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产品资料 – 蛋白表达和纯化技术 – 表达系统 ：大肠杆菌
NEBExpress® T4 溶菌酶 收藏
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#P8115L
5*200 μg
5,039.00
有
无
无
无
无
无
#P8115S
200 μg
1,249.00
无
无
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产品特色
l NEBExpress T4 溶菌酶的活性是鸡蛋清溶菌酶的 200 倍；
l 裂解反应可放大并与高通量工作流程兼容；
l 快速且非机械的细菌裂解过程；裂解产物可直接使用，并与亲和树脂兼容；
l 小包装（200 µg）和大包装（5 x 200 µg）分别适用于裂解 7 克与 35 克细胞；
l 重组、无动物成分，且符合 REACH 标准。
产品描述
NEBExpress® T4 溶菌酶是一种重组胞壁质水解酶，通过水解原核细胞（革兰氏阴性菌和一些革兰氏阳性菌）肽聚糖中 N-乙酰胞壁酸和 N-乙酰葡糖胺之间的 β-1,4 键来破坏细菌细胞壁。它可用于提取可溶性蛋白、膜蛋白、DNA、RNA 或代谢物。
来源：携带噬菌体 T4 基因的大肠杆菌菌株。
图 1：NEBExpress T4 溶菌酶的活性是鸡蛋清溶菌酶的 200 倍
用 NEBExpress T4 溶菌酶 (T4L) 或鸡蛋清溶菌酶 (ChL) 裂解表达 vGFP 的 T7 表达大肠杆菌细胞：将 4 UOD600 细胞沉淀重悬于 200 µL 50 mM Tris-HCl pH 7.5 中，加入 NEBExpress T4 溶菌酶或鸡蛋清溶菌酶（每 1 mL 细胞悬浮液中加入 0.1、1、10、100 或 200 μg 酶），室温裂解 5 分钟。通过离心收集可溶性蛋白，并通过 SDS-PAGE 分析。
图 2：在 NEBExpress E.coli 裂解试剂存在的情况下，使用 NEBExpress T4 溶菌酶实现最佳蛋白提取效果
使用 NEBExpress T4 溶菌酶 (T4L)，在 50 mM Tris-HCl pH 7.5 或 NEBExpress E. coli 裂解试剂 (NEB #P8116S) 中对表达 vGFP 的 T7 表达大肠杆菌细胞进行裂解：将 4 UOD600 的细胞沉淀重悬于 200 µL Tris 缓冲液或 NEBExpress E. coli 裂解试剂中，加入 NEBExpress T4 溶菌酶（每 1 mL 细胞悬浮液中，酶的加入量为 0、0.1 或 1 μg），室温裂解 5 分钟， 离心收集可溶性蛋白并通过 SDS-PAGE 分析。
产品优势和特性
l NEBExpress T4 溶菌酶的活性是鸡蛋清溶菌酶的 200 倍；
l 裂解反应可放大并与高通量工作流程兼容；
l 与 NEBExpress E. coli 裂解试剂 (NEB #P8116S) 结合使用时，裂解效率提高到原来的 2 倍；
l 快速且非机械的细菌裂解过程；裂解产物可直接使用并与亲和树脂兼容；
l 适用于裂解对机械裂解方法敏感的热敏蛋白质；
l 兼容多种下游应用，如 SDS-PAGE、Western blot、活性测定、免疫沉淀和下游纯化；
l 小包装（200 µg）和大包装（5 x 200 µg）分别适用于裂解 7 克与 35 克细胞。
注意事项:
1. NEBExpress T4 溶菌酶兼容：
pH 6.5 – 9.5 范围内的 Tris、HEPES 和磷酸钠缓冲液；最佳 pH 为 7.5 – 8.5；
0.5 – 2 mM EDTA 可提高对革兰氏阴性菌的裂解效率，超过 2 mM 的 EDTA 浓度开始抑制酶活性，当 EDTA 浓度为 5 mM 时，酶活性会降低 50%；
NaCl 浓度不超过 25 mM，50 mM NaCl使酶活性受到 80% 的抑制；
MgCl2 浓度不超过 1 mM，5 mM MgCl2 使酶活性受到 80% 的抑制；
Triton X-100 或 Tween 20 浓度不超过 2%；
蛋白酶抑制剂混合物（含 ≤ 2 mM EDTA）；
DTT、β-巯基乙醇、TCEP 和 THP等还原剂；
为获得最佳裂解性能，建议使用 NEBExpress E.coli 裂解试剂 (NEB #P8116)。
2. NEBExpress T4 溶菌酶可直接添加到重悬后的细胞中，或在重悬细胞之前与缓冲液预先混合使用。
3. 每 mL 以 10 UOD600 重悬的细胞中，使用 1 µL NEBExpress T4 溶菌酶，例如，对于5 mL 收集时 OD600 值为 2 的细菌培养液，可以获得 10 UOD600 的细胞（5 mL x 2 OD600 = 10 UOD600）。
4. 如果称量细胞沉淀，每克细胞沉淀重悬于 30 mL 缓冲液中的细胞沉淀，使用 30 µL NEBExpress T4 溶菌酶。
5. 由于 DNA 的释放，裂解物可能变得粘稠，为了获得最佳的裂解产量，使用微球菌核酸酶 (NEB #M0247) 消除粘度。 每 mL 裂解物中加入 1 mM CaCl2 和 1 µL 微球菌核酸酶，混匀后在室温下孵育 5 分钟。
6. 裂解效率可能因菌株而异，对于难以裂解的样本，每 mL 重悬细胞中，使用 5 至 15 µL NEBExpress T4 溶菌酶。
7. 在 NEBExpress T4 溶菌酶处理前，将细胞沉淀经历一次冻融循环，细胞沉淀往往更容易裂解。