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mRNA体外转录专用载体Template Vector (BspQ I) for T7 mRNA Synthesis
品牌	Code No.	产品名称	包装量	价格（元）	说明书	数量
Takara	6146	Template Vector (BspQ I) for T7 mRNA Synthesis	10 μl	￥618

Template Vector (BspQ I) for T7 mRNA Synthesis用于制备Poly(A)尾区域无冗余序列的mRNA · 用于构建mRNA体外转录模板质粒的载体 · 使用IIS型限制性内切酶BspQ I可得到Poly(A)尾区域无冗余序列的线性化模板，能够提高mRNA的翻译效率 · 与In-Fusion® Snap Assembly Master Mix结合使用，可轻松快速地进行克隆

■ 制品说明

Template Vector (BspQ I) for T7 mRNA Synthesis是用于使用TriLink 公 司 的 帽 类 似 物 [CleanCap Reagent AG 或 CleanCap Reactive AG（3’OMe）]构建体外转录 (IVT)mRNA的模板质粒。线性化的载体中包含T7启动子、转录起始序列（AGG）、5’-UTR(untranslated region)和3’-UTR、Poly(A)序列（141碱基），因此只需要对目标基因编码序列（Coding sequence: CDS）进行In-Fusion无缝克隆，便可构建体外转录的模板质粒（图1）。随后用IIS型限制酶BspQ I消化，得到的线性化质粒模板用于合成Poly(A)尾无冗余序列的mRNA（图2），获得的mRNA可用于人类、小鼠或其他哺乳动物细胞。使用线性化的模板质粒，通过Takara IVTpro T7 mRNA Synthesis Kit（Code No. 6144）进行体外转录（IVT），即可便捷地制备高产量的mRNA。 关于模板质粒的设计和方案的细节，请结合本产品的数据，参考Cloning Kit for mRNA Template(Code No. 6143)的使用说明书。

图2：Linearized Template Vector (BspQ I)的BspQ I酶切位点周围序列、线性化后的末端结构和IVT RNA序列图像 Type IIS限制酶BspQ I的识别序列(红框)和切割位点(蓝箭头)。切割位点位于识别序列的外侧。 通过在BspQ I处进行切割，可以制备Poly(A)尾区域无冗余序列的mRNA合成模板。

■ 用途

制备Poly(A)尾区域无冗余序列的mRNA合成模板

■ 制品内容

Linearized Template Vector (BspQ I)（50 ng/μl） 10 μl FLuc Control Fragment (BspQ I)（100 ng/μl） 10 μl

■ 使用注意

· 构建质粒模板时，需要In-Fusion无缝克隆试剂。请购买In-Fusion Snap Assembly Master Mix（Code No. 638943/638944/638947～638949）。 · 关于模板质粒的设计和方案细节，请参阅Cloning Kit for mRNA Template (Code No. 6143)的使用说明书。此时，请确认想要克隆的目标基因的CDS序列中不存在BspQ I位点。若出现BspQ I位点存在于CDS中的情况，为确保氨基酸序列不会发生变化，可以通过使用不同的密码子（例：从丙氨酸密码子的“GCU”变为“GCC”等）来改变DNA序列。 · 当dsDNA模板、试剂、试管或微量移液器枪头被RNase污染时，合成的RNA产量会降低或者出现片段化。在实验过程中应采取预防措施以避免RNase污染，例如戴一次性手套和使用专门用于RNA实验的试管和微量移液器枪头。

■ 保存

-20℃

■ 试剂盒以外的其它必要试剂（主要试剂）

· In-Fusion Snap Assembly Master Mix（Code No. 638943/638944/638947～638949） · 感受态细胞   E. coli HST08 Premium Competent Cells（Code No. 9128）   Takara Stable Competent Cells（Code No. 9132）等 · SOC培养基 · LB (luria bertani)培养基 · LB /卡那霉素(50 μg/ml)平板

■ 序列信息

· Linearized Template Vector (BspQ I) ：2,962 bp 序列信息（fasta格式）：点此进行下载

· FLuc Control Fragment (BspQ I) ：1,683 bp 序列信息（fasta格式）：点此进行下载

■ 载体信息Linearized Template Vector (BspQ I)

NeoR/KanR: 53～847 Ori: 1,172～1,760 CMV enhancer: 1,861～2,240 CMV promoter: 2,241～2,444

T7 promoter sequence: 2,489～2,505 Transcription start sequence (AGG): 2,506～2,508 5’UTR: 2,509～2,559 Upstream In-Fusion region (15 bp): 2,545～2,559

In-Fusion cloning site (linearized site): between 2,559 and 2,560

Downstream In-Fusion region (15 bp): 2,560～2,574 3’UTR: 2,560～2,672 Poly(A)141 : 2,673～2,813 BspQI: 2,810

Poly(A) Forward Primer: 2,570～2,589 Poly(A) Reverse Primer: 2,904～2,923

<T7启动子序列后的详细信息>

页面更新：2024-03-21 09:40:52