PSGro人iPSC/ESC胚胎干细胞无血清培养基-胚胎干细胞培养基

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PSGro人iPSC/ESC胚胎干细胞无血清培养基是为人类诱导的多能干细胞（IPSCs）和人类胚胎干细胞（ESCS）而设计的。它是无血清和化学定义的，因为它的所有成分是合成的化学品或纯化的重组蛋白。

PSGro人iPSC/ESC胚胎干细胞无血清培养基支持在细胞外基质蛋白(如BD Matrigel™)上的人iPSCs或人ESCs的无饲养生长和维持。其性能与市场领先的mTeSR™1或E8相比，在生长速度、特征形态、插件标记、正常核型和向不同胚层的分化等方面都有一定的优势。

 

PSGro人iPSC/ESC胚胎干细胞无血清培养基

订购信息

品牌         货号        产品描述                            包装

StemRD     PGroF-500    PSGro-Free®iPSC/ESC Growth Medium    500mL/套

                        人iPSC/ESC胚胎干细胞生长培养基

 

 

内容和存储

PSGro-Free®（Cat。＃PGroF）包含两个组件：

组件

尺寸

存储

保质期

基础培养基（在凝胶冰上）

450毫升

2至8°C。 远离光明

6个月

10x补充剂（干冰）

50毫升

-20°C或以下。 远离光明

6个月

 

需要或建议的其他关键试剂

  1. 细胞外基质蛋白，例如Matrigel TM（BD，cat＃354277）或等同物
  2. Accutase（Millipore，SCR005）或Collagenase IV（Invitrogen，17104）或同等物
  3. ROCK抑制剂Y-27632（StemRD，Y-01 / -05 / -25）或Thiazovivin（StemRD，Thia-01 / -05 / -25）

 

中等准备

  1. 在4°C下解冻PSGro-Free®补充剂。 如果需要，可以将解冻的Supplement等分并储存在-20°C或更低温度下，但应避免进一步冻融。
  2. 要制备PSGro-Free®完全培养基，将1份补充剂加入9份基础培养基中。
  3. 如果需要，可以将抗生素添加到完全培养基中。
  4. 一旦制成，PSGro-Free®完全培养基在2至8°C的黑暗中储存时可稳定2周。

 

具有细胞外基质蛋白的涂层板，例如Matrigel TM

请参阅制造商的说明。 对于BD Matrigel™，可遵循以下程序：

  1. 在冰上解冻Matrigel™。 用预冷的DMEM培养基稀释基质胶1:50。
  2. 立即使用稀释的Matrigel™溶液涂覆组织培养板。 对于6孔板，每孔使用1 mL稀释的Matrigel™溶液，旋转平板使溶液均匀涂抹。
  3. 让板在37℃下放置1小时或在4℃下放置过夜。

 

生长无饲养细胞适应PSGro-Free®

已经在最常用的hiPSC / ESC培养基中生长的人iPSC或ESC可以容易地适应PSGro-Free®。 用PSGro-Free®进行一轮1：1稀释的含血清或无血清培养基通常就足够了。 然而，对于某些媒体和细胞系，可能需要更长和更多的研究生适应。

 

生长饲养细胞依赖细胞适应PSGro-Free®

  1. 用Accutase，Collagenase IV或同等物质分离细胞。
  2. 添加以前使用的培养基，轻轻刮去细胞作为聚集体。 理想的聚集体尺寸与其他介质类似，过度移液的单细胞可能会降低电镀效率。
  3. 将具有细胞聚集体的悬浮液转移到15ml管中。
  4. 在室温下以200×g离心5分钟。
  5. 丢弃Matrigel™溶液，立即添加PSGro-Free®（例如，2 mL /孔用于6孔板）。
  6. 离心后，弃去上清液，用2mL先前使用的培养基轻轻重悬沉淀。 注意：向培养基中添加ROCK抑制剂（Y-27632或Thiazovivin）可显着提高存活率和电镀效率。
  7. 用PSGro-Free®将先前使用的培养基中的细胞聚集体转移到孔中。 混合。 轻轻地。
  8. 在37℃，5％CO 2和95％湿度下培养细胞。
  9. 如果星期五播种细胞，请在周一更换培养基至4 mL PSGro-Free®（周末无需更换）。 如果细胞在一周中的其他日子播种，则在第二天更换。

PSGro-Free®中冷冻细胞的回收

  1. 在37°C水浴中快速解冻hiPSC或hESC，将内容物转移至15 mL管中。 在温和混合下将10mL先前用于细胞的培养基滴加到管中。
  2. 在室温下以200×g离心细胞5分钟。
  3. 丢弃Matrigel™溶液，立即添加PSGro-Free®（例如，2 mL /孔用于6孔板）。
  4. 离心后，弃去上清液，用2mL先前使用的培养基轻轻重悬沉淀。 注意：向培养基中添加ROCK抑制剂（Y-27632或Thiazovivin）可显着提高存活率和电镀效率。
  5. 用PSGro-Free®将先前使用的培养基中的细胞聚集体转移到平板上。 轻轻混合。
  6. 在37℃，5％CO 2和95％湿度下培养细胞。
  7. 第二天将培养基更换为4 mL PSGro-Free®。

 

在无饲养细胞条件下传代PSGro-Free®中的细胞

  1. 在显微镜下观察以识别分化区域。 使用平板底部的镜头标记（例如，6孔板）标记分化的菌落
  2. 通过用移液管尖端或抽吸刮擦去除分化区域。
  3. 从细胞培养物中吸出培养基并用PBS冲洗。
  4. 每孔加入0.5 mL Accutase或Collagenase IV。 在室温下静置1-2分钟。
  5. 取出Accutase，用2 mL PSGro-Free®轻轻冲洗2-3次，以去除残留的酶。
  6. 加入2 mL /孔PSGro-Free®并用细胞刮刀刮掉菌落。
  7. 将分离的细胞聚集体转移至15 mL锥形管中，并用另外2 mL PSGro-Free®冲洗孔以收集任何剩余的聚集体。
  8. 在室温下以200×g离心5分钟。
  9. 吸出上清液。 通过轻轻移液将沉淀重悬于4 mL PSGro-Free®中。 注意：向培养基中添加ROCK抑制剂（Y-27632或Thiazovivin）可显着提高存活率和电镀效率。
  10. 用PSGro-Free®将细胞聚集体铺在涂有Matrigel™的新平板上。
  11. 在37℃，5％CO 2和95％湿度下培养细胞。 每天更换介质。
  12. 如果星期五播种细胞，请在周一更换培养基至4 mL PSGro-Free®（周末无需更换）。 如果细胞在一周中的其他日子播种，则在第二天更换。 注意：如果菌落处于zui佳密度，细胞可以每隔5-7天分裂，使用1：5到1:10的分裂。

 

PSGro-Free®中细胞的低温保存

  1. 准备含有90％PSGro-Free®和10％DMSO的冷冻培养基。 注意：向培养基中添加ROCK抑制剂（Y-27632或Thiazovivin）可显着提高存活率和电镀效率。
  2. 在无饲料条件下，从PSGro-Free®中传代细胞进行步骤1-8
  3. 轻轻吸出上清液，注意保持细胞沉淀完整。
  4. 轻轻地将沉淀重悬于冷冻培养基中，注意使细胞聚集体比通常用于传代的细胞更大。
  5. 将冷冻培养基中的1mL细胞聚集体转移到每个标记的冷冻管中。
  6. 将小瓶置于异丙醇冷冻容器中，并将容器置于-80℃
  7. 第二天转移到液氮罐中进行长期储存。

 

 

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