91154 T细胞培养基-T淋巴细胞培养基

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全球细胞培养基开发和制造行业ling导者Irvine Scientific推出新培养基PRIME-XV®T cell CDM - 全球di一个商业化的全球shou个无血清、无动物源、化学成分限定的91154 T细胞培养基，用于T细胞体外活化以及高效扩增。

PRIME-XV®T细胞CDM是一种即用型化学成分，无动物成分的培养基。 它被优化和设计用于人源T细胞的培养，并推荐用于人T淋巴细胞的培养和扩增。 在源自人外周血单核细胞的CD3+T淋巴细胞上评估该培养基的性能。 PRIME-XV T细胞CDM旨在与细胞因子补充剂一起用于T淋巴细胞的离体培养。 使用的细胞因子混合物取决于每个使用者的实验要求。

 

全球细胞培养基开发和制造行业ling导者Irvine Scientific推出新培养基PRIME-XV®T cell CDM – 全球di一个商业化的全球shou个无血清、无动物源、化学成分限定的T细胞培养基，用于T细胞体外活化以及高效扩增。

     免疫细胞治疗主要包括T细胞，NK细胞，DC细胞，TCR-T，CAR-T,CAR-NK等，CAR-T细胞治疗无疑是近几年最闪耀的细胞治疗技术。目前CAR-T在国家CDE注册的产品已达30几个。

近年来，肿瘤免疫治疗技术突飞猛进，以嵌合抗原受体修饰T细胞（CAR-T）为代表的基因修饰细胞产品陆续进入临床。细胞治疗类产品获得的突破性进展和国外CAR-T细胞治疗产品的批准上市，为晚期肿瘤患者的治疗带来新希望。国内多家CAR-T获得临床试验批件，为了保证临床应用的正常，安全，有序的开展，相应的细胞治疗的法规也越来严格。在细胞培养过程中，应尽量避免使用动物或人来源的物质，比如应尽量避免血清的使用，培养基应该选择最高质量界别的培养基。Irvine Scientific  货号91154  PRIME-XV®T cell CDM是全球shou个无血清、无动物源、化学成分限定的T细胞培养基 。PRIME-XV®T cell CDM无疑是T细胞治疗领域（尤其是CAR-T细胞治疗）的趋势培养基。

产品

货号

规格

储存

PRIME-XV®T cell CDM

化学成分限定的T细胞培养基

91154

1L/瓶

2～8℃

产品特点

  1. 无血清成分
  2. 无异种蛋白
  3. 化学成分明确
  4. 不需要额外添加血清或者白蛋白，支持T细胞体外活化及扩增培养；
  5. T细胞（CAR-T）培养性能明显优于市面上的无血清培养基；
  6. GMP条件下生产以及DMF备案

 

提供zui佳性能

  1. 在平板、细胞培养袋和G-Rex中支持活跃的T细胞生长，同时维护其功能
  2. 提供批量到批次的一致性。
  3. 消除未定义成分对T细胞表型的影响
  4. 支持目标T细胞类型(如Th)的极化1T调节细胞

 

在应用于基因治疗和免疫治疗的细胞培养基中，一个越来越明显和重要的趋势是从“含动物来源和未限定的组分”转移到“无血清、无动物成分和化学成分限定”的培养条件中。对T细胞培养而言，其优点更加明显，因为动物来源的组分批次之间具有较大的差异性，并且其中天然存在的细胞因子和生长因子可能导致未知的不良影响。例如，已有数据显示，细胞因子和生长因子可以影响T细胞生长、表型和极化为治疗亚型的潜力。Irvine Scientific公司zui新研发的PRIME-XV T Cell CDM培养基可以消除这种差异性，保证批次间的均一性。化学成分限定的培养基还可以降低从未限定组分引入外来试剂或杂质的风险，从而有助于大规模商业化生产工艺的开发以及简化注册监管提交过程的复杂性。

“保证产生足够量所需的T细胞亚型对免疫治疗和基因治疗的成功至关重要。在新培养基开发过程中，我们发现，去除未限定的组分可以显著提高培养基的性能，从而允许我们在完全人为可控的条件下进行产品设计和开发工作。基于我们对T细胞生物学和影响T细胞生长、活力和表型等关键因素的理解使我们能够成为全球di一个提供完全化学限定的、无动物成分的T细胞培养基的供应商，从而帮助全世界的科学家和医生加速具有重大意义的、针对临床应用的免疫治疗研究”，Irvine Scientific的首席科学官Jessie Ni博士说到。

PRIME-XV T Cell CDM 细胞培养基是BalanCD HEK293系统的理想补充。经过加州和东京培养基研发团队的集体努力，2016年，Irvine Scientific上市了zui新一代BalanCD HEK293培养基，一种化学限定的、无动物源的培养基，用于生产基因治疗和免疫治疗所需的病毒载体，以及瞬时转染表达所需的蛋白。所有产品都使用严格的原材料控制体系并在cGMP条件下生产，以确保一致性和可靠性。

IrvineScientific公司长期以来遵守严格的cGMP/医疗器械质量体系，IrvineScientific公司在细胞治疗培养基领域对”Chemically Defined”和“Animal Component Free”有着严格的定义：

“Chemically Defined”化学成分限定：指培养基中的组分是无动物源的，不含任何动物蛋白或者人血蛋白，如BSA/HAS,而且浓度是明确的。

“Animal Component Free”无动物源成分 ：指不能有人或者动物来源的成分，并且只能使用植物或细菌产生的重组蛋白而不能使用来自动物或昆虫细胞表达的蛋白。

     Irvine Scientific公司研发团队开发了一系列的cGMP细胞治疗培养基以支持细胞治疗产业的应用，包括

– 全球shou个无血清、无动物源、化学成分限定的T细胞培养基（货号91154）

– 全球shou个无血清、无动物源、化学成分限定的NK细胞培养基（货号91215）

– 新一代无血清、无动物源、化学成分限定的DC培养基（货号91146）

– 新一代无血清、化学成分限定的悬浮293细胞培养基（货号91165）

– 无蛋白、无动物源、化学成分限定的细胞冻存液（货号91139）

-无蛋白、无动物源、无DMSO、化学成分限定的细胞冻存液（货号91140）

 

Irvine Scientific公司无血清、无动物源、化学成分限定的T细胞培养基

 

存储说明和稳定性

使用无菌技术处理以避免污染。 储存在2-8oC，避光，直到准备使用。 该产品在原始包装下在2-8oC下稳定，从1L PET瓶制造之日起14个月。 打开后，产品应在2-8oC的黑暗中储存，并在4周内使用。 请勿在指定的到期日后使用。 未经验证可在超过未开封的保质期内使用。

 

制备用于T细胞活化的平板

  1. 用浓度为1μg/ mL的抗人CD3（克隆UCHT1）和抗人CD28（克隆CD28.2）抗体在37℃oC下涂覆2小时或在2-8℃下过夜oC用Parafilm®来防止蒸发。
  2. 吸出涂层溶液。
  3. 在加入细胞之前用PBS洗涤两次。

 

制备T细胞

 

  1. 在使用前，在37oC下平衡足够量的PRIME-XV T细胞CDM至少15分钟。
  2. 通过在37oC水浴中温和搅拌小瓶1分钟，解冻新鲜的冷冻保存的PBMC小瓶。
  3. 小心地将小瓶的全部内容物转移到含有预热的10mL PRIME-XV T Cell CDM的15mL锥形管中。
  4. 将细胞以200g旋转10分钟。
  5. 小心吸出上清液，留下覆盖细胞沉淀的最小体积的培养基。
  6. 补充PRIME-XV T细胞CDM，相当于200 U / mL（11,000 IU / mL）的IL-2。
  7. 用补充的PRIME-XV T细胞CDM重悬细胞沉淀，并将细胞以100,000细胞/ mL的密度转移到包被的平板上。
  8. 91154 T细胞培养基-T淋巴细胞培养基将细胞在37℃oC和5％CO 孵育。
  9. 每2至3天培养，用含有相当于200U / mL（11,000IU / mL）IL-2的PRIME-XV T细胞CDM进食。 饲料量应至少为原始培养体积的70％。

注意：应根据细胞密度和生长情况调整摄食事件和体积的频率，以避免过度融合。

 

收获T细胞

  1. 使用细胞刮刀轻轻地从培养皿中取出T细胞。
  2. 用温度平衡的PRIME-XV T Cell CDM洗涤。
  3. 细胞准备好进行分析，存储或重新种植。

G-Rex 6孔培养板中T细胞扩增的方案

第0天：T细胞的电镀和活化

  1. 在使用前，在37℃下平衡足够量的PRIME-XV T Cell CDM至少15分钟。注意：为避免温度循环，请确定平衡前所需的总体积。
  2. 将小瓶在37°C水浴中轻轻搅拌1分钟，解冻一小瓶冷冻细胞。 或者，使用新鲜分离或收获的细胞。
  3. 小心地将小瓶的全部内容物转移到含有10mL PRIME-XV T Cell CDM的15mL锥形管中。
  4. 将细胞以200g旋转10分钟。
  5. 小心吸出上清液，留下覆盖细胞沉淀的最小体积的培养基。
  6. 补充适当体积的PRIME-XV T细胞CDM，相当于200 U / mL（11,000 IU / mL）的IL-2。
  7. 将5×106PBMCs /孔置于35mL完全培养基中。
  8. 添加以下可溶性激活抗体：

LEAF纯化的抗人CD3浓度为10μg/ mL（克隆UCHT1）LEAF纯化的抗人CD28浓度为5μg/ mL（克隆CD28.2）

  1. 将细胞在37℃和5％CO2的培养箱中孵育。

第3天：继续刺激

  1. 以200 U / mL（11,000 IU / mL）添加额外的IL-2。

第7天：媒体交流

  1. 通过从井的顶部边缘缓慢移液，移除25mL废介质，小心避免意外吸入细胞。
  2. 轻轻旋转或重新悬浮剩余的液体，使细胞均匀分散细胞计数。
  3. 加入30 mL新鲜培养基补充剂，IL-2，200 U / mL（11,000 IU / mL）。

第10天：继续刺激

  1. 以200 U / mL（11,000 IU / mL）添加额外的IL-2。第14天：收获细胞
  2. 通过从井的顶部边缘缓慢移液，移除25mL废介质，小心避免意外吸入细胞。
  3. 轻轻旋转或重新悬浮剩余的液体，使细胞均匀分散细胞计数。
  4. 以剩余体积收获细胞。