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产品资料 – 用于二代测序的 NEBNext® 试剂 – 适用于 Illumina 测序平台/Ultra II DNA & RNA
NEBNext单细胞/超低起始量 cDNA 合成 &扩增模块 收藏
货 号
规 格
价 格(元)
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#E6421L
96 Rxns
29,109.00
有
有
无
无
无
无
#E6421S
24 Rxns
8,559.00
有
无
无
无
无
无
Download:
- isoschizomers |
- compatible ends |
- single letter code
特性
从单个细胞或 2 pg-200 ng 的总RNA 制备最高产量、最高质量的全长转录本测序文库
用于极难检测的低丰度转录本
不同起始量及样本类型，均能保证转录本检测的一致性
不同起始量及样本类型，均能获得全长转录本和均一的覆盖度
用于培养细胞、原代细胞和总 RNA 的文库制备
节省时间：采用快速、精简的工作流程，减少了操作步骤和手动操作时间
-单管完成从细胞裂解到 cDNA 的全部实验流程
-不同 GC 含量的样本，均可使用同一种酶混液、同一种反应条件同时完成 DNA 片段化、末端修复和加 dA 尾 三个步骤
提供包含或不包含文库构建的包装，为实验提供了极大的灵活性
概述
NEBNext单细胞/超低起始量 RNA 文库制备试剂盒可从单个细胞或超低起始量的RNA 构建成全长转录本的高质量文库，优化的工作流程满足了更高灵敏度、更快速的文库构建需求，该试剂盒适用于 Illumina 平台。
优化的 cDNA 合成和扩增步骤包含模板转换，同时采用特有的实验流程和试剂。
该方法可直接从单个细胞或 2 pg-200 ng 的 RNA 合成 cDNA，即使低丰度转录本也可获得高产量的cDNA。后续文库构建采用 NEBNext Ultra II FS DNA 片段化/末端修复/加 dA 尾试剂盒，使建库流程更简单高效
使用 NEBNext单细胞/超低起始量 RNA 文库制备试剂盒建库，能显著增加转录本检测数量。以 Jurkat 单细胞（6个重复）为样本制备文库，分别采用 NEBNext单细胞/超低起始量 RNA 文库制备试剂盒、SMART-Seq v4 Ultra Low Input RNA 试剂盒（Clontech #634891）及Nextera XT DNA Library Prep 试剂盒（Illumina #FC-131-1096）制备文库。文库通过 Illumina NextSeq 500（2 x 76 bp）双端测序。TPM = 每百万个千碱基长度的转录本。每个圆点代表在给定的 TPM 范围内检测到的转录本数量，框代表各个重复和不同方法的中位数、第一四分位数及第三四分位数。使用 Salmon 0.6 完成所有 GENCODE v25 转录本的比对和量化。图中显示了在以下TPM 范围内检测到的转录本数量：1-5、5-10、10-50 和＞50 TPM。结果表明：使用NEBNext 文库制备方法能检测到更多的低丰度转录本。
使用 NEBNext单细胞/超低起始量 RNA 文库制备试剂盒建库，能获得更高的文库产量。以 HeLa 单细胞、Jurkat 单细胞、M1 单细胞和混有推荐量的 ERCC RNA Spike-In 混合物 I（Thermo Fisher Scientific® #4456740）的 10 pg人通用参考（UHR）RNA（Agilent #740000）为样本制备文库。分别采用 NEBNext单细胞/超低起始量 RNA 文库制备试剂盒、SMART-Seq v4 Ultra Low Input RNA 试剂盒（Clontech #634891）及Nextera® XT DNA 文库制备试剂盒（Illumina #FC-131-1096）制备文库。误差条表示6-11 个重复的标准差。使用 NEBNext 试剂盒时，将 80% 的cDNA 作为起始量，用 8 个PCR 循环扩增文库。使用 SMART-Seq v4/Nextera XT 建库时，采用推荐的 125 pgcDNA 作为起始量，用 12 个PCR 循环扩增文库。误差条表示6-11 个重复数据的标准差。