本产品基于碘化丙啶（Propidium, PI）染色方法分析细胞周期和凋亡。碘化丙啶是一种双链DNA染料，其嵌入双链DNA中可以 产生荧光，荧光的强度和双链DNA的量成正比。

        在正常细胞周期中，G0和G1期有1套染色体，G2和M期细胞 有2套染色体，S期介于两者之间。经PI染色后，处在不同细胞周 期中的细胞的荧光强度不同。假定G0和G1期的细胞荧光强度为 1，那么G2和M期的细胞的荧光强度为2，S期的细胞介于1和2之 间。

        细胞凋亡时，由于细胞核皱缩和DNA片段化，染色时DNA片 段会从打孔的细胞膜处丢失，流式细胞仪检测时，荧光强度小于 1，即Sub-G1峰或者凋亡细胞峰。

        细胞凋亡也可以用流式细胞仪观察细胞光散射的变化来检 测。凋亡前期，染色质皱缩，细胞密度增加，前向角光散色显著 降低。凋亡后期，细胞产生凋亡小体，前向角光散射和侧向角光 散色都显著降低。

产品组分：

编号	名称	50T
A	Propidium Iodide（20×）	1.25ml
B	RNase A（50×）	500 μl
C	Staining Buffer	25ml

本产品用于培养的贴壁细胞或者悬浮细胞检测，也可用于组织细胞检测。

自备耗材和设备：
1 ml 移液器
100-200 μl 移液器
旋窝混匀仪
流式细胞仪
PBS
75%乙醇

适用实验与操作过程：
1、细胞准备 贴壁细胞：弃细胞培养液，胰酶消化，制备单细胞悬液， 1000 g离心5分钟，弃上清。沉淀用1 ml预冷的PBS重悬。再次 1000 g离心5分钟，弃上清。 悬浮细胞：收集细胞悬液，1000 g离心5分钟，弃上清。沉淀 用1 ml预冷的PBS重悬。再次1000 g离心5分钟，弃上清。 组织细胞：将组织块用剪刀剪成尽量小的小块后，用0.25%的 胰酶消化0.5-1个小时。经过200-400目筛网过滤得到单细胞悬液。 1000 g离心5分钟，弃上清，沉淀用1 ml预冷的PBS重悬。再次 1000 g离心5分钟，弃上清。 注意，最后一次离心，弃上清后留50 μl上清，涡旋混匀。
2、细胞固定 细胞沉淀用1 ml -20 ℃预冷的75%乙醇轻轻混匀，4℃固定2小 时以上或者过夜。然后，1000 g离心5分钟，轻轻弃上清，沉淀用1 ml预冷的PBS重悬，1000 g离心5分钟，弃上清。
3、染色 PI染色工作液配置： 0.5 ml染色缓冲液（C液）中加入25μl PI 染液（A液）和10 μl RNase A（B液），混匀待用。每个细胞样品 加入0.5 ml配置好的PI染色工作液，轻轻混匀重悬细胞。37℃，避 光孵育30分钟，直接上流式细胞仪检测（5小时内完成为佳）。激 发波长为488 nm，检测红色荧光。 注意：每个检测细胞数不超过1×10⁶个。

1、PI具有毒性，操作时应注意防护，保护眼睛、避免吸入、并戴一次性手套。
2、PI存在淬灭现象，保存和使用过程中注意避光。

-20 ℃避光保存，有效期12个月。