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产品资料 – DNA修饰酶与克隆技术 – 核酸酶
双链特异性 DNase 收藏
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#M7635L
750 units
8,889.00
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#M7635S
150 units
1,929.00
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产品概述
双链特异性 DNase 是一种经过改造的双链特异性核酸内切酶，可以在单链 DNA 存在的情况下，特异性的将双链 DNA降解成短寡核苷酸；以及剪切 DNA : RNA 杂交链的DNA链，生成单链 RNA产物。
产品特点
双链特异性 DNase 可用于：
• RT-qPCR 扩增前去除基因组 DNA 污染
• RNA 或蛋白质制备时去除 DNA 污染
• PCR 反应前除污染
对于 IVT 应用，请考虑使用 DNase I（无 RNase）或 DNase I-XT（耐盐）
产品描述
图1：双链特异性 DNase 更倾向于降解双链 DNA 而非单链 DNA
通过监测双链特异性 DNase 降解底物时荧光增加的情况，衡量其作用于 dsDNA底物（35 nt dsDNA 发夹结构）或 ssDNA 底物（15 nt ssDNA）时的活性。FLUOR 代表荧光基团；QUENCH 代表猝灭基团。
图2：双链特异性 DNase 对于 dsDNA 的特异性比 DNase I 更高
30°C 条件下，双链特异性 DNase（NEB #M7635）或 DNase I（NEB #M0303）在各自反应缓冲液中降解底物并监测其荧光增加情况，分别衡量这两种酶作用于 dsDNA 底物（35 nt dsDNA 发夹结构）或 ssDNA 底物（15 nt ssDNA）时的活性。与 DNase I 相比，双链特异性 DNase 对dsDNA 具有超过 5 倍的特异性。这种作用于双链与单链底物时的活性比显示双链特异性 DNase 对 dsDNA 优先选择性远高于 DNase I。
图3：双链特异性 DNase 降解 DNA:RNA 杂交链的 DNA 链
在体外转录反应（50 μl）中，使用 2 U DNase I-XT 在 37°C 下处理 15 分钟，以消化 DNA 模板。使用 Monarch® RNA Cleanup Kit（500 µg, NEB #T2050）纯化 RNA，并用无核酸酶水（50 μl）洗脱。将不同数量的 Cluc RNA 模板（从 106 到 1012 个拷贝）与带有 5´荧光标记/3´ 猝灭基团的 22 nt 互补 DNA 探针（最终浓度为0.2 µM，Tm 61.8°C）混合于 NEBuffer™ r1.1 反应缓冲液中。加入双链特异性 DNase (2U)，58 °C 温育，并在 Bio-Rad® CFX Touch™ qPCR 仪器上每 10 秒监测相对荧光强度。随着时间的推移观察到荧光量的增加（无模板对照组未观察到），证明了双链特异性 DNase 能够剪切 DNA:RNA 杂交链中带有荧光标记的 DNA 链（探针：Cluc RNA）。此外，当与模板 RNA 杂交时，DNA 探针的剪切随着时间而增加，并且与存在的 Cluc RNA 量呈剂量依赖关系。FLUOR = 荧光基团；QUENCH = 猝灭基团
图4：混合了 dsDNA 和 ssDNA 的情况下，双链特异性 DNase 在宽泛的温度范围内更倾向于降解 dsDNA
在 25°C、37°C、50°C 或 65°C 下，将 20 pmol 的 dsDNA（60 bp寡核苷酸）和 20 pmol 的ssDNA（50 nt 寡核苷酸）混合物与 2 个单位的双链特异性 DNase 一起温育 1 分钟，然后进行 SYBR Gold 染色4% E-gel™ EX凝胶电泳。Lane 1：dsDNA PCR Marker（NEB #N3234），Lane 2：ssDNA 50 nt，Lane 3：dsDNA 60 bp，Lanes 4-7：25°C、37°C、50°C、65°C。随着温度升高，双链特异性 DNase 对 dsDNA 显示出活性和偏好性的增加。FLUOR = 荧光基团