ELISA 故障排除指南
根据下列的酶联免疫吸附测定（ELISA）故障排除指南来快速找出问题原因，改善您的实验步骤和解决方案。
首先从下面几个情况中找到您的ELISA的问题所在:
-标准曲线有问题
变异系数 (CV)高
高背景
样品读数过高
样品读数过低
注意: 如果使用的是StressXpress? ELISA 检测试剂盒，请参照 StressXpress? ELISA 的故障排除指南。如果使用的是自己制作的ELISA试剂盒，请参考其他的ELISA试剂盒故障排除指南。
标准曲线有问题
标准品制备不当:
StressXpress® – 确保正确计算和实施了标准品稀释度
StressXpress® – 在打开标准品之前要离心
如果标准品是冻干粉，在稀释之前确保所有的成分都已经溶解
使用精准的移液器，并确保操作正确
标准品降解了:
StressXpress® – 确保标准品按照指示保存，以避免降解发生
使用新鲜的标准品
标准曲线不拟合:
使用不同的标度或者曲线拟合
移液错误:
确保多道移液器是校准好的
-变异系数 (CV)高
酶标板孔底部搅乱:
移液时避免接触孔板底部。将移液器吸头对准孔壁，避免搅乱孔底区域。
孔中加试剂量不对:
StressXpress® – 根据说明书上的要求对每个孔加一定量的试剂
如果使用自动清洗系统，确保每个端口干净无阻碍。
边缘效应:
确保整个孔板温度一致，并且试剂都是室温。
移液错误:
保证多道移液器是校准好的
清洗错误:
确保每次洗板前彻底移除所有孔中的缓冲液
样品不均一:
使用前将样品和试剂充分混合确保均一性
如果必要，将溶液中颗粒离心出来
振荡混合不充分:
确保在所有的孵育步骤时将酶标板放到振荡器上
孔间污染:
避免使移液器吸头与孔壁或孔中的试剂接触
如果每次孵育使用同一个封板膜，确保试剂没有沾染到封板膜上
-高背景
洗涤不充分:
StressXpress® – 按照说明书上指示的正确洗涤剂量和次数洗涤
在加底物溶液之前增加洗涤剂量和洗涤次数
样品蒸发了:
用试剂盒中提供的封板膜或parafilm将酶标板紧密覆盖
空白对照有误:
StressXpress® – 按照说明书要求正确混合空白对照的试剂
确保其他孔的读数都减去了空白对照的读数
反应没有终止:
StressXpress® – 确保每孔加入了正确剂量的终止液
使用新鲜的终止液
TMB 曝光失效:
使用前将TMB保存于遮光小瓶中
TMB 污染了:
在将TMB加入各孔前确保 TMB 清澈透明
空白孔受污染:
避免使多道移液器吸头触碰到板孔或孔中的试剂
酶标板底部不洁:
彻底清洗酶标板底部
-样品读数过高
样品浓度太高:
StressXpress® – 按照实验步骤里指示的稀释样品或根据特殊样品优化稀释步骤
增加样品稀释度
HRP 浓度错误:
StressXpress® – 确保按照实验步骤里指示的稀释度使用HRP
孵育时间太长:
StressXpress® – 按照实验步骤中指示的孵育样品
减少孵育时间
-样品读数过低
抗原水平过低:
StressXpress® – 按照实验步骤里指示的稀释样品或根据特殊样品类型优化稀释步骤
降低样品的稀释度或者浓缩样品
反应时间太短:
StressXpress® – 根据实验步骤决定最佳反应时间
适量增加反应时间
孵育时间太短:
StressXpress® – 根据是实验步骤里描述的孵育样品
增加孵育时间
孵育温度过低:
StressXpress® – 按照实验步骤中指示的温度孵育样品
优化孵育温度
酶标板过期:
StressXpress® – 查看试剂盒包装上的保质期
包被新的酶标板
抗体浓度过低:
StressXpress® – 使用实验步骤里指示的抗体浓度
增加抗体浓度
底物不在室温:
所有试剂使用前都必须保持室温 (25⁰C)
波长不对:
确保酶标板读数时使用的合适的波长
酶标板读数延迟:
加入终止液后应立即读数，不要延迟
样品类型不适用:
StressXpress® – 确保使用的物种和样品类型是经验证过适用于该试剂盒的
洗涤过度:
StressXpress® – 根据实验步骤使用合适的洗涤量和次数
将洗涤液轻缓移至板孔中
如果使用的是洗涤系统，确保压力合适
板孔干透:
实验操作时不要让板孔干透
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