外泌体常见的提纯方式

外泌体是指包含了复杂 RNA 和蛋白质的小膜泡 (30-150nm)，现今，其特指直径在40-100nm的盘状囊泡。1983年，外泌体首次于绵羊网织红细胞中被发现， 1987年Johnstone将其命名为“exosome”。多种细胞在正常及病理状态下均可分泌外泌体。其主要来源于细胞内溶酶体微粒内陷形成的多囊泡体，经多囊泡体外膜与细胞膜融合后释放到胞外基质中 。

外泌体的提取（提纯）主要包括以下几种方式：

一是超速离心法：这是外泌体提取最常用的方法 。此种方法得到的外泌体量多，但是纯度不足，电镜鉴定时发现外泌体聚集成块， 由于微泡和外泌体没有非常统一的鉴定标准，也有一些研究认为此种 方法得到的是微泡不是外泌体 ；

二是过滤离心：这种操作简单、省时，不影响外泌体的生物活性 ，但同样存在纯度不足的问题；

三是密度梯度离心法：用此种方法分离到的外泌体纯度高，但是前期准备工作繁杂，耗时，量少；

四是免疫磁珠法：这种方法可以保证外泌体形态 的完整，特异性高、操作简单、不需要昂贵的仪器设备，但是非中性pH和非生理性盐浓度会影响外泌体生物活性，不便进行下一步的实验；

五是PS亲和法：该方法将PS（磷脂酰丝氨酸）与磁珠结合，利用亲和原理捕获外泌体囊泡外的PS。该方法与免疫磁珠法相似，获得的外泌体形态完整，纯度最高。由于不使用变性剂，不影响外泌体的生物活性，外泌体可用于细胞共培养和体内注射。2016.9《Scientific Reports》杂志发表了该方法最新数据，表明PS法可提取相当高纯度的外泌体;

六是色谱法：这种方法分离到的外泌体在电镜下大小均一， 但是需要特殊的设备，应用不广泛 。

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