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一步法预加染料RT-PCR试剂盒PrimeScript™ One Step RT-PCR Kit Ver.2 (Dye Plus)
品牌	Code No.	产品名称	包装量	价格（元）	说明书	数量
Takara	RR057A	PrimeScript™ One Step RT-PCR Kit Ver.2 (Dye Plus)	50 Rxns	￥1,400 ￥515
Takara	RR057B (A × 4)	PrimeScript™ One Step RT-PCR Kit Ver.2 (Dye Plus)	50 Rxns × 4	￥5,042

■ 制品内容 (50 次量)

PrimeScript 1 Step Enzyme Mix 100 μl 2X 1 Step Buffer (Dye Plus) 625 μl × 2 Control F-1 Primer (20 μM)*1 20 μl Control R-1 Primer (20 μM)*2 20 μl Positive Control RNA (2×105 Copies/μl) 20 μl RNase Free dH2O 625 μl × 2   *1 Positive Control RNA用上游引物。 *2 Positive Control RNA用下游引物。

■ 制品说明

PCR（Polymerase Chain Reaction；聚合酶链式反应）是一种体外扩增DNA的简单而有效的方法。虽然原理上PCR法是扩增DNA，RNA不能直接被扩增，但是经过反转录酶的作用把RNA反转录成cDNA后，PCR法便可应用于RNA的解析了。目前，RT-PCR方法已广泛应用于RNA的构造解析、cDNA的克隆及RNA水平上的表达解析等多种领域。 本试剂盒采用了一步（One Step）RT-PCR法。RNA→cDNA→PCR反应操作在同一反应体系中连续进行，反应中途不需添加任何试剂，避免污染危害。同时反应液中已含有电泳时所必需的色素试剂（蓝色和黄色色素），反应后可以直接进行电泳。反应液为鲜艳的绿色（Emerald Green），电泳时指示效果明显，容易观察样品的电泳位置。反转录反应使用了具有很强延伸能力的反转录酶PrimeScript RTase。该反转录酶对具有复杂二级结构的RNA模板也具有很强的延伸能力；PCR反应使用了扩增性能优越的Hot Start型DNA聚合酶TaKaRa Ex Taq HS，大大提高了本试剂盒的扩增性能和反应特异性。反应试剂已优化，以实现与不含染料和loading buffer的传统RT-PCR系统具有相同反应效果。在本试剂盒中，已将PrimeScript RTase、TaKaRa Ex Taq HS、RNase Inhibitor以及One Step RT-PCR用稳定剂等配制成了Premix型的PrimeScript 1 Step Enzyme Mix；同时把反应用Buffer、dNTP以及One Step Enhancer Solution配制成了Premix型的2×1 Step Buffer（Dye Plus）的形式，使实验操作时的反应液配制和电泳检测更为简单方便。 本试剂盒具有以下特点： 1. 进行高效的RT-PCR扩增。 2. 反应液制备简单，可直接进行凝胶电泳。 3. 反转录温度可以设定为50℃，能够有效抑制非特异性扩增。 4. 可减少由于错配和引物二聚体造成的非特异性反应。 本试剂盒中含有进行One Step RT-PCR反应用的全部试剂，可以方便有效地对RNA进行扩增分析。

■ 各种引物的序列

引物名称 各引物序列   Control F-1 Primer        5′-CTGCTCGCTTCGCTACTTGGA-3′   Control R-1 Primer        5′-CGGCACCTGTCCTACGAGTTG-3′

■ Positive Control RNA

本试剂盒中的Control RNA是以pSPTet3质粒 (质粒中的SP6启动子下游插入长约1.4 kb的pBR322来源的DNA片段，其DNA片段上含有抗四环素基因) 为模板由SP6 RNA聚合酶经体外转录而得到的。

图1. Positive Control RNA：使用Control Primer可以扩增462 bp的DNA片段

■ 原理

PrimeScript One Step RT-PCR Kit Ver.2（Dye Plus）可在同一反应管中连续进行由PrimeScript RTase将RNA反转录为cDNA，再由TaKaRa Ex Taq HS扩增此cDNA的RT-PCR反应。

图2. PrimeScript One Step RT-PCR Kit Ver.2 (Dye Plus) 原理图

■ 保存

-20℃。

■ 试剂盒特点

RNA模板   适用于所有RNA        扩增片段大小   ～8 kb   PrimeScript 1 Step Enzyme Mix   PrimeScript RTase   DNA Polymerase (TaKaRa Ex Taq HS)   RNase Inhibitor   2 × 1 Step Buffer (Dye Plus)   含有反应Buffer   dNTP Mixture (终浓度400 μM)   One Step Enhancer Solution   色素、比重剂   1st strand cDNA合成用引物   特异性下游PCR Primer (Oligo-dT Primer和 Random引物不能使用)        操 作   在同一反应管中连续进行RT-PCR反应

■ 使用注意

1. 当同时需要进行数次RT-PCR反应时，应先配制各种试剂的混合液，然后再分装到每个反应管中。这样，可使所取的试剂体积更准确，减少试剂损失，避免重复分取同一试剂。同时也可以减少实验操作或实验之间产生的误差。

2. 使用PrimeScript 1 Step Enzyme Mix时，应轻轻混匀，避免起泡；分取之前要小心地离心收集到反应管底部；由于酶保存液中含有50%的甘油，粘度高，分取时应慢慢吸取。

3. 2 X 1 Step Buffer (Dye Plus) 使用前用Vortex充分混匀，离心后使用。

4. 酶制品应在实验前才从-20℃中取出，使用后也应立即放回-20℃中保存。

5. 为了防止Positive Control RNA分解，应尽量避免反复冻融。有条件的实验室最好保存于-70℃～-80℃。

6. 分装试剂时务必使用新的枪头，以防止样品间污染。

7. 使用本试剂盒进行反转录反应时必须使用特异性的反转录引物，Random Primer、Oligo dT Primer不能使用。

页面更新：2023-11-01 16:22:23