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| 慢病毒整合位点识别 |
使用Lenti-X Integration Site Analysis Kit检测重组慢病毒载体整合的确切位点。慢病毒的复制生命周期会将慢病毒RNA基因组的一个DNA拷贝整合到宿主基因组中。所选择的整合位点对转基因的表达和宿主细胞的表现型都有重要影响。Lenti-X Integration Site Analysis Kit使用基因组步移技术来识别这些整合位点，以便对其进行测序和分析。
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| 基因组步移技术主要包含以下步骤： |
1. 从转导后细胞克隆或细胞群提取基因组DNA，使用平末端切割限制酶进行消化。
2. 将基因组步移接头连接到基因组DNA文库的平末端。
3. 通过一轮PCR从文库中扩增出同时包含文库接头和慢病毒序列的片段。
4. 第二轮巢式PCR通常会产生一个单一的主要PCR产物，可对其进行测序以确定整合位点。多个整合位点会产生多个条带，可对每个条带进行纯化和单独测序。
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图1. Lenti-X Integration Site Analysis Kit操作流程图。主要包括以下3大步骤：构建三个病毒整合文库，PCR扩增文库基因组DNA，分析PCR产物。凝胶结果展示了一个典型的分析结果。 Lane 1：HpaI文库；Lane 2: DraI文库；Lane 3: SspI文库；Lane 4: 无模板对照；Lane M: DNA size markers；AP：接头引物；LSP：慢病毒特异性引物。
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页面更新：2020-02-20 10:27:59
