StressMarq标记抗体常见问题解答
当您在使用StressMarq生产的标记抗体产品时,可能对产品或者是在实验时有遇到一些问题。本篇就是针对我们的标记抗体客户常见的一些问题解答,希望可以帮助到大家。如果里面列举的问题没有您所关注的,可以咨询我们的代理商上海金畔生物,协助您处理这些问题。
一、我怎么选择合适的荧光标记?
答:当选择荧光标记时,需要自问以下问题:
您显微镜上的滤光片/激光源是什么?
首先您需要知道您显微镜上的滤光片/激光源。他们将会决定您可以使用什么样的荧光蛋白或染料用来激发和显现。
您计划在一个样品上应用几个荧光素?
如果您在样品上使用一个以上的荧光素,那么您需要仔细挑选其他的荧光染料来最小化光谱重叠。您可以通过查看激发和发射光谱来决定使用哪一对染料,以降低他们的激发和发射光谱重叠。
如果您使用激光来激发荧光素,您只要确保您的激光 (ie. 488 nm) 不会同时激发两种以上的染料即可。如果该激光可触发到第二个荧光染料的激发光谱,那么在激发第一个染料时您可能会少量地激发到了第二个染料,而如果这时您的滤光片也能接受第二个染料的发射光,您就会得到不准确的信号。
然而如果您用来接收发射光谱的滤光片刚好不能接收到第二个染料发射的光,那么您拍得的图片就看不到这段重叠光谱,就没有问题。
二、抗体标记是怎么与抗体结合的?
答:标记与抗体是共价键结合的,非常稳定。
三、每个抗体可以结合几个标记?
答:根据被标记抗体和标记的不同,一个抗体可以结合1~10个标记。
四、抗体标记结合在抗体的什么位置?
答:抗体标记是结合在抗体游离的氨基基团上的。由于抗体Fc区域的游离氨基基团较多,所以标记通常是结合在抗体的Fc区域。然而标签很可能会与抗体决定簇结合从而使抗体与抗原的结合受阻。虽然这个可能性较低,但是还是会影响该抗体在某种应用中与抗原的结合能力。 • [indent]由于我们没办法控制标签与抗体的结合过程,所以我们不可能完全确定他们结合的位置。
五、标记抗体怎样保存?
答:所有保存在含50%甘油的缓冲液中的标记一抗都可以储存在-20℃。缓冲液中不含50%甘油的标记抗体应储存在4℃。
六、标记一抗稳定吗?
答:储存在4℃的标记一抗保质期18个月,-20℃保存的标记一抗保质期可达2年。请参见“标记抗体怎样保存?”了解更多储存信息。
七、为什么标记了的抗体和未标记的实验效果不同?
答:在罕见情况下,标记标签可能会阻挡了抗体结合部位,因此限制了抗体与抗原结合的能力。虽然这种情况罕见,但是确实有可能影响抗体在各种应用中结合抗原的效果。由于我们没办法控制标签与抗体的结合过程,所以我们不可能完全确定他们结合的位置。
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