME-050HS
ME-050MA
ME-050SH
ME-100AL
ME-100SH
ME-120MA
ME-200AL
ME-200GS
ME-200HS
ME-200MA
ME-200SH
ME-300AL
ME-300GS
ME-300MA
ME-300SH
MENP-10T
MENP-20H
MENP-20T
MENP-30T
MENP-50H
MEPA-020H
MEPA-050H
MEPA-12T
MEPA-20T
MEPA-30T
Mesylate-PEG-Mesylate
Methacrylate-PEG-Methacrylate
Methoxyl Decaethylene Glycol
Methoxyl Dodecaethylene Glycol
Methoxyl Heptaethylene Glycol
Methoxyl Hexaethylene Glycol
Methoxyl Nonaethylene Glycol
Methoxyl Octaethylene Glycol
Methoxyl Pentaethylene Glycol
Methoxyl Undecaethlyene Glycol
Methoxy-PEG-Acetaldehyde
Methoxy-PEG-Acrylate
Methoxy-PEG-Alkyne
Methoxy-PEG-Amine
Methoxy-PEG-Amino
Methoxy-PEG-Azide
Methoxy-PEG-Azido
Methoxy-PEG-Biotin
Methoxy-PEG-b-Poly(methyl methacrylate)
Methoxy-PEG-b-Poly(ε-caprolactone)
Methoxy-PEG-b-Polyacrylonitrile
Methoxy-PEG-b-Polyisoprene
Methoxy-PEG-b-Polystyrene
Methoxy-PEG-Butyraldehyde
Methoxy-PEG-Carbonyl imidazole
Methoxy-PEG-Carboxyl
Methoxy-PEG-CH2NH2
Methoxy-PEG-Dansyl
Methoxy-PEG-Distearoylphosphatidylethanolamine
Methoxy-PEG-Epoxide
Methoxy-PEG-FITC
Methoxy-PEG-Fluorescent Dye
Methoxy-PEG-Hydrazide
Methoxy-PEG-hydroxyl
Methoxy-PEG-Isocyanate
Methoxy-PEG-Maleimide
Methoxy-PEG-Mesylate
Methoxy-PEG-mPEG-Succinimidyl Valerate
Methoxy-PEG-Nitrophenyl Carbonate
Methoxy-PEG-Orthopyridyl Disulfide
Methoxy-PEG-Poly(lactic acid)
Methoxy-PEG-PPMaleimide
Methoxy-PEG-Propionaldehyde
Methoxy-PEG-propionic acid
Methoxy-PEG-p-tolylsulfonyl
Methoxy-PEG-Rhodamine
Methoxy-PEG-Silane
Methoxy-PEG-Succinimidyl butanoate
Methoxy-PEG-Succinimidyl Carbonate
Methoxy-PEG-Succinimidyl Carboxymethyl
Methoxy-PEG-Succinimidyl Glutarate
Methoxy-PEG-Succinimidyl propionate
Methoxy-PEG-Succinimidyl Succinate
Methoxy-PEG-Succinimidyl succinate ester
Methoxy-PEG-Texas Red
Methoxy-PEG-Thiol
Methoxy-PEG-Thiol （Sulphydryl）
Methoxy-PEG-Tosylate
Methoxy-PEG-Vinylsulfone
Methoxy-poly(ethylene glycol)-block-poly(L-aspartic acid sodium salt)
Methoxy-poly(ethylene glycol)-block-poly(L-glutamic acid sodium salt)
Methoxy-poly(ethylene glycol)-block-poly(L-lysine hydrochloride)
Methoxy-poly(ethylene glycol)-block-poly(L-lysine trifluoroacetate)
M-MAL-20K
M-NH2-20K
MP-ALD-10K-5G
MP-ALD-20K-5G
MP-ALD-5K-5G
MP-B-PAN-10K-1G
MP-B-PAN-20K-1G
MP-B-PAN-5K-1G
MP-B-PCL-10K-1G
MP-B-PCL-20K-1G
MP-B-PCL-5K-1G
MP-B-PI-10K-1G
MP-B-PI-20K-1G
MP-B-PMMA-10K-1G
MP-B-PMMA-20K-1G
MP-B-PMMA-5K-1G
MP-B-PS-10K-1G
MP-B-PS-15K-1G
MP-B-PS-20K-1G
mPEG acid
mPEG disulfide
mPEG thiol
mPEG-(CH2)5COO-NHS
mPEG1000-b-PLD10
mPEG1000-b-PLD100
mPEG1000-b-PLD50
mPEG1000-b-PLE10
mPEG1000-b-PLE100
mPEG1000-b-PLE200
mPEG1000-b-PLE50
mPEG1000-b-PLKC10
mPEG1000-b-PLKC100
mPEG1000-b-PLKC200
mPEG1000-b-PLKC50
mPEG1000-b-PLKF10
mPEG1000-b-PLKF100
mPEG1000-b-PLKF200
mPEG1000-b-PLKF50
mPEG-11
mPEG20000-b-PLD10
mPEG20000-b-PLD100
mPEG20000-b-PLD50
mPEG20000-b-PLE10
mPEG20000-b-PLE100
mPEG20000-b-PLE200
mPEG20000-b-PLE50
mPEG20000-b-PLKC10
mPEG20000-b-PLKC100
mPEG20000-b-PLKC200
mPEG20000-b-PLKC50
mPEG20000-b-PLKF10
mPEG20000-b-PLKF100
mPEG20000-b-PLKF200
mPEG20000-b-PLKF50
mPEG2-ALD
mPEG2-NHS
mPEG5000-b-PLD10
mPEG5000-b-PLD100
mPEG5000-b-PLD50
mPEG5000-b-PLE10
mPEG5000-b-PLE100
mPEG5000-b-PLE200
mPEG5000-b-PLE50
mPEG5000-b-PLKC10
mPEG5000-b-PLKC100
mPEG5000-b-PLKC200
mPEG5000-b-PLKC50
mPEG5000-b-PLKF10
mPEG5000-b-PLKF100
mPEG5000-b-PLKF200
mPEG5000-b-PLKF50
mPEG-7
mPEG-AC
mPEG-Acetaldehyde
mPEG-Acetylene
mPEG-acid (x=COOH,n=11))
mPEG-Acr
MPEG-ACRL-10K
MPEG-ACRL-5000
mPEG-Acrylate
mPEG-ALC
mPEG-ALD
MPEG-ALD-20K
MPEG-ALD-30K
MPEG-ALD-5000
mPEG-Alkyne
mPEG-Amine
mPEG-Amino
mPEG-Azide
mPEG-Azido
mPEG-bALD
MPEG-bALD-20K
MPEG-bALD-30K
MPEG-bALD-5K
mPEG-Biotin
MPEG-Biotin-2000
MPEG-Biotin-20K
MPEG-Biotin-5000
mPEG-b-PAN
mPEG-b-PCL
mPEG-b-PI
mPEG-b-PLD
mPEG-b-PLE
mPEG-b-PLKC
mPEG-b-PLKF
mPEG-b-PMMA
mPEG-b-Poly(methyl methacrylate)
mPEG-b-Poly(ε-caprolactone)
mPEG-b-Polyacrylonitrile
mPEG-b-Polyisoprene
mPEG-b-Polystyrene
mPEG-b-PS
mPEG-Br
mPEG-BTC
mPEG-butyrALD
mPEG-Butyraldehyde
mPEG-Carbonyl imidazole
mPEG-Carboxyl (x=COOH,n=11))
mPEG-Carboxymethyl
mPEG-carboxymethyl-NHS
mPEG-carboxypentyl-NHS
mPEG-CDI
mPEG-CH2COO-NHS
mPEG-CH2NH2
mPEG-CM
MPEG-CM-10K
MPEG-CM-2000
MPEG-CM-20K
MPEG-CM-5000
mPEG-COCH2CH2 CH2COO-NHS
mPEG-COCH2CH2COO-NHS
mPEG-CONHNH2
mPEG-COOH
mPEG-Dansyl
mPEG-Distearoylphosphatidylethanolamine
mPEG-disulfide
mPEG-DSPE
MPEG-DSPE-5000
mPEG-EP
mPEG-Epoxide
mPEG-FITC
mPEG-Fluorescent Dye
mPEG-glutaryl-NHS
mPEG-Hydrazide
mPEG-Hydroxy
MPEG-HZ-10K
MPEG-HZ-2000
MPEG-HZ-20K
MPEG-HZ-5000
mPEG-iodoacetamide
mPEG-Isocyanate
mPEG-MAc
mPEG-MAL
MPEG-MAL-10K
mPEG-MAL-2000
MPEG-MAL-20K
MPEG-MAL-30K
MPEG-MAL-5000
mPEG-Maleimide
mPEG-Mesylate
mPEG-mPEG-Succinimidyl Valerate
mPEG-Ms
mPEG-N3
mPEG-NCO
mPEG-NH2
MPEG-NH2-1000
MPEG-NH2-10K
MPEG-NH2-2000
MPEG-NH2-20K
MPEG-NH2-30K
MPEG-NH2-5000
MPEG-NH2-550
mPEG-NH2-BALD
mPEG-NH2-PALD
mPEG-NHNH2
mPEG-NHS
mPEG-Nitrophenyl Carbonate
mPEG-nitrophenylcarbonate
mPEG-NPC
mPEG-NPC-1000
mPEG-NPC-10K
mPEG-NPC-2000
mPEG-NPC-20K
MPEG-NPC-5000
mPEG-OCOOPhNO2
mPEG-OH
mPEG-OPSS
MPEG-OPSS-10K
MPEG-OPSS-2000
MPEG-OPSS-5000
mPEG-Orthopyridyl Disulfide
MPEG-OTS
mPEG-PA
mPEG-PALD
mPEG-PAN
mPEG-PCL
mPEG-PI
mPEG-PLA
MPEG-PLA-5000
mPEG-PMMA
mPEG-Poly(lactic acid)
mPEG-PPMAL
mPEG-PPMaleimide
mPEG-Propionaldehyde
mPEG-propionic acid
mPEG-propylaldehyde
mPEG-propylamine
mPEG-PS
MPEG-p-tolylsulfonyl
mPEG-Rhodamine
mPEG-S
mPEG-S2
mPEG-SBA
mPEG-SC
mPEG-SCM
MPEG-SCM-10K
MPEG-SCM-20K
mPEG-SCM-2K
MPEG-SCM-5000
mPEG-SG
MPEG-SG-10K
MPEG-SG-2000
MPEG-SG-20K
MPEG-SG-5000
MPEG-SG-50K
mPEG-SH
MPEG-SH-1000
MPEG-SH-10K
MPEG-SH-2000
MPEG-SH-20K
MPEG-SH-5000
MPEG-SIL-1000
MPEG-SIL-2000
MPEG-SIL-5000
mPEG-Silane
mPEG-SPA
MPEG-SPA-550-1g
mPEG-SS
MPEG-SS-20K
MPEG-SS-30K
MPEG-SS-5000
mPEG-Succinic acid
mPEG-Succinimidyl butanoate
mPEG-Succinimidyl Carbonate
mPEG-Succinimidyl Carboxymethyl
mPEG-Succinimidyl Glutarate
mPEG-Succinimidyl propionate
mPEG-Succinimidyl Succinate
mPEG-Succinimidyl succinate ester
mPEG-succinyl-NHS
mPEG-SVA
MPEG-SVA-10K
MPEG-SVA-2000
MPEG-SVA-20K
MPEG-SVA-30K
MPEG-SVA-5000
mPEG-Texas Red
mPEG-thiol
mPEG-Thiol （Sulphydryl）
mPEG-Thiol (x=SH,n=6)
mPEG-TOSYL
MPEG-TOSYL-30K
mPEG-Tosylate
mPEG-Ts
mPEG-urethane-BALD
mPEG-urethane-PALD
mPEG-Vinylsulfone
mPEG-VS
MP-MAL-10K-5G
MP-MAL-20K-5G
MP-MAL-5K-5G
MP-NH2-10K-5G
MP-NH2-5K-5G
MP-SBA-10K-5G
MP-SBA-20K-5G
MP-SBA-5K-5G
MP-SC-10K-5G
MP-SC-20K-5G
MP-SC-40K-5G
MP-SC-5K-5G
MP-SPA-10K-5G
MP-SPA-20K-5G
MP-SPA-5K-5G
MP-SS-10K-5G
MP-SS-20K-5G
MP-SS-40K-5G
MP-SS-5K-5G
M-SC-20K
M-SCM-20K
M-SCM-30K
M-SCM-35K
M-SH-20K
Ms-PEG-Ms
Multi-branched PEG
M-VS-20K
N3-PEG-amine
N3-PEG-Biotin
N3-PEG-Carboxyl
N3-PEG-COOH
N3-PEG-Diglycolic Acid
N3-PEG-hydroxyl
N3-PEG-N3
N3-PEG-NH2
N3-PEG-NHS
N3-PEG-OH
NCO-PEG-NCO
NH2HCL-P-COOH-10K-1G
NH2HCL-P-COOH-20K-1G
NH2HCL-P-COOH-5K-1G
NH2NH-PEG-NHNH2
NH2-PEG-Azido
NH2-PEG-Boc-NH
NH2-PEG-CM
NH2-PEG-CM-1000
NH2-PEG-CM-10K
NH2-PEG-CM-2000
NH2-PEG-CM-3400
NH2-PEG-CM-5000
NH2-PEG-COOH
NH2-PEG-N3
NH2-PEG-NH2
NH2-PEG-NH2-10K
NH2-PEG-NH2-1K
NH2-PEG-NH2-20K
NH2-PEG-NH2-2K
NH2-PEG-NH2-3400
NH2-PEG-NH2-35K
NH2-PEG-NH2-5K
NH2-PEG-OH
NH2-PEG-SH
NH2-PEG-SH-1K
NH2-PEG-SH-20K
NH2-PEG-SH-5K
NH2-PEG-Silane
NH2-PEG-S-Trt
NH2-PEG-VA
NH2-PEG-VA-3400
NH2-PEG-VA-5K
NH2-PEG-Valeric Acid
NHS-PEG-disulfide
NHS-PEG-NHS
NHS-PEG-S2
N-hydroxysuccinimide-PEG-N-hydroxysuccinimide
Nitrophenyl Carbonate -PEG-Nitrophenyl Carbonate
Nitrophenyl Carbonate-PEG-Nitrophenyl Carbonate
Nonaethylene Glycol
NPC-PEG-NPC
NPC-PEG-NPC-2000
NPC-PEG-NPC-3400
N-羟基琥珀酰亚胺聚乙二醇二硫
N-羟基琥珀酰亚胺酯-聚乙二醇-N-羟基琥珀酰亚胺酯
Octacosaethylene Glycol
Octaethylene Glycol
OPPS-PEG-OPSS
OPSS-PEG-Carboxyl
OPSS-PEG-CM-5000
OPSS-PEG-COOH
OPSS-PEG-NHS
OPSS-PEG-N-hydroxysuccinimide
OPSS-PEG-OPSS
OPSS-PEG-OPSS-10K
OPSS-PEG-OPSS-2000
OPSS-PEG-OPSS-3400
OPSS-PEG-SC
OPSS-PEG-SCM
OPSS-PEG-SCM-3400
OPSS-PEG-Succinimidyl Carbonate
OPSS-PEG-Succinimidyl Carboxymethyl
OPSS-PEG–Succinimidyl Carboxymethyl
OPSS-PEG-Succinimidyl Valerate
OPSS-PEG-SVA
OPSS-PEG-SVA-2000
OPSS-PEG-SVA-3400
OPSS-PEG-SVA-5000
Orthopyridyl Disulfide-PEG-Carboxyl
Orthopyridyl Disulfide-PEG-N-hydroxysuccinimide
Orthopyridyl Disulfide-PEG-Orthopyridyl Disulfide
Orthopyridyl Disulfide-PEG-Succinimidyl Carbonate
Orthopyridyl Disulfide-PEG-Succinimidyl Carboxymethyl
Orthopyridyl Disulfide-PEG-Succinimidyl Valerate
PEG8A-AM-10k
PEG8A-AM-20k
PEG8A-AM-40k
PEG8A-C-10k
PEG8A-C-20k
PEG8A-C-40k
PEG8A-N-10k
PEG8A-N-20k
PEG8A-N-40k
PEG-Diamine
PEG-dibenzoate
PEG-dicarboxymethyl NHS
PEG-dicarboxypentylNHS
PEG-diglutarateNHS
PEG-dimaleimide
PEG-dimethyl ether
PEG-dipropylamine
PEG-dithiol
PEG-octaglutaryl NHS
PEG-octanitrophenylcarbonate
Peg-S01
PEG-SET-NHS
PEG-sorbitan tetraoleate
PEG-sorbitol hexaoleate
PEG-tetracarboxypentyl NHS
PEG-tetraglutaryl NHS
PEG-tetramaleimide
PEG-tetranitrophenylcarbonate
PEG-tetrapropylamine
PEG-tetrathiol
RB-PEG-NH2
Rhodamine B-PEG-Amine
Rhodamine-PEG-NH2
SA-PEG-SA
SCM-PEG-SCM
SCM-PEG-SCM-3400
SC-PEG-CM
SC-PEG-CM(methyl ester)
SC-PEG-CMme-3400
SC-PEG-COOH
SG-PEG-SG
SG-PEG-SG-10K
SG-PEG-SG-2000
SG-PEG-SG-3400
SG-PEG-SG-5K
SH-PEG-Biotin
SH-PEG-COOH
SH-PEG-IDA
SH-PEG-NH2
SH-PEG-OH
SH-PEG-SH
SH-PEG-SH（Sulphydryl）
SH-PEG-SH-10K
SH-PEG-SH-3400
SH-PEG-SH-5K
SH-PEG-Silane
Silane-PEG-Amine
Silane-PEG-NH2
Silane-PEG-Silane
SIL-PEG-SIL-3400
SS-PEG-SS
SS-PEG-SS-2000
SS-PEG-SS-3400
Succinic Acid-PEG-Succinic Acid
Succinimidyl Carbonate-PEG-Carboxyl
Succinimidyl Carbonate-PEG-COOH
Succinimidyl Carboxymethyl-PEG-Succinimidyl Carboxymethyl
Succinimidyl Glutarate-PEG-Succinimidyl Glutarate
Succinimidyl Succinate-PEG-Succinimidyl Succinate
Sulphydryl-PEG-Biotin
Sulphydryl-PEG-COOH
Sulphydryl-PEG-Silane
Thiol-PEG-acid X=SH,Y=COOH,n=7
Thiol-PEG-Amine （Sulphydryl）
Thiol-PEG-Biotin
Thiol-PEG-Carboxyl
Thiol-PEG-Carboxyl （Sulphydryl）
Thiol-PEG-Carboxyl X=SH,Y=COOH,n=7
Thiol-PEG-Hydroxy
Thiol-PEG-OH
Thiol-PEG-Silane （Sulphydryl）
Thiol-PEG-Thiol
Thiol-PEG-Thiol （Sulphydryl）
Tosylate-PEG-Tosylate
TOSYL-PEG-TOSYL
TOSYL-PEG-TOSYL-35K
Trt-S-C2H4-CONH-PEG-O-C3H6-CONHS
Ts-PEG-Ts
Valeric Acid-PEG-Valeric Acid
VA-PEG-VA
VA-PEG-VA-20K
VA-PEG-VA-5000
VA-PEG-Valeric Acid
Y-2-NHS-40K
Y-ALD-40K
Y-H-MAL-40K
Y-MAL-40K
Y-NHS-40K
Y-O-NHS-40K
Y-P-MAL-40K
Y型聚乙二醇NHS酯
Y型聚乙二醇-N-羟基琥珀酰亚胺
Y型聚乙二醇氨基
Y型聚乙二醇琥珀酰亚胺戊二酸酯
Y型聚乙二醇赖氨酸-NS
Y型聚乙二醇马来酰亚胺
Y型聚乙二醇乙醛
氨基聚乙二醇叠氮钠
胺基聚乙二醇-Boc-胺基
胺基聚乙二醇胺基
胺基聚乙二醇硅烷
胺基聚乙二醇硫醇
胺基聚乙二醇羧基
胺基聚乙二醇戊酸
八聚乙二醇
半乳糖聚乙二醇NHS酯
半乳糖聚乙二醇-N-羟基琥珀酰亚胺
丙烯酸酯聚乙二醇丙烯酸酯
丙烯酸酯聚乙二醇琥珀酰亚胺
丙烯酸酯聚乙二醇琥珀酰亚胺戊酸酯
丙烯酸酯聚乙二醇马来酰亚胺
单甲氧基八聚乙二醇
单甲氧基九聚乙二醇
单甲氧基聚乙二醇-N-羟基琥珀酰亚胺
单甲氧基聚乙二醇PP马来酰亚胺
单甲氧基聚乙二醇Texas Red荧光染料
单甲氧基聚乙二醇氨甲基
单甲氧基聚乙二醇胺基
单甲氧基聚乙二醇丙醛
单甲氧基聚乙二醇丙酸
单甲氧基聚乙二醇丙烯酸酯
单甲氧基聚乙二醇丹磺酰
单甲氧基聚乙二醇叠氮
单甲氧基聚乙二醇叠氮钠
单甲氧基聚乙二醇丁醛
单甲氧基聚乙二醇对甲苯磺酸
单甲氧基聚乙二醇对甲苯磺酰基
单甲氧基聚乙二醇对硝基苯酚碳酸酯
单甲氧基聚乙二醇二硫
单甲氧基聚乙二醇二硫化正吡啶
单甲氧基聚乙二醇二硬脂酰甘油磷脂乙醇胺
单甲氧基聚乙二醇硅烷
单甲氧基聚乙二醇琥珀酰亚胺
单甲氧基聚乙二醇琥珀酰亚胺丙酸酸酯
单甲氧基聚乙二醇琥珀酰亚胺丁二酸酯
单甲氧基聚乙二醇琥珀酰亚胺丁酸酯
单甲氧基聚乙二醇琥珀酰亚胺琥珀酸酯
单甲氧基聚乙二醇琥珀酰亚胺碳酸酯
单甲氧基聚乙二醇琥珀酰亚胺戊二酸酯
单甲氧基聚乙二醇琥珀酰亚胺戊酸酯
单甲氧基聚乙二醇琥珀酰酯酸
单甲氧基聚乙二醇环氧丙烷
单甲氧基聚乙二醇甲磺酸
单甲氧基聚乙二醇硫醇
单甲氧基聚乙二醇罗丹明
单甲氧基聚乙二醇马来酰亚胺
单甲氧基聚乙二醇嵌段共聚L-谷氨酸钠
单甲氧基聚乙二醇嵌段共聚L－赖氨酸三氟乙酸
单甲氧基聚乙二醇嵌段共聚L－赖氨酸盐酸盐
单甲氧基聚乙二醇嵌段共聚L-天冬氨酸钠
单甲氧基聚乙二醇羟基
单甲氧基聚乙二醇巯基 (硫醇)
单甲氧基聚乙二醇生物素
单甲氧基聚乙二醇羧基
单甲氧基聚乙二醇羰基咪唑
单甲氧基聚乙二醇酰肼
单甲氧基聚乙二醇硝苯基碳酸盐
单甲氧基聚乙二醇溴
单甲氧基聚乙二醇乙醛
单甲氧基聚乙二醇乙炔
单甲氧基聚乙二醇乙烯砜
单甲氧基聚乙二醇异氰酸酯
单甲氧基聚乙二醇荧光FITC
单甲氧基聚乙二醇荧光染料
单甲氧基六聚乙二醇
单甲氧基七聚乙二醇
单甲氧基十二聚乙二醇
单甲氧基十聚乙二醇
单甲氧基十一聚乙二醇
单甲氧基戊聚乙二醇
叠氮化聚乙二醇-N-羟基琥珀酰亚胺酯
叠氮化聚乙二醇胺基
叠氮化聚乙二醇羟基
叠氮化聚乙二醇生物素
叠氮化聚乙二醇羧基
叠氮聚乙二醇叠氮
丁二酸聚乙二醇丁二酸
丁醛聚乙二醇丁醛
对甲苯磺酸聚乙二醇对甲苯磺酸
多缩丙三醇二硬脂酰甘油磷脂乙醇胺
二硫化正吡啶聚乙二醇N-羟基琥珀酰亚胺酯
二硫化正吡啶聚乙二醇二硫化正吡啶
二十八聚乙二醇
二硬脂酰甘油磷脂乙醇胺聚乙二醇-N-羟基琥珀酰亚胺
二硬脂酰甘油磷脂乙醇胺聚乙二醇氨基
二硬脂酰甘油磷脂乙醇胺聚乙二醇琥珀酰亚胺
二硬脂酰甘油磷脂乙醇胺聚乙二醇马来酰亚胺
二硬脂酰甘油磷脂乙醇胺聚乙二醇生物素
二硬脂酰甘油磷脂乙醇二硫化正吡啶
二硬脂酰甘油磷脂乙醇羧基
硅烷聚乙二醇胺基
硅烷聚乙二醇硅烷
琥珀酰亚胺丁二酸酯聚乙二醇琥珀酰亚胺丁二酸酯
琥珀酰亚胺聚乙二醇琥珀酰亚胺
琥珀酰亚胺碳酸酯聚乙二醇羧基
琥珀酰亚胺碳酸酯聚乙二醇羧基(甲酯)
琥珀酰亚胺戊二酸酯聚乙二醇琥珀酰亚胺戊二酸酯
环氧丙烷聚乙二醇环氧丙烷
甲磺酸聚乙二醇甲磺酸
甲基丙烯酸聚乙二醇甲基丙烯酸
甲氧基聚乙二醇丙醛
甲氧基聚乙二醇马来酰亚胺
甲氧基聚乙二醇巯酯
甲氧基聚乙二醇碳酸酯
甲氧基聚乙二醇乙酸酯
九聚乙二醇
聚L-谷氨酸钠
聚L－赖氨酸三氟乙酸
聚L－赖氨酸盐酸盐
聚L-天冬氨酸钠
聚乳酸-聚乙二醇单甲醚共聚物
聚乙二醇单月桂酸酯
聚乙二醇二苯甲酸酯
聚乙二醇二甲醚
聚乙二醇和聚ε-己内酯的嵌段共聚物
聚乙二醇和聚苯乙烯的嵌段共聚物
聚乙二醇和聚丙烯腈的嵌段共聚物
聚乙二醇和聚甲基丙烯酸甲酯的嵌段共聚物
聚乙二醇和聚异戊二烯的嵌段共聚物
聚乙二醇失水山梨醇六油酸酯
聚乙二醇失水山梨醇四油酸酯
硫醇聚乙二醇硫醇
硫醇聚乙二醇羧基
六聚乙二醇
罗丹明B聚乙二醇氨基
马来酰亚胺聚乙二醇-N-羟基琥珀酰亚胺
马来酰亚胺聚乙二醇胺基
马来酰亚胺聚乙二醇硅烷
马来酰亚胺聚乙二醇琥珀酰亚胺
马来酰亚胺聚乙二醇琥珀酰亚胺碳酸酯
马来酰亚胺聚乙二醇琥珀酰亚胺戊酸酯
马来酰亚胺聚乙二醇马来酰亚胺
马来酰亚胺聚乙二醇羧基
葡萄糖聚乙二醇NHS酯
葡萄糖聚乙二醇-N-羟基琥珀酰亚胺
七聚乙二醇
羟基聚乙二醇-tBu-Propionate
羟基聚乙二醇胺基
羟基聚乙二醇对甲苯磺酸
羟基聚乙二醇马来酰亚胺
羟基聚乙二醇羟基
羟基聚乙二醇羧基
羟基聚乙二醇乙醛
巯基聚乙二醇胺基 (硫醇)
巯基聚乙二醇硅烷 (硫醇)
巯基聚乙二醇羟基 (硫醇)
巯基聚乙二醇巯基 (硫醇)
巯基聚乙二醇生物素
巯基聚乙二醇羧基 (硫醇)
生物素聚乙二醇-N-羟基琥珀酰亚胺酯
生物素聚乙二醇胺基
生物素聚乙二醇二硫
生物素聚乙二醇硅烷
生物素聚乙二醇琥珀酰亚胺
生物素聚乙二醇琥珀酰亚胺碳酸酯
生物素聚乙二醇琥珀酰亚胺戊酸酯
生物素聚乙二醇马来酰亚胺
生物素聚乙二醇生物素
生物素聚乙二醇羧基
生物素聚乙二醇荧光素
十二聚乙二醇
十聚乙二醇
梳狀聚乙二醇二硬脂酰甘油磷脂乙醇胺
羧基聚乙二醇Fmoc-胺基
羧基聚乙二醇二硫
羧基聚乙二醇硅烷
羧基聚乙二醇琥珀酰亚胺
羧基聚乙二醇硫醇
羧基聚乙二醇羧基
羧基戊基琥珀酰亚胺聚乙二醇羧基戊基琥珀酰亚胺
羰基咪唑聚乙二醇羰基咪唑
戊二酸聚乙二醇戊二酸
戊聚乙二醇
戊酸聚乙二醇戊酸
酰肼聚乙二醇酰肼
硝苯基碳酸盐聚乙二醇硝苯基碳酸盐
溴聚乙二醇溴
乙醛聚乙二醇乙醛
乙酸聚乙二醇乙酸
异氰酸酯聚乙二醇异氰酸酯
荧光素聚乙二醇N-羟基琥珀酰亚胺酯
荧光素聚乙二醇氨基
荧光素聚乙二醇琥珀酰亚胺
荧光素聚乙二醇琥珀酰亚胺戊酸酯
荧光素聚乙二醇马来酰亚胺
荧光素聚乙二醇羧基
正吡啶二硫化聚乙二醇-N-羟基琥珀酰亚胺
正吡啶二硫化聚乙二醇琥珀酰亚胺
正吡啶二硫化聚乙二醇琥珀酰亚胺碳酸酯
正吡啶二硫化聚乙二醇琥珀酰亚胺戊酸酯
正吡啶二硫化聚乙二醇羧基
Bio-rad品牌代理商
Bio-rad品牌代理商–上海金畔
1. Bio-rad品牌介绍
美国伯乐BIO-RAD公司公司总部设在美国加里福尼亚州的Hercules，在全球有30多家全资子公司，服务于全球超过85,000家科研院所，生物技术和制药公司，和临床实验室。
BIO-RAD公司自1952年成立以来，在50多年中为临床诊断和生命科学研究市场提供了广泛的新型产品和服务，始终居于科学发现的中心地位。 BIO-RAD公司 现今利用多种技术制造并
生产了几千种产品，这些技术包括蛋白质组学、生物信息学、电泳、成像、免疫测定、层析、微生物学和基因转移。根据产品的不同，BIO-RAD公司公司下设三大部门，它们是生命科学部，临
床诊断部和工业材料部，产品种类达6000余种。BIO-RAD公司主要产品有蛋白组研究产品、层析仪与填料、蛋白质和核酸电泳产品、基因枪与电穿孔仪、定量基因扩增仪、图像分析系统、激光
共聚焦扫描显微镜、酶标仪和洗板机系列、食品检测仪器与试剂、糖化血红蛋白检测系列产品、质控系统、毒物检测产品、血液病毒检测产品等。
2. Bio-rad重点产品
生命科学试剂
临床诊断试剂
3. Bio-rad官网
www.bio-rad.com
4. 金畔生物代理Bio-rad品牌联系方式
上海金畔生物科技有限公司
地 址： 上海市浦东新区东靖路699弄36栋701室
邮 编： 201208
qq: 2743691513
固话总机：021-50837765
订货热线：15221999938
网 址： www.jinpanbio.com
Email：sales@jinpanbio.com
ChromaDex品牌代理商–上海金畔
ChromaDex品牌代理商–上海金畔
1. ChromaDex品牌介绍
Chromadex 公司于1999年在加拿大成立，主要生产植物化学/中草药对照品以及标准材料，是植物参考标准的创造以及植物化学物质的产品和服务的市场领导者， ChromaDex公司提供
多达3000种产品和试剂盒，满足了自然产品的参考标准品、材料、业务的需求。现在是仍然通过严谨的科学以顾客为中心发展参考标准品和业务。
Chromadex是一个生产天然产品的创新性的公司，提供专有的、科学性的溶剂和配料，它们可用于食品强化剂、食品和饮料、化妆品和制药行业。特别是，Chromadex 公司研发和销售植
物化学和植物学的参考标准品和材料。生产和销售新颖的和天然的对人类健康有积极影响的产品。凭着公司的专业的服务和严谨的科学给市场带去安全与高品质。为了满足市场对天然产品的
标准品、材料和服务不断增长的需求，Chromadex 公司在1999年应运而生。随着各种消费类产品的出现，越来越多的消费者和政府机构要求有质量保证的研究方法，
如今Chromadex公司采取以科学严谨性为支撑的消费者为中心的方式，在参考标准品这服务性行业中处于领先地位。它在市面上的专业技术赋予它独特的基础，使它可以结合科学健康的自
然力量去开发和销售天然和新颖的配料。
2. ChromaDex重点产品
植物化学/中草药对照品
3. ChromaDex官网
http://https://chromadex.com/default.aspx
4. 金畔生物代理ChromaDex品牌联系方式
上海金畔生物科技有限公司
更多产品，更多优惠，请联系我们！
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电泳缓冲液
电泳缓冲液
概述
电泳缓冲液是指在进行分子电泳时所使用的缓冲溶液，用以稳定体系酸碱度。常见的核酸电泳缓冲液有：TAE、TBE、TPE和MOPS等。
作用
缓冲液在电泳过程中的一个作用是维持合适的pH。电泳时正极与负极都会发生电解反应，正极发生的是氧化反应（4OH–4e->2H2O+O2)，负极发生的是还原反应（4H++4e->2H2)，长时间的电泳将使正极变酸，负极变碱。一个好的缓冲系统应有较强的缓冲能力，使溶液两极的pH保持基本不变。
电泳缓冲液的另一个作用是使溶液具有一定的导电性，以利于DNA分子的迁移，例如，一般电泳缓冲液中应含有0.01-0.04mol/L的Na+离子，Na+离子的浓度太低时电泳速度变慢；太高时就会造成过大的电流使胶发热甚至熔化。
电泳缓冲液还有一个组分是EDTA，加入浓度为1-2mmol/L，目的是螯合Mg2+ 等离子，防止电泳时激活 DNA酶，此外还可防止Mg2+离子与核酸生成沉淀。
特点
TAE是使用最广泛的缓冲系统。其特点是超螺旋在其中电泳时更符合实际相对分子质量（TBE中电泳时测出的相对分子质量会大于实际分子质量），且双链线状DNA在其中的迁移率较其他两种缓冲液快约10%，电泳大于13kb的片段时用TAE缓冲液将取得更好的分离效果，此外，回收DNA片段时也易用TAE缓冲系统进行电泳。TAE的缺点是缓冲容量小，长时间电泳（如过夜）不可选用，除非有循环装置使两极的缓冲液得到交换。
TBE的特点是缓冲能力强，长时间电泳时可选用TBE，并且当用于电泳小于1kb的片段时分离效果更好。TBE用于琼脂糖凝胶时易造成高电渗作用，并且因与琼脂糖相互作用生成非共价结合的四羟基硼酸盐复合物而使DNA片段的回收率降低，所以不宜在回收电泳中使用。
TPE的缓冲能力也较强，但由于磷酸盐易在乙醇沉淀过程中析出，所以也不宜在回收DNA片段的电泳中使用。
配制方法
50×TAE Buffer 配制方法：
1。称量氨基丁三醇 242g，Na2EDTA.2H2O 37.2g 于1L烧杯中；
2。向烧杯中加入约800ml去离子水，充分搅拌均匀；
3。加入57.1ml的冰乙酸，充分溶解；
4。用NaOH调pH至8.3，加去离子水定容至1L后，室温保存。
使用时稀释50倍 即1×TAE Buffer
10×TBE Buffer配制方法：
1。称量氨基丁三醇 108g，Na2EDTA.2H2O 7.44g，硼酸55g 于1L烧杯中；
2。加入约800ml去离子水，搅拌均匀；
3。用NaOH调pH至8.3，加去离子水定容至1L后，室温保存。
使用时稀释10倍 即1×TBE Buffer
10×TBE缓冲液
保存于运输说明：
RT
详细信息：
10×TBE缓冲液
10×TBE缓冲液
货号 规格 价格
M9031 500 ml 180
应用
核酸分子琼脂糖凝胶和聚丙烯酰胺凝胶电泳。
同时作为电泳缓冲液和凝胶制备缓冲液。
用于小于1500 bp RNA和DNA电泳分离。
不宜在回收电泳中使用。
注意事项
凝胶制备和电泳使用新鲜0.5×TBE缓冲液。
0.5×TBE缓冲液配制：50 ml 50×TBE与950 ml去离子水充分混匀。
双链线性核酸分子在TBE缓冲液中的迁移速度要比TAE中慢10%。
注：电泳缓冲液一般以储存液形式配制，浓度为n10×，工作时稀释n10倍，浓度为1×，而TBE储存液存放时间过长容易出现沉淀，影响电泳结果，因此配制成10×，工作浓度为
0.5×。为保持电泳所需的离子强度和pH，应经常更换电泳缓冲液。
DNA片段的连接技术
实验十三 DNA片段的连接技术
一、目的与原理
DNA酶切片段的联接是两DNA片段相邻的5‘磷酸和3’羟基间可有连接酶催化形成磷酸二酯键，这个连接反应在体外一般都有大肠杆菌(Escherichia coli)(Escherichia coli)(Escherichia coli)(Escherichia coli)DNA连接酶和T4DNA连接酶催化，但是分子生物学试验中主要采用T4DNA连接酶，因该酶在正常条件下，即能完成连接反应。本实验拟通过T4DNA连接酶对酶切片断的连接操作，掌握这一DNA片段的连接技术。
二、材料和方法
1． 仪器
离心机，恒温设备，真空干燥机，取液器
2． 试剂
T4DNA连接酶，10×T4DNA连接酶缓冲液、200mM Tris-HCl(pH7.6)、50mM MgCl2、50mM DTT、500μg/ml牛血清白蛋白、5mM ATP、λDNA、酚，TE缓冲液，电泳缓冲液、3M NaAc
三、操作步骤
取干净、灭菌新Eppendorf管，按下表加入各试液
试液 体积（μl）
T4DNA连接酶缓冲液 1.5
λDNA 10
ATP 1
无菌水 1.5
连接酶 1
总体积 15
19–20℃ 保温2小时，提取已连接好的DNA片段。电泳分析。
四、结果 （略）
五、注意事项
1、 该实验用的T4DNA连接酶最适反应是37℃，但该温度下DNA退火效率低，连接效率还不如22℃高。
2、 如果要检验连接酶和连接酶专用的缓冲液是否有效，可重新连接酶切后的λDNA。若连接成功，则说明有效。
实验十四 受体菌感受态细胞的制备
一、目的与原理
当细菌处于容易吸收外源DNA的状态时，即为感受态，而用理化手段使细菌处于感受态的操作为致敏过程。感受态细胞制备是重组基因能否实现转化的一个重要的技术环节。本试验是通过钙离子来诱导使之成为感受态细胞。
二、材料和方法
1． 材料：大肠杆菌(Escherichia coli)(Escherichia coli)(Escherichia coli)(Escherichia coli)
2． 仪器：
离心机，恒温摇床，恒温水浴，超净工作台，冰柜
3． 试剂
LB培养基，0.1M MgCl2，3mM氯化六氮合高钴
TFB：10Mm MES（pH6.3）
45Mm MnCl2
10Mm CaCl2
10Mm KCl
三、操作步骤
大肠杆菌(Escherichia coli)(Escherichia coli)(Escherichia coli)(Escherichia coli)在LB培养基平板上划线培养12-16小时，挑取单菌落于LB培养基摇瓶培养大肠杆菌(Escherichia coli)(Escherichia coli)(Escherichia coli)(Escherichia coli)到对数期。取1ml培养物7000rpm，离心3min，收集菌体。再重复一次。冰浴放置。用预冷的氯化镁悬浮菌体7000rpm离心3min。收集菌体，冰浴放置。用预冷的氯化钙悬浮菌体，冰浴15min, 7000rpm离心3min。收集菌体，冰浴放置。加入200μl预冷的氯化钙（或TFB），放置于冰浴，即得感受态细胞，此细胞可现用，也可进行下步操作。将悬液分装于无菌离心管中，投入液氮，然后储于-70℃保存。
四、结果 （略）
五、注意事项
一般地，新制备的感受态细胞48h后转化效率降低，15d后失效。因此，感受态细胞不能保存太久，4℃保存一周，但-80℃可保存1年。用试管分装可避免反复冻熔，损伤感受态细胞。
实验十五 重组片段的转化及克隆和筛选
一、目的与原理
转化是指以质粒DNA或以它为载体构建的重组子导入细菌的过程。转化技术在基因工程(Genetic Engineering)(Genetic Engineering)(Genetic Engineering)(Genetic Engineering)领域中占有极重要的地位。目前用得较多的转化技术为将人工构建的重组质粒到如受体细胞，使重组质粒在受体细胞中稳定地复制和表达。
二、材料和方法
1.材料：大肠杆菌(Escherichia coli)(Escherichia coli)(Escherichia coli)(Escherichia coli)
2.仪器：
离心机，恒温摇床，恒温水浴，超净工作台，冰柜
3.试剂
LB培养基; 0.1M mM CaCl2 ; 0.1M MgCl2 ;
TFB：10mM MES（pH 6.3）,45mM MnCl2, 10mM CaCl2, 100mM KCl
三、操作步骤
1. 感受态细胞融化（在手心）
2. 加入溶于TE的待转化外源DNA，冰浴30min。
3. 42℃热冲击2 min。
4. 冰上2min。
5. 加入0.4 ml LB液体培养基，37℃保温摇床45 min
6. 取0.2ml菌悬液涂布在含氨苄青霉素、IPTG、X-gal培养基上，37℃培养。
四、实验结果及分析：
培养皿上有白色菌落和兰 色菌落，但兰色菌落数量很少。由于受体细胞本身的菌落为兰色，所以白色菌落说明转化成功；兰色应为转化不成功。但是由于转化的质粒经过了酶切和连接，若是在原酶切位点的连接进行的转化，菌落为白色；若为酶切去一段DNA的的连接质粒进行的转化，菌落为兰色（说明在酶切上成功，连接上也成功，转化上也成功）。
五、注意事项
关键要严格控制热激时间，超过2min，则转化会失败。
免疫学实验
实验十六 单向琼脂扩散实验
一、原理
单向琼脂扩散实验又称单向免疫扩散实验。指可溶性抗原在相应抗体的琼脂介质中的扩散，可定性、定量抗原。
二、操作步骤
1.取一块干净的玻璃板，用少量75%乙醇冲洗，晾干后置于水平台，将1%琼脂糖融化，56℃水浴中保温。
2.取15ml琼脂糖加到56℃预热玻璃管中，加入约200微升抗血清，充分混匀后铺于玻璃板上，厚度约为1㎜。
3.待凝胶凝固后打孔，直径为3㎜，将孔内琼脂弄出。
4.将系列稀释的标准抗原和待检抗原分别加到凝胶孔内，每孔5微升。
将凝胶板置于湿盒内，室温过夜，观察结果。
三、实验结果
发现沉淀环的大小与抗原的浓度成反比，基本成线性相关。其大小不仅与孔中抗原的浓度相关，而且和琼脂中抗体的浓度有关。
实验十七 双向琼脂扩散实验
一、原理
双向琼脂扩散实验，是将抗原和相应抗体分别加入同一凝胶板内的相邻小孔中。两者相互扩散,当扩散到他们的浓度比例合适的部位相遇时,就会形成抗原抗体复合物的沉淀。
二、操作步骤
1.取一块干净的玻璃板，用少量75%乙醇冲洗，晾干后置于水平台，将1%琼脂糖融化，56℃水浴中保温。
2.将琼脂糖铺于玻璃板上，厚度约为1㎜。
3.打孔，孔距为4㎜，
4.将抗血清按二倍稀释法稀释成1:2, 1:4, 1:8, 1:16, 1:32的不同浓度。
在周围孔中加入不同浓度的抗体，中心孔加抗原。
将凝胶板置于湿盒内，室温过夜，观察结果
三、实验结果
浓度不同，形成不同的沉淀的线。
实验十八 免疫电泳
一、操作步骤
1.取一块干净的玻璃板，用少量75%乙醇冲洗，晾干后置于水平台，将1%琼脂糖融化，56℃水浴中保温。
2.将琼脂糖铺于玻璃板上，厚度约为1㎜。凝固后，打孔。
3.在孔内加入抗原，其中一孔内加电泳指示剂。
4.将凝胶板放在电泳槽中进行电泳，确定电泳时间。
5.电泳后在凝胶板上沿电泳方向平行挖2㎜宽的长槽，加入抗血清。
二、实验结果
将凝胶板放入湿盒，室温放置12小时，可观察在到沉淀弧线。
实验十九 对流免疫电泳
一、操作步骤
1．1％琼脂糖融化后，置于56℃备用。
2．取一块干净的玻璃板，用少量75%乙醇冲洗，凉干。
3．将琼脂糖铺于玻璃板上，厚度约为1㎜。凝固后，打孔。
4．在孔内分别加入抗原和抗体，每孔5微升，抗体点阳极，抗原点阴极。
5．在电场中电泳50min，5V。
二、实验结果
在小孔中间出现沉淀线。
实验二十 火箭免疫电泳
一、操作步骤
1.取一块干净的玻璃板，用少量75%乙醇冲洗，晾干后置于水平台。
3％琼脂糖融化后，置于56℃备用。
2.将琼脂糖铺于玻璃板上，厚度约为1㎜。凝固后，打孔。
3.将抗原按倍比稀释，在孔内分别加入标准抗原和代测样品，每孔5微升。
在10V电场中电泳3小时。
二、实验结果
发现在电泳方向上有拖尾，拖尾长度与抗原浓度有关。