抗体如何选择？选单克隆还是多克隆？

使用抗体时选单抗还是多抗？相信很多同学都有这个疑问，单克隆抗体和多克隆抗体有什么区别呢？这个问题问得好，因为它们无论是在生产过程还是用途上都非常不同，了解了这些知识以后对选择合适抗体有很大的帮助。本篇总结了很多资料，下面就来给大家一一解答。

首先列出一个表格，让大家对多克隆抗体和单克隆抗体有一个简单的认识和对比

多克隆抗体	单克隆抗体
与目标蛋白上不同表位结合的多种不同抗体	只识别目标蛋白上一种表位的单一抗体
非表位特异的	表位特异的
与相似抗原有更多的交叉反应	交叉反应少
背景干扰较高	背景干扰低
各批次抗体有所不同	每批次抗体完全一样
成本较低	成本较高
制备耗时短 (大约 3 个月)	制备耗时较长 (大约 6 个月)
很多宿主物种可选	宿主物种选择不多

那么到底什么是单克隆抗体呢?

单克隆抗体的定义:单克隆抗体是仅与目标蛋白某一特定表位结合的单一抗体。

单克隆抗体的制备

简单来说就是将免疫原注射到宿主动物体内产生免疫反应，之后把B细胞从脾脏中移出，单种B细胞与骨髓瘤细胞融合为B细胞杂交瘤，成为一个永生化胞株。这样一来，杂交瘤的B细胞就会一直产出只识别单一表位的单克隆抗体，通常这个胞株会有一个特定的克隆号（clone number），用来与其他胞株区分。

杂交瘤接下来可以被注射到小鼠的腹腔中大量生产，杂交瘤分泌富含抗体的一种液体，被称作腹水，用注射器抽取纯化，就可获得大量的单克隆抗体。

单克隆抗体更适用于:

• 检测单一抗原

• 检测蛋白质家族的单一成员

• 不同实验/批次的抗体检测结果稳定一致

• 细胞染色背景较低-很适用于IHC、ICC、IF 等应用

• 量化蛋白质表达 (例：流式或荧光细胞分选)

• 探测分子结构变化

• 探测磷酸化状态的变化

• 为X射线晶体测试探测目标

• 制作缺少特定细胞类型的动物模型

• 免疫治疗

• 单克隆抗体不建议用于:

• 根据同源性检测不同物种的目标蛋白

• 检测浓度较低的目标蛋白

• 检测形态变化了的蛋白

什么是多克隆抗体呢?

多克隆抗体定义:多克隆抗体是指与目标蛋白上多种不同表位结合的多种不同抗体.

多克隆抗体制备

多克隆抗体的第一步和单克隆抗体一样，都是将免疫原注射到宿主体内产生免疫反应，激活了多种B细胞。不同的是免疫过后，多克隆抗体就直接从免疫宿主的血清中分离出来，或接着进行纯化，没有与骨髓瘤细胞融合的过程。一旦宿主动物死亡，需要免疫新的动物，这时血清中的抗体就会有所不同。

虽然多抗每批次有轻微差别，但是因为它识别的表位多，这个差别影响并不算太大，而单克隆抗体虽然价格偏高，可是特异性更强更稳定。可以说单抗和多抗是各有各的优点。

多克隆抗体更适用于:

• 检测有高同源性的抗原的已知或未知同种型

• 检测浓度较低的抗原

• 捕获尽可能多的抗原 (例如 IP 或 ChiP)

• 检测变性的蛋白

• 检测可能发生了糖基化或形态变化的目标蛋白

• 用多种检测方法检测一种原蛋白时

• 检测 pH 和盐度不同的溶液中的目标蛋白

多克隆抗体不建议用于:

• 量化检测，比如：流式。由于不同表位的结合导致信号被放大加强，可能会导致结果不准确

• 当高同源性蛋白的交叉反应会引起问题时

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