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产品资料 – 用于二代测序的 NEBNext® 试剂 – 适用于 Illumina 测序平台/免疫测序
NEBNext® 免疫测序试剂盒（人） 收藏
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#E6320L
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74,739.00
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24 次反应
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相关产品
NEBNext® 免疫测序试剂盒（小鼠）
产品特点
• 通过对受体序列的深入分析，揭示复杂的免疫系统
• 对 B 细胞受体（BCR）和 T 细胞受体（TCR）进行富集和测序
• 制备 B 细胞和 T 细胞的全长免疫基因组库
• 使用唯一分子标签序列（UMI）准确定量转录本
• 使用用于生物信息流程（教程）的开源软件工具——pRESTO 分析数据
产品说明
概述：
免疫组库测序常常用来分析当下的和过去的免疫应答反应。最常应用领域包括：自身免疫性疾病的表征、肿瘤学、传染病中和抗体的发现、肿瘤浸润淋巴细胞以及用作研究残留病的工具。二代测序（NGS）平台在读长和通量方面的最新进展促进了免疫组库测序的发展。
NEBNext® 免疫测序试剂盒（人）通过对 B 细胞和 T 细胞全长免疫组库分析，能获得体细胞的所有突变信息。该试剂盒提供引物模块，可用于分析完整的 V、D、J 区域和 IgM、IgD、IgG、IgA、IgE 亚类，并分析 BCR 轻链、BCR 重链、TCRα 链和 TCRβ 链。该试剂盒还提供唯一分子标签序列（UMI），将来源于同一个分子的 PCR 产物组成共有序列，以便提高测序准确性，消除 PCR 偏差。Galaxy 平台提供一个开源软件工具——pRESTO，用于在本地或云端开展超强生物信息分析。为了确保不熟悉 Galaxy 平台的用户能成功使用分析软件，pRESTO 提供教学教程。
抗体和 TCR 结构的简化示意图：
免疫组建库流程:
产品描述：
使用唯一分子标签序列（UMI）实现克隆型的精准检测。比较克隆型频率：使用 10 ng 和 100 ng T 细胞总 RNA 制备人类 TCR 文库，在有或没有 UMI 情况下分别建库。根据有 UMI 的测序结果，对前 100 个高表达克隆型进行排序。重复建库，克隆型频率重叠绘制于图中。每个条形或圆点代表一个克隆，该克隆经过总读长分析或使用 UMI 过滤。使用 UMI 可对原始样本中的起始 RNA 分子进行绝对定量。当将克隆按照富集度从高到底进行排序，没有 UMI 的数据会导致 PCR 或测序扩增的偏差，从而误导样本中克隆型频率的分析。UMI 的使用通过对起始样本中 RNA 的绝对定量来校正偏差。使用 UMI 也可以在重复本之间实现更好的相关性，尤其是起始量较低时。各个文库向下抽样 500,000 reads。
使用 NEBNext 免疫测序试剂盒（人），能够在同一管中制备人 BCR 和 TCR 文库。分别使用 1 μg、100 ng 和 10 ng 人 PBMC 总 RNA（Takara Bio #636592）制备人 BCR+TCR 文库，每个起始量都做有平行实验。所有文库向下抽样 950,000 reads。使用 pRESTO 工具完成 reads 过滤、序列组装和基于 UMIs 组成共有序列。使用 MiGMAP 鉴别 V、D 和 J 区域。图（A）表示每个人类 PBMC 总 RNA 起始样本检测到的克隆型数量。图（B）表示各文库中 B 细胞链和 T 细胞链所占百分比。